一种亮丙瑞林的合成法
【技术领域】
[0001] 本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及亮丙瑞林的固液合成方法。
【背景技术】
[0002] 亮丙瑞林外文名或通用名为Leuprorelin，具有以下结构： L-焦谷氨酰-L-组氨酰-L-色氨酰-L-丝氨酰-L-酪胺酰-D-亮氨酰-L-亮氨酰-L-精 氨酰-L-脯氨酰乙胺
亮丙瑞林是促黄体生成释放激素（LHRH)的高活性衍生物，在首次给药后能立即产生一 过性的垂体-性腺系统兴奋作用（急性作用），然后抑制垂体生成和释放促性腺激素。它还 能进一步抑制卵巢和睾丸对促性腺激素的反应，从而降低雌二醇和睾丸酮的生成(慢性作 用）。所以能有效地抑制垂体-性腺系统的功能。亮丙瑞林广泛用于治疗早熟、子宫内膜异 位症、子宫肌瘤或绝经前乳腺癌等女性患者和前列腺癌等男性患者。
[0003] 美国公开专利文献US4690916中有合成亮丙瑞林的报道。使用Merrifield树脂， 采用Boc法固相合成全保护九肽片段，在低温下用乙胺氨解树脂，再经HF脱除侧链保护基 得到目的产物。该法氨解收率低，极易造成肽链的消旋。专利CN101538315A和CN1865280A 采用Fmoc固相法合成全保护九肽，再液相接乙胺修饰。该法无法完全避免二酮哌嗪副反 应，放大生产时，二酮哌嗪副反应造成肽链脱落，显著降低收率。
[0004] 因此研发一种收率高、反应简单可控，适于工业化生产的亮丙瑞林新的合成方法 具有重要意义。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是对对现有技术的不足，提供一种亮丙瑞林的固液相 结合合成方法，该方法显著的提高了亮丙瑞林的收率与纯度，无需氨解，反应简单可控，适 用于工业生产。
[0006] 本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种亮丙 瑞林的合成方法，其特点是：该方法采用液相合成二肽中间体再用于固相合成得全保护九 肽肽树脂，将全保护九肽从树脂上切割下来在液相中接乙胺得到全保护亮丙瑞林，经裂解 得到亮丙瑞林粗品； 其具体步骤如下： (1) 在缩合剂作用下，由Fmoc-Leu-ΟΗ和HOSU缩合得到Fmoc-Leu-OSU脂； (2) Fmoc-Leu-OSU脂与H_Arg(pbf)-〇H在喊作用下反应得到Fmoc-Leu_Arg(pbf)-〇H; (3) Fmoc-Pro-OH与CTCResin在喊作用下反应得到Fmoc-Pro-CTCResin; (4) 脱去Fmoc，在缩合剂作用下，依次偶联下列氨基酸:Fmoc-Leu-Arg(pbf)-OH,Fmoc-D-Leu-OH,Fmoc-Tyr(tBu) -〇H，Fmoc-Ser(tBu) -〇H，Fmoc-Trp(Boc) -〇H，Fmoc-His(Trt) -〇H，Pyr-〇H，得至lj 全保护九肽肽树脂； (5) 使用切割试剂切割全保护九肽肽树脂得到全保护九肽； (6) 全保护九肽与乙胺盐酸盐在缩合剂作用下得到亮丙瑞林全保护肽，经裂解得到亮 丙瑞林粗品。
[0007] 本发明所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其进一步优选的技术方案是：步骤（1) 中所述的缩合剂选自DCC，DIC，EDC·HC1中任意一种。
[0008] 本发明所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其进一步优选的技术方案是：步骤（2) 中所述的碱选自DIEA，NMM，Py，DMAP，NaOH，NaHC03,Na2C03 中任意一种。
[0009] 本发明所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其进一步优选的技术方案是：步骤（3) 中CTCResin替代度为 0· 5-2. 0mmol/g。
[0010] 本发明所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其进一步优选的技术方案是：步骤（3) 中CTCResin替代度为 1. 0-1. 5mmol/g。
[0011] 本发明所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其进一步优选的技术方案是：（3)中所 述的碱选自DIEA，NMM，Py，DMAP中任意一种。
