一种桑叶有效成分的统筹提取方法_3

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[0086]实施例1
[0087](I)将桑叶洗净、晒干后粉碎过40目筛,按2:15 (W/V)加入浓度90v/v%乙醇-水溶液中,高速搅拌8min混合均匀,在温度30°C,超声功率6KW,频率20KHz的条件下高速搅拌超声1.5h,离心分离得一次醇提滤液和滤渣。
[0088](2)将滤渣按1: 15 (W/V)再次加入浓度60v/v%乙醇-水溶液中,在温度50°C,相同超声条件下,重复提取0.8h,离心分离得二次醇提滤液和滤渣。
[0089](3)合并两次醇提滤液,得桑叶醇提液。
[0090](4)将醇提滤渣放入转筒中,在温度50°C,真空度0.05MPa下,旋转脱去乙醇,至无醇味,再按1: 15 (W/V)与去离子水混合均匀,在温度60°C,超声功率6KW,频率20KHz的条件下高速搅拌超声1.2h,离心分离得一次水提滤液和滤渣。
[0091](5)将滤渣按1:10(W/V)再次与去离子水混合均匀,在温度40°C,超声功率4KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声lh,离心分离得二次水提滤液和滤渣。为保证充分利用,对二次水提滤渣按相同条件,重复提取2次,离心分离得水提滤液和滤渣。
[0092](6)合并所有水提滤液得桑叶水提液,在温度65°C,真空度0.0SMPa下,减压浓缩至原体积的1/10,得桑叶水提浓缩液。
[0093](7)将多次水提后的滤渣按1:8 (干重W/V)加入浓度3wt%氢氧化钠水溶液中,在温度80°C,3000rpm下,12刀孔上下四周分散搅拌,超声功率4KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声90min,使用三足离心机,在转速3000rpm下脱液8min,得碱洗后滤渣,经多次水洗至中性,使用三足离心机,转速1500rpm下脱水Smin ;将脱水后滤渣再按与碱洗相同料液比加入浓度3wt%&酸溶液,在相同条件下高速搅拌超声60min,使用三足离心机,在转速3000rpm下脱液8min,得酸洗后滤渣,加入浓度4wt%过氧化氢水溶液浸泡60min漂白。再用清水多次洗涤至中性,使用三足离心机,转速1500rpm下脱水8min后加入浓度70v/v%乙醇水溶液浸泡2次,离心处理脱除乙醇后于温度60°C,真空度0.06MPa下,干燥30min,得高溶胀性膳食纤维。
[0094](8)将桑叶水提浓缩液按1:4 (V/V)加入浓度95v/v%乙醇-水溶液,在温度4°C下,静置沉淀6小时,过滤得醇沉滤渣。
[0095](9)将醇沉滤渣与去离子水按1:8 (W/V)混合重新溶解,先按混合液总体积的2%加入ZTC1+1澄清剂A组分,在温度45°C下,每隔20min搅拌一次,保温2h ;再按混合液总体积的2%加入ZTC1+1澄清剂B组分,在温度55°C下,每隔30min搅拌一次,保温2.5h,过滤得桑叶粗多糖滤液和蛋白滤渣。
[0096](10)将桑叶粗多糖滤液使用喷雾干燥机在进风温度80°C,蠕动栗进料量为:200ml/h,风机空气流量:2m3/min,喷雾压力0.1Mpa,喷嘴口径:0.2mm,得桑叶粗多糖;将桑叶粗多糖进行精制:用去离子水溶解桑叶粗多糖,并调节PH值为2,静置后过滤,收集滤液;对过滤后滤液超滤,收集6000Da分子量组分,并浓缩至含糖量为20wt% ;然后加入乙醇调节至浓度为70v/v%,于:TC静置6小时,过滤收集沉淀,沉淀分别依次用95%乙醇、丙酮、石油醚洗涤2次,在真空度0.06MPa,温度60°C下干燥得高纯品桑叶多糖,纯度为60wt% ;
[0097](11)将桑叶蛋白滤渣加入去离子水配制成Iwt %悬浮液,调节pH(值)=7.0后按总体积的50U/ml加入Alcalase蛋白酶,在温度50°C下,水解4h,灭除酶活性后,再调节pH(值)=6.5按总体积的80U/ml加入Papain蛋白酶,在温度35°C下,水解3h,过滤得蛋白水解液,灭除Papain蛋白酶活性后,即在90°C下保温15min后冷却至室温,过DlOl大孔树脂,流出液冷冻干燥,得桑叶低聚肽。
