水率彡250% ； (8)在所述浓缩液B3中加入乙醇，于2-4°C下沉淀6-8h，过滤得滤渣C5; (9)所述滤渣C5用去离子水重新溶解，并依次加入ZTC1+1澄清剂A和B组分，在45-55°C下，每隔20-30min搅拌一次，保温5_6h，过滤得粗多糖滤液T1和蛋白滤渣D1 ; (10)粗多糖滤液T1经喷雾干燥，即得桑叶粗多糖； (11)将蛋白滤渣D1加去离子水配置成悬浮液，加入Alcalase蛋白酶，调节pH=7-7.5，在45-50°C水解4_5小时；将水解液灭除酶活性冷却至室温后再加入Papain蛋白酶，调节pH = 6-6.5，在30-35°C水解2_3h，过滤得蛋白水解液D2 ;将蛋白水解液D2灭除酶活性后冷却至室温过大孔树脂，流出的过柱液冷冻干燥，得桑叶低聚肽； (12)将所述滤液A3在温度50-70°C真空度0.06-0.08MPa下减压浓缩到原体积的1/10-1/20，形成色素糊浆的水状液，经低速离心分离，得到色素糊浆和离心分离掉的下层液体；取离心分离掉的下层液体与石油醚按1?2:1的体积比混合，萃取2-4次，至石油醚层基本无颜色即完成脱色过程，得下层萃余液A4和萃取的上层色素液；在萃取的色素液中加入0.2-0.5w/w%碳酸钠溶液，经旋转蒸发回收石油醚后，与所述色素糊浆合并为混合色素糊浆S1 ; (13)所述混合色素糊浆S1制成桑叶叶绿素铜钠盐产品的具体步骤如下: (a)将所述混合色素糊浆S1置于乙醇水溶液、丙酮、氢氧化钠水溶液和石油醚的混合溶剂中，调节水层pH值至11?12，在温度45?50 °C下，搅拌皂化反应30?45min ； 所述混合溶剂中，乙醇水溶液、丙酮、氢氧化钠水溶液和石油醚的体积比为5?10:8?10:5?7:15?20 ;所述混合色素糊浆S1与乙醇水溶液的质量体积比为1:10?15 ; (b)分离除去上层的石油醚层液，留用下层的碱水层液； (c)将所述碱水层液浓缩至原体积的1/2?1/3，冷却至室温，即得含水溶性叶绿素的混合液； (d)将所述含水溶性叶绿素的混合液加入稀盐酸调节pH值至5?7，加入饱和硫酸铜溶液，加热铜代，过滤后得铜代母液； (e)所述铜代母液加入稀盐酸调节pH值至2.0?2.2，静置结晶后过滤得滤渣； (f)将所述滤渣分别通过如下三次次洗涤过程: ①用50?60°C去离子水淋洗1?2次，滗去水液； ②用30?40v/v%的乙醇水溶液淋洗1?2次，至乙醇层刚出现绿色，滗去溶液； ③用石油醚淋洗1?2次，至石油醚层刚出现绿色，滗去溶液，抽滤得滤饼； (g)将所述滤饼溶解于丙酮中，再加入氢氧化钠乙醇溶液调节pH值至11?12，然后重结晶; (h)经重结晶所得结晶物加稀盐酸调节pH值至7?8，去除漂浮物后，在小于105°C条件下干燥，冷却至常温粉碎得到叶绿素铜钠盐产品； (14)将所述下层萃余液A4用阳离子交换树脂吸附，纯净水洗柱，收集水洗液H1，H1浓缩后真空干燥，得桑叶阳离子黄酮产品； (15)将步骤(14)中吸附后的阳离子交换树脂再用氨水洗脱，收集氨水洗脱液浓缩到原体积的1/3-1/5，得Z1 ；Z1上阴离子交换树脂吸附，纯净水洗柱，收集水洗液Y1 ;再用50-70v/v%乙醇对已水洗后的阴离子树脂洗脱，收集乙醇洗脱液H2，将H2浓缩后真空干燥，得桑叶阴离子黄酮产品； (16)将所述水洗液Y1制备桑叶1-脱氧野尻霉素产品，具体步骤如下: a)将所述水洗液Y1浓缩，通过1:10-20(W/W)硅胶湿法拌样硅胶层析柱，利用甲醇-乙酸乙酯或甲醇-丙酮为展开剂梯度洗脱； 梯度洗脱时，用不同比例但成分相同的展开剂；共分5次洗脱，5次洗脱展开剂的成分配比为:甲醇与乙酸乙酯或丙酮的配比依次为5:95 (v/v)、10:90(v/v)、15:85(v/v)、20:80(v/v)和25:75(v/v);每次洗脱的展开剂用液量为:第一次洗脱，用液量为硅胶拌样体积的0.8-1.5倍；第二次洗脱，用液量为硅胶拌样体积的1.6-3倍；第三次洗脱，用液量为硅胶拌样体积的6.4-12倍；第四次洗脱，用液量为硅胶拌样体积的6.4-12倍；第五次洗脱，用液量为硅胶拌样体积的3.2-6倍； b)分别收集不同时间内流出物，经气相色谱硅烷化法或薄层色谱法检测流出物1-脱氧野尻霉素含量，将得到的流出物编为两组，一组含量在50-70wt %间，另一组为大于80wt%，分别在真空度0.06-0.08MPa，温度50_55°C下干燥，得两种高含量的桑叶1_脱氧野尻霉素产品。