一种桑叶有效成分的统筹提取方法_4

文档序号:9518254阅读:来源:国知局
h,在真空度0.06MPa下使用滤纸抽滤除去沉淀后得到铜代母液,滤纸的孔径为80 μπι ;
[0130](e)铜代母液加入2被%盐酸调节pH = 2.2,在20°C下,避光密封保存,静置3h,过滤得粗铜酸滤饼。
[0131](f)滤饼用50°C热水淋洗2次,用40v/v%乙醇溶液淋洗2次,再用石油醚淋洗2次后在真空度0.09MPa下抽滤,得精铜酸滤饼;
[0132](g)精铜酸滤饼按质量比体积1:1加入丙酮溶解,再加入5wt%氢氧化钠乙醇溶液调节pH = 12,重结晶成盐,过滤并用无水乙醇洗涤I次,得叶绿素铜钠盐粗品;
[0133](h)叶绿素铜钠盐粗品加2%盐酸溶解调节pH为7,去除漂浮物后,在100°C条件下干燥,冷却至常温粉碎得到叶绿素铜钠盐产品,其吸光度值E(lcm,l% ) = 268,吸光度比为3.4,含量为75wt% ;
[0134](14)将桑叶醇提浓缩液的石油醚萃余液用001X7型阳离子交换树脂吸附1.5h,纯净水洗柱至流出液无颜色,收集水洗液,浓缩后真空干燥,得桑叶阳离子黄酮产品。
[0135](15)将吸附后阳离子用5¥八%浓度氨水洗脱至无颜色,收集洗脱液,浓缩到原体积的1/3,将浓缩液上201X7阴离子交换树脂柱吸附,先用纯净水洗脱,收集水洗液;再用70V/V%Z醇洗脱,收集洗脱液,浓缩后真空干燥,得桑叶阴离子黄酮。
[0136](16)制备桑叶1-脱氧野尻霉素产品:
[0137](a)将阴离子水洗液浓缩后按1:10(W/W)与硅胶湿法拌样制成硅胶柱,赶去其中的气泡,用配比依次为 5:95 (v/v) UO: 90 (v/v) ,15:85 (v/v),20:80 (v/v)和 25:75 (v/v)的甲醇-丙酮作为展开剂,洗脱5次,每次洗脱的展开剂用液量依次为硅胶拌样体积的I倍、2倍、10倍、10倍、4倍;
[0138](b)分别收集不同时间内流出物,经气相色谱硅烷化法或薄层色谱法检测流出物1-脱氧野尻霉素含量,将得到的流出物编为两组,一组含量为53wt %,另一组为84wt %,分别在真空度0.06MPa,温度55°C下干燥,得两种高含量的桑叶1-脱氧野尻霉素产品。
[0139]实施例3
[0140](I)将桑叶洗净、晒干后粉碎过40目筛,按1:10 (W/V)加入浓度80v/v%乙醇-水溶液中,高速搅拌8min混合均匀,在温度45°C,超声功率6KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声lh,离心分离得一次醇提滤液和滤渣。
[0141](2)将滤渣按1:8(W/V)再次加入浓度70v/v%乙醇-水溶液中,在温度45°C,相同超声条件下,重复提取lh,离心分离得二次醇提滤液和滤渣。
[0142](3)合并两次醇提滤液,得桑叶醇提液。
[0143](4)将醇提滤渣放入转筒中,在温度50°C,真空度0.05MPa下,旋转脱去乙醇,至无醇味。再按1:10(w/v)与去离子水混合均匀,在温度40°C,超声功率4KW,频率15KHZ的条件下高速搅拌超声lh,离心分离得一次水提滤液和滤渣。
[0144](5)将滤渣按2:15(W/V)再次与去离子水混合均匀,在温度40°C,超声功率4KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声lh,离心分离得二次水提滤液和滤渣。为保证充分利用,对二次水提滤渣按相同条件,重复提取3次,离心分离得水提滤液和滤渣。
[0145](6)合并所有水提滤液得桑叶水提液,在温度65°C,真空度0.0SMPa下,减压浓缩至原体积的1/20,得桑叶水提浓缩液。
[0146](7)将多次水提后的滤渣按1:10 (干重W/V)加入浓度3wt%氢氧化钠水溶液中,在温度60°C,4000rpm下,16刀孔上下四周分散搅拌,超声功率4KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声60min,使用三足离心机,在转速4000rpm下脱液lOmin,得碱洗后滤渣,经多次水洗至中性,使用三足离心机,转速2000rpm下脱水9min ;将脱水后滤渣再按与碱洗相同料液比加入浓度3被%醋酸溶液,在相同条件下高速搅拌超声60min,使用三足离心机,在转速3500rpm下脱液lOmin,得酸洗后滤渣,加入浓度4wt%过氧化氢水溶液浸泡40min漂白。再用清水多次洗涤至中性,使用三足离心机,转速2500rpm下脱水至含湿率80%后加入浓度70v/v%乙醇水溶液浸泡2次,离心处理脱除乙醇后于温度60°C,真空度0.06MPa下,干燥30min,得高溶胀性膳食纤维。