[0098](12)将桑叶醇提液在温度60°C,真空度0.06MPa下,浓缩至原体积的1/10,使用低速离心机4000rpm,离心3min,得色素糊浆和离心分离掉的占总体积80%的下层液体;取离心分离掉的下层液体与石油醚按1:1的体积比混合,萃取3次,至石油醚层基本无颜色,得下层萃余液和萃取的上层色素液;在萃取的色素液中加入0.2w/w%的碳酸钠溶液,经旋转蒸发回收石油醚后,与色素糊浆合并为混合色素糊浆。
[0099](13)将色素糊浆制成叶绿素铜钠盐的步骤如下:
[0100](a)将色素糊楽按10:35:10:20:35 (w/v/v v/v)分别加入石油醚、丙酮、75wt%乙醇液和2wt %氢氧化钠水溶液,调节pH = 12,在温度45°C,加热搅拌皂化45min,得皂化液;
[0101](b)分离除去上层的石油醚层液,留用下层的碱水层液;
[0102](c)将碱水层液体浓缩至原体积的1/2,冷却至室温,得水溶性叶绿素;
[0103](d)水溶性叶绿素加入2wt %盐酸调节pH = 6,按5:1体积加入饱和硫酸铜溶液,在50°C温度下铜代lh,在真空度0.06MPa下使用滤纸抽滤除去沉淀后得到铜代母液,滤纸的孔径为80 μπι ;
[0104](e)铜代母液加入2被%盐酸调节pH = 2.1,在20°C下,避光密封保存,静置2h,过滤得粗铜酸滤饼。
[0105](f)滤饼用50°C热水淋洗2次,用40v/v%乙醇溶液淋洗I次,再用石油醚淋洗2次后在真空度0.06MPa下抽滤,得精铜酸滤饼;
[0106](g)精铜酸滤饼按质量比体积1:1加入丙酮溶解,再加入5wt%氢氧化钠乙醇溶液调节pH= 11.5,重结晶成盐,过滤并用无水乙醇洗涤2次,得叶绿素铜钠盐粗品;
[0107](h)叶绿素铜钠盐粗品加2%盐酸溶解调节pH为7.5,去除漂浮物后,在102°C条件下干燥,冷却至常温粉碎得到叶绿素铜钠盐产品,其吸光度值E(lcm,l% ) = 264,吸光度比为3.4,含量为73wt% ;
[0108](14)将桑叶醇提浓缩液的石油醚萃余液用HZ-008阳离子交换树脂吸附lh,纯净水洗柱至流出液无颜色,收集水洗液,浓缩后真空干燥,得桑叶阳离子黄酮产品。
[0109](15)将吸附后阳离子用5?八%浓度氨水洗脱至无颜色,收集洗脱液,浓缩到原体积的1/3,将浓缩液上201X7阴离子交换树脂柱吸附,先用纯净水洗脱,收集水洗液;再用70V/V%Z醇洗脱,收集洗脱液,浓缩后真空干燥,得桑叶阴离子黄酮。
[0110](16)制备桑叶1-脱氧野尻霉素产品:
[0111](a)将阴离子水洗液浓缩后按1:10(W/W)与硅胶湿法拌样制成硅胶柱,赶去其中的气泡,用配比依次为 5:95 (v/v) UO: 90 (v/v) ,15:85 (v/v),20:80 (v/v)和 25:75 (v/v)的甲醇-乙酸乙酯作为展开剂,洗脱5次,每次洗脱的展开剂用液量依次为硅胶拌样体积的0.8倍、2倍、10倍、10倍、4倍;
[0112](b)分别收集不同时间内流出物,经气相色谱硅烷化法或薄层色谱法检测流出物1-脱氧野尻霉素含量,将得到的流出物编为两组,一组含量在55wt %,另一组为82wt %,分别在真空度0.06MPa,温度55°C下干燥,得两种高含量的桑叶1-脱氧野尻霉素产品。
[0113]实施例2
[0114](I)将桑叶洗净、晒干后粉碎过40目筛,按1:8(W/V)加入浓度90v/v%乙醇-水溶液中,高速搅拌8min混合均匀,在温度30°C,超声功率6KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声lh,离心分离得一次醇提滤液和滤渣。
[0115](2)将滤渣按1: 10 (W/V)再次加入浓度75v/v%乙醇-水溶液中,在温度45°C,相同超声条件下,重复提取lh,离心分离得二次醇提滤液和滤渣。
[0116](3)合并两次醇提滤液,得桑叶醇提液。
[0117](4)将醇提滤渣放入转筒中,在温度50°C,真空度0.05MPa下,旋转脱去乙醇,至无醇味。再按1:10 (ff/ν)与去离子水混合均匀,在温度60°C,超声功率6KW,频率20KHZ的条件下高速搅拌超声lh,离心分离得一次水提滤液和滤渣。