2.根据权利要求1所述的一种桑叶有效成分的统筹提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，桑叶粉为经洗净、烘干和粉碎后过40-60目筛的桑叶粉；乙醇-水溶液的浓度为70-90v/v% ;桑叶粉与乙醇-水溶液的比例为1-2:15 (W/V);混合均匀是指高速搅拌5_8min至均匀，超声萃取采用的超声功率为4-6KW，超声频率为15-20KHZ，萃取时间为0.8-1.5h。3.根据权利要求1所述的一种桑叶有效成分的统筹提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，乙醇-水溶液的浓度为60-80v/v%，所述滤渣C1与乙醇-水溶液的比例为1-2:15(W/V);超声萃取采用的超声功率为4-6KW，超声频率为15_20KHz，萃取时间为0.8-1.5h04.根据权利要求1所述的一种桑叶有效成分的统筹提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述减压蒸发脱去乙醇是指在真空度0.04-0.06MPa，温度50_55°C下脱除乙醇，至无醇味；滤渣C2与水的混合比例为1-2:15(W/V);超声萃取采用的超声功率为4-6KW，超声频率为15-20KHz，萃取时间为1-1.2h ； 所述步骤(5)中，滤渣C3与水的混合比例为1-2:15 (W/V);超声萃取采用的超声功率为4-6KW，超声频率为15-20KHZ，萃取时间为1-1.2h ； 为充分利用，所述步骤(5)重复2?3次，并将滤液合并； 所述步骤(6)中，所述浓缩是指在真空度0.06-0.0810^，温度60-65°(:下浓缩至原体积的 1/10-1/20。5.根据权利要求1所述的一种桑叶有效成分的统筹提取方法，其特征在于，所述步骤(7)制备得到高溶胀性膳食纤维的具体步骤为: 1)将滤渣C4与碱液混合，加热至60?80°C，高速剪切搅拌并超声，然后离心过滤得滤渣； 2)所述滤渣经清水多次洗涤至中性，离心脱水得碱洗疏化膳食纤维； 3)将所述碱洗疏化膳食纤维与酸液混合，加热至60?80°C，高速剪切搅拌并超声，离心过滤得酸洗后滤渣； 4)将所述酸洗后滤渣浸泡漂白，再用清水多次洗涤至中性，并离心脱水得酸洗疏化膳食纤维； 5)用浓度多70v/v%的乙醇水溶液浸泡所述酸洗疏化膳食纤维，离心处理脱除乙醇且除去残余脂溶性后干燥，即得高溶胀性桑叶膳食纤维； 其中，所述的碱液为3-5wt%*度的氢氧化钠水溶液；所述滤渣C4与碱液混合的料碱液比为1:8?10(干重W/V)； 所述的酸液为3-5wt%浓度的盐酸或醋酸；所述碱洗疏化膳食纤维与酸液混合的料酸液比为1:8?10(干重W/V)； 所述高速剪切搅拌是指在3000?5000rpm下，12?18刀孔上下四周分散搅拌；所述超声的功率为3?5KW，频率范围为15?20KHz，超声时间45?90min ;步骤1)和3)中的离心过滤是指使用三足离心机，在转速3000?5000rpm下脱液8?15min ;步骤2)和4)中的离心脱水是指使用三足离心机，转速1500?3000rpm下脱水8?lOmin或至含湿率80?120% ;步骤5)离心处理是指使用三足离心机，转速1500-3000rpm下脱乙醇8?lOmin或至含湿率20?50% ; 所述浸泡漂白是指将所述酸洗后滤渣在浓度为4wt%的过氧化氢水溶液中浸泡40?60min ； 步骤5)中，浸泡、离心处理反复2?3次；干燥采用真空干燥，干燥温度60?80°C，真空度为0.06-0.09MPa，干燥时间10?30min。6.根据权利要求1所述的一种桑叶有效成分的统筹提取方法，其特征在于，所述步骤(8)中，所述乙醇浓度为80-100v/v%，浓缩液B3与乙醇的比例为1:3-5; 所述步骤(9)中，所述滤渣C5与去离子水的比例为1:8-10 (W/V) ;ZTC1+1澄清剂A和B组分的加入量为总体积的1_2%。