[0147](8)将桑叶水提浓缩液按1:4 (V/V)加入浓度95v/v%乙醇-水溶液,在温度4°C下,静置沉淀6小时,过滤得醇沉滤渣。
[0148](9)将醇沉滤渣与去离子水按1:10 (W/V)混合重新溶解,先按混合液总体积的I %加入ZTC1+1澄清剂A组分,在温度45°C下,每隔20min搅拌一次,保温2.5h ;再按混合液总体积的1%加入ZTC1+1澄清剂B组分,在温度55°C下,每隔30min搅拌一次,保温3h,过滤得桑叶粗多糖滤液和蛋白滤渣。
[0149](10)将桑叶粗多糖滤液使用喷雾干燥机在进风温度1000°C,蠕动栗进料量为:800ml/h,风机空气流量:3m3/min,喷雾压力0.2Mpa,喷嘴口径:0.8mm,得桑叶粗多糖;将桑叶粗多糖进行精制:用去离子水溶解桑叶粗多糖,并调节PH值为2,静置后过滤,收集滤液;对过滤后滤液超滤,收集1000Da分子量组分,并浓缩至含糖量为25wt% ;然后加入乙醇调节至浓度为72v/v%,于:TC静置7小时,过滤收集沉淀,沉淀分别依次用95%乙醇、丙酮、石油醚洗涤2次,在真空度0.08MPa,温度80°C下干燥得高纯品桑叶多糖,纯度为65wt% ;
[0150](11)将桑叶蛋白滤渣加入去离子水配制成2wt%悬浮液,调节pH(值)=7.0后按总体积的45U/ml加入Alcalase蛋白酶,在温度50°C下,水解4h,灭除酶活性后,再调节pH(值)=6.5按总体积的80U/ml加入Papain蛋白酶,在温度30°C下,水解3h,过滤得蛋白水解液,灭除Papain蛋白酶活性后,即在95°C下保温18min后冷却至室温,过DlOl大孔树脂,流出液冷冻干燥,得桑叶低聚肽。
[0151](12)将桑叶醇提液在温度70°C,真空度0.06MPa下,浓缩至原体积的1/10,使用低速离心机lOrpm,离心3min,得色素糊浆和离心分离掉的占总体积80%的下层液体;取离心分离掉的下层液体与石油醚按2:1的体积比混合,萃取2次,至石油醚层基本无颜色,得下层萃余液和萃取的上层色素液;在萃取的色素液中加入0.2w/w%的碳酸钠溶液,经旋转蒸发回收石油醚后,与所述色素糊浆合并为混合色素糊浆。
[0152](13)将色素糊浆制成叶绿素铜钠盐的步骤如下:
[0153](a)将色素糊楽按10:40:12:28:20 (w/v/v v/v)分别加入石油醚、丙酮、75wt%乙醇液和2wt %氢氧化钠水溶液,调节pH = 11,在温度45°C,加热搅拌皂化45min,得皂化液;
[0154](b)分离除去上层的石油醚层液,留用下层的碱水层液;
[0155](C)将碱水层液体浓缩至原体积的1/3,冷却至室温,得水溶性叶绿素;
[0156](d)水溶性叶绿素加入2wt %盐酸调节pH = 5,按3:1体积加入饱和硫酸铜溶液,在50°C温度下铜代lh,在真空度0.07MPa下使用滤纸抽滤除去沉淀后得到铜代母液,滤纸的孔径为80 μ?? ;
[0157](e)铜代母液加入2被%盐酸调节?!1 = 2.0,在22°(:下,避光密封保存,静置2.511,过滤得粗铜酸滤饼。
[0158](f)滤饼用50°C热水淋洗I次,用40v/v%乙醇溶液淋洗I次,再用石油醚淋洗2次后在真空度0.07MPa下抽滤,得精铜酸滤饼;
[0159](g)精铜酸滤饼按质量比体积1:1.8加入丙酮溶解,再加入5?〖%氢氧化钠乙醇溶液调节PH= 11.5,重结晶成盐,过滤并用无水乙醇洗涤2次,得叶绿素铜钠盐粗品;
[0160](h)叶绿素铜钠盐粗品加2%盐酸溶解调节pH为7,去除漂浮物后,在102°C条件下干燥,冷却至常温粉碎得到叶绿素铜钠盐产品,其吸光度值E(lcm,l% ) = 274,吸光度比为3.3,含量为77wt% ;
[0161](14)将桑叶醇提浓缩液的石油醚萃余液用001X7型阳离子交换树脂吸附lh,纯净水洗柱至流出液无颜色,收集水洗液,浓缩后真空干燥,得桑叶阳离子黄酮产品。