[0118](5)将滤渣按1:10(W/V)再次与去离子水混合均匀,在温度40°C,超声功率4KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声lh,离心分离得二次水提滤液和滤渣。为保证充分利用,对二次水提滤渣按相同条件,重复提取2次,离心分离得水提滤液和滤渣。
[0119](6)合并所有水提滤液得桑叶水提液,在温度60°C,真空度0.06MPa下,减压浓缩至原体积的1/10,得桑叶水提浓缩液。
[0120](7)将多次水提后的滤渣按1:10 (干重W/V)加入浓度5wt%氢氧化钠水溶液中,在温度60°C,5000rpm下,18刀孔上下四周分散搅拌,超声功率4KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声60min,使用三足离心机,在转速5000rpm下脱液15min,得碱洗后滤渣,经多次水洗至中性,使用三足离心机,转速3000rpm下脱水1min ;将脱水后滤渣再按与碱洗相同料液比加入浓度5被%盐酸溶液,在相同条件下高速搅拌超声45min,使用三足离心机,在转速5000rpm下脱液15min,得酸洗后滤渣,加入浓度4wt%过氧化氢水溶液浸泡60min漂白。再用清水多次洗涤至中性,使用三足离心机,转速OOOrpm下脱水1min后加入浓度100v/v%乙醇水溶液浸泡2次,离心处理脱除乙醇后于温度60°C,真空度0.0SMPa下,干燥lOmin,得高溶胀性膳食纤维。
[0121](8)将桑叶水提浓缩液按1:3 (V/V)加入浓度100v/v%乙醇-水溶液,在温度4°C下,静置沉淀6小时,过滤得醇沉滤渣。
[0122](9)将醇沉滤渣与去离子水按1: 10 (W/V)混合重新溶解,先按混合液总体积的I %加入ZTC1+1澄清剂A组分,在温度45°C下,每隔20min搅拌一次,保温2h ;再按混合液总体积的1%加入ZTC1+1澄清剂B组分,在温度55°C下,每隔30min搅拌一次,保温3h,过滤得桑叶粗多糖滤液和蛋白滤渣。
[0123](10)将桑叶粗多糖滤液使用喷雾干燥机在进风温度140°C,蠕动栗进料量为:1000ml/h,风机空气流量:5m3/min,喷雾压力0.4Mpa,喷嘴口径:1.5mm ;得桑叶粗多糖;将桑叶粗多糖进行精制:用去离子水溶解桑叶粗多糖,并调节PH值为3,静置后过滤,收集滤液;对过滤后滤液超滤,收集12000Da分子量组分,并浓缩至含糖量为40wt% ;然后加入乙醇调节至浓度为75v/v%,于4°C静置8小时,过滤收集沉淀,沉淀分别依次用100 %乙醇、丙酮、石油醚洗涤3次,在真空度0.08MPa,温度80°C下干燥得高纯品桑叶多糖,纯度为80wt% ; (11)将桑叶蛋白滤渣加入去离子水配制成2wt%悬浮液,调节pH(值)=7.5后按总体积的45U/ml加入Alcalase蛋白酶,在温度30°C下,水解5h,灭除酶活性后,再调节pH(值)=6.5按总体积的100U/ml加入Papain蛋白酶,在温度30°C下,水解2h,过滤得蛋白水解液,灭除Papain蛋白酶活性后,即在100°C下保温30min后冷却至室温,过DlOl大孔树脂,流出液冷冻干燥,得桑叶低聚肽。
[0124](12)将桑叶醇提液在温度50°C,真空度0.08MPa下,浓缩至原体积的1/20,使用低速离心机lOOOrpm,离心5min,得色素糊浆和离心分离掉的占总体积90%的下层液体;取离心分离掉的下层液体与石油醚按1:1的体积比混合,萃取3次,至石油醚层基本无颜色,得下层萃余液和萃取的上层色素液;在萃取的色素液中加入0.2w/w%的碳酸钠溶液,经旋转蒸发回收石油醚后,与所述色素糊浆合并为混合色素糊浆。
[0125](13)将色素糊浆制成叶绿素铜钠盐的步骤如下:
[0126](a)将色素糊楽按12:45:10:20:25 (w/v/v v/v)分别加入石油醚、丙酮、70wt%乙醇液和8wt %氢氧化钠水溶液,调节pH = 11,在温度50°C,加热搅拌皂化45min,得皂化液;
[0127](b)分离除去上层的石油醚层液,留用下层的碱水层液;
[0128](c)将碱水层液体浓缩至原体积的1/2,冷却至室温,得水溶性叶绿素;
[0129](d)水溶性叶绿素加入2wt %盐酸调节pH = 7,按4:1体积加入饱和硫酸铜溶液,在50°C温度下铜代l
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