其使用方法为:先按总体积的1-2%加入澄清剂A组分，在45-50°C下，每隔20min搅拌一次，保温1.5-2.5h，再按总体积的1_2%加入澄清剂B组分，在50-55°C下，每隔30min搅拌一次，保温2.5-3.5h ； 所述步骤(10)中，所述喷雾干燥是指使用喷雾干燥机在进风温度80-140°C，蠕动栗进料量为:200-1000ml/h，风机空气流量:2_5m3/min，喷雾压力0.1-0.4MPa，喷嘴口径:0.2-1.5mm ； 进一步地，将所述步骤(10)所制得的所述桑叶粗多糖进行精制:用去离子水溶解桑叶粗多糖，并调节pH值为2-3，静置后过滤，收集滤液；对过滤后滤液超滤，收集6000-12000Da分子量组分，并浓缩至含糖量为20-40wt% ;然后加入乙醇调节至浓度为70-75v/v%，于3-4°C静置6-8小时，过滤收集沉淀，沉淀分别依次用95-100%乙醇、丙酮、石油醚洗涤2_3次，在真空度0.06-0.08MPa，温度60_80°C下干燥得高纯品桑叶多糖，纯度为60_80wt%。7.根据权利要求1所述的一种桑叶有效成分的统筹提取方法，其特征在于，所述步骤(11)中，将蛋白滤渣D1加去离子水配置成悬浮液的质量浓度为1-2% ；Alcalase蛋白酶按总体积的30-50U/ml加入；Papain蛋白酶按总体积的80_100U/ml加入；灭除酶活性是指将蛋白水解液在90-100°C下保温15-30min ;所述大孔树脂为国产D001或AB-8型； 所述步骤(12)中，所述低速离心分离是指使用低速离心机0?4000rpm，离心3?5min，分离掉的下层液体占总体积的80?90%。8.根据权利要求1所述的一种桑叶有效成分的统筹提取方法，其特征在于，所述步骤(13)制成桑叶叶绿素铜钠盐产品，其中，所述混合溶剂中，乙醇水溶液的浓度为50?75v/v%，氢氧化钠水溶液的浓度为2?10wt% ； 所述加热铜代的温度为45?50°C，时间为45?60min ;加入饱和硫酸铜溶液与水溶性叶绿素溶液的体积比为2?5:1 ;过滤后得铜代母液是指使用快速滤纸，在真空度0.06?0.09MPa下抽滤除去沉淀后得到铜代母液；所述快速滤纸的孔径为80?120 μπι; 所述静置结晶是指在室温条件20?25°C下，避光密封保存，静置2?3h ; 所述抽滤是指使用快速滤纸孔径80?120 μ m在真空度0.06?0.09MPa下抽滤； 所述步骤(g)中，所述滤饼与丙酮的质量体积比为1:1.0?1.8，氢氧化钠乙醇溶液的质量浓度为2?5wt%，所述滤饼与氢氧化钠乙醇溶液的质量体积比为1:2?5 ; 所述经重结晶所得结晶物用无水乙醇洗涤1?2次； 所得桑叶叶绿素铜钠盐的吸光度值E(1 cm，1% )彡250，吸光度比为3.3-3.6，含量大于70wt % ο9.根据权利要求1所述的一种桑叶有效成分的统筹提取方法，其特征在于，所述步骤(14)中，所述阳离子交换树脂是指强酸型磺酸基阳离子交换树脂，为国产001X7型阳离子交换树脂或ΗΖ-008型阳离子交换树脂； 步骤(15)中，所述阴离子树脂为苯乙烯-二乙烯苯共聚季铵基型强碱性阴离子交换树月旨，为国产201X7或D301-G型阴离子树脂。10.根据权利要求1所述的一种桑叶有效成分的统筹提取方法，其特征在于，所述步骤(16) b)中，分别收集不同时间内流出物是指按梯度洗脱的顺序，将流出的洗脱液每200ml用一个收集瓶收集并编号，再按得到流出液的时间先后顺序排列收集。
【专利摘要】本发明涉及一种桑叶有效成分的统筹提取方法，是以桑叶为原料，依次经超声醇提、水提获得醇提液、水提液和提取后滤渣，其中醇提液经浓缩、萃取脱色后，使用阴阳离子交换树脂富集、洗脱制得桑叶黄酮和DNJ，脱除的色素经皂化、铜代、成盐后制得叶绿素铜钠盐；水提液经浓缩后醇沉、澄清剂澄清分离蛋白、多糖，多糖喷雾干燥制得桑叶多糖，蛋白加入酶水解，制成小分子低聚肽；提取后残渣经超声酸碱洗涤，乙醇浸泡脱脂后制得桑叶膳食纤维；通过统筹工艺，将桑叶“一站”式完全分解，制成6种主要产品，充分利用桑叶中的有效成分，提高附加值，相较于单一物质提取存在巨大利润空间和经济价值，具有良好的商业前景，适用于大规模工业化生产。
【IPC分类】C07D211/46, C08B37/00, C07D311/40, C07D487/22, C12P21/06
【公开号】CN105272988
【申请号】CN201510756288
【发明人】李森原, 王济强, 何秋旻, 谈学马, 陈莹
【申请人】上海天伟纺织质量技术服务有限公司, 上海丝绸集团股份有限公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年11月9日