[0162](15)将吸附后阳离子用5?八%浓度氨水洗脱至无颜色,收集洗脱液,浓缩到原体积的1/3,将浓缩液上201X7阴离子交换树脂柱吸附,先用纯净水洗脱,收集水洗液;再用70V/V%Z醇洗脱,收集洗脱液,浓缩后真空干燥,得桑叶阴离子黄酮。
[0163](16)制备桑叶1-脱氧野尻霉素产品:
[0164](a)将阴离子水洗液浓缩后按1:10(W/W)与硅胶湿法拌样制成硅胶柱,赶去其中的气泡,用配比依次为 5:95 (v/v) UO: 90 (v/v) ,15:85 (v/v),20:80 (v/v)和 25:75 (v/v)的甲醇-乙酸乙酯作为展开剂,洗脱5次,每次洗脱的展开剂用液量依次为硅胶拌样体积的
0.8倍、2倍、10倍、10倍、6倍;
[0165](b)分别收集不同时间内流出物,经气相色谱硅烷化法或薄层色谱法检测流出物1-脱氧野尻霉素含量,将得到的流出物编为两组,一组含量为56wt %,另一组为Slwt %,分别在真空度0.06MPa,温度55°C下干燥,得两种高含量的桑叶1-脱氧野尻霉素产品。
[0166]实施例4
[0167](I)将桑叶洗净、晒干后粉碎过50目筛,按2:15 (W/V)加入浓度70v/v%乙醇-水溶液中,高速搅拌5min混合均匀,在温度50°C,超声功率4KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声lh,离心分离得一次醇提滤液和滤渣。
[0168](2)将滤渣按1:10(W/V)再次加入浓度70V/V%Z醇-水溶液中,在温度45°C,相同超声条件下,重复提取1.5h,离心分离得二次醇提滤液和滤渣。
[0169](3)合并两次醇提滤液,得桑叶醇提液。
[0170](4)将醇提滤渣放入转筒中,在温度55°C,真空度0.06MPa下,旋转脱去乙醇,至无醇味。再按2:15(ff/V)与去离子水混合均匀,在温度40°C,超声功率4KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声lh,离心分离得一次水提滤液和滤渣。
[0171](5)将滤渣按1:10(W/V)再次与去离子水混合均匀,在温度40°C,超声功率4KW,频率15KHz的条件下高速搅拌超声lh,离心分离得二次水提滤液和滤渣。为保证充分利用,对二次水提滤渣按相同条件,重复提取2次,离心分离得水提滤液和滤渣。
[0172](6)合并所有水提滤液得桑叶水提液,在温度65°C,真空度0.0SMPa下,减压浓缩至原体积的1/10,得桑叶水提浓缩液。
[0173](7)将多次水提后的滤渣按1:10 (干重W/V)加入浓度3wt%氢氧化钠水溶液中,在温度60°C,35000rpm下,15刀孔上下四周分散搅拌,超声功率6KW,频率20KHz的条件下高速搅拌超声60min,使用三足离心机,在转速4000rpm下脱液12min,得碱洗后滤渣,经多次水洗至中性,使用三足离心机,转速2500rpm下脱水至含湿率120% ;将脱水后滤渣再按与碱洗相同料液比加入浓度3被%盐酸溶液,在相同条件下高速搅拌超声60min,使用三足离心机,在转速3000rpm下脱液8min,得酸洗后滤渣,加入浓度4wt%过氧化氢水溶液浸泡60min漂白。再用清水多次洗涤至中性,使用三足离心机,转速3000rpm下脱水至含湿率120%后加入浓度70V/V%Z醇水溶液浸泡2次,离心处理脱除乙醇后于温度80°C,真空度
0.06MPa下,干燥30min,得高溶胀性膳食纤维。
[0174](8)将桑叶水提浓缩液按1:4 (V/V)加入浓度95v/v%乙醇-水溶液,在温度2°C下,静置沉淀8小时,过滤得醇沉滤渣。
[0175](9)将醇沉滤渣与去离子水按1: 10 (W/V)混合重新溶解,先按混合液总体积的I %加入ZTC1+1澄清剂A组分,在温度45°C下,每隔20min搅拌一次,保温2h ;再按混合液总体积的1%加入ZTC1+1澄清剂B组分,在温度55°C下,每隔30min搅拌一次,保温3h,过滤得桑叶粗多糖滤液和蛋白滤渣。
[0176](10)将桑叶粗多糖滤液使用喷雾干燥机在进风温度120°C,蠕动栗进料量为:500ml/h,风机空气流量:4m3/min,喷雾压力0.3Mpa,喷嘴口径:1.2mm,得桑叶粗多糖;将桑叶粗多糖进
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