[0012] 本发明所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其进一步优选的技术方案是：（4)的具 体操作如下： 4. 1 采用DBLK使所述Fmoc-Pro-CTCResin脱除Fmoc保护基，得到H-Pro-CTCResin， 所述DBLK为PIP/DMF=l/4的溶液； 4. 2在缩合剂系统存在下H-Pr〇-CTCResin和Fmoc-Leu-Arg(pbf) -0H偶联得到Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pr〇-CTCResin； 4. 3重复步骤4. 1和4. 2得到全保护九肽肽树脂。
[0013] 本发明所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其进一步优选的技术方案是：步骤（4) 中所述偶联使用缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt，HBTU，HCTU，TBTU，PyBOP其 中之一与HOBt、DIEA、NMM其中之一组合，或者HATU、PyAOP其中之一与HOAt、DIEA、NMM其 中之一组合；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMS0或它们之间的任意组合。
[0014] 本发明所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其进一步优选的技术方案是：所投 Fmoc-Leu-Arg(pbf)-0H的用量为所投CTCResin总摩尔数的1. 2-6倍，优选为1. 5-2. 5 ;偶 联时间为室温条件下40-180分钟，优选为60-90分钟。
[0015] 本发明所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其进一步优选的技术方案是：所述步骤 (5)和（6)的具体方法如下：使用全保护九肽肽树脂重量（g)10倍体积（mL)的1-2%TFA/DCM 或者20%TFE/DCM室温下切割肽树脂得到全保护九肽：将全保护九肽、乙胺盐酸盐溶于有机 溶剂中，降温至5°C以下，加入偶联剂，室温反应；其中有机溶剂选自DMF、THF;偶联剂选自 HBTU、HCTU、TBTU、PyBOP其中之一与HOBt、DIEA、NMM其中之一组合，或者HATU、PyAOP其中 之一与HOAt、DIEA、NMM其中之一组合；配制偶联剂的溶液采用的溶剂选自DMF、THF;反应 的时间为室温条件下30-300分钟，优选室温条件下30-60分钟；反应完毕后，通过常规后处 理得到亮丙瑞林粗品；一个具体的后处理方法是：将反应液倒入8倍体积的饱和碳酸氢钠 溶液中析晶，所得固体水洗涤4次，烘干，得亮丙瑞林全保护九肽；全保护九肽加入8倍体积 的裂解液中裂解2h后，加入6倍体积的冰乙醚中析晶，所得固体乙醚研洗离心3次，真空减 压干燥，得亮丙瑞林粗品。
[0016] 本发明提供的合成方法中，所用到的原料、试剂及中间体II均可由市场够得。本发 明涉及的英文缩写所对应的中文名称见下表：
与现有技术相比，本发明方法采用液相合成二肽中间体再用于固相合成得全保护九肽 肽树脂， 将全保护九肽从树脂上切割下来在液相中接乙胺得到全保护亮丙瑞林，经裂解得到亮 丙瑞林粗品。该方法显著地提高了亮丙瑞林的收率与纯度，无需氨解，反应简单可控，适用 于工业生产。
【附图说明】
[0017] 图1为本发明合成产品的MS图； 图2为本发明合成产品的HPLC图。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例，进一步阐述本发明： 实施例1，一种亮丙瑞林的合成方法：该方法采用液相合成二肽中间体再用于固相合 成得全保护九肽肽树脂，将全保护九肽从树脂上切割下来在液相中接乙胺得到全保护亮丙 瑞林，经裂解得到亮丙瑞林粗品； 其具体步骤如下： (1) 在缩合剂作用下，由Fmoc-Leu-〇H和H0SU缩合得到Fmoc-Leu-〇SU脂； (2) Fmoc-Leu-OSU脂与H_Arg(pbf)-〇H在喊作用下反应得到Fmoc-Leu_Arg(pbf)-〇H; (3) Fmoc-Pro-OH与CTCResin在喊作用下反应得到Fmoc-Pro-CTCResin; (4) 脱去Fmoc，在缩合齐lj作用下，依次偶联下列氨基酸:Fmoc-Leu-Arg(pbf)-OH,Fmoc-D-Leu-OH,Fmoc-Tyr(tBu) -〇H，Fmoc-Ser(tBu) -〇H，Fmoc-Trp(Boc) -〇H，Fmoc-His(Trt) -OH,Pyr-ΟΗ，得至lj 全保护九肽肽树脂； (5) 使用切割试剂切割全保护九肽肽树脂得到全保护九肽； (6) 全保护九肽与乙胺盐酸盐在缩合剂作用下得到亮丙瑞林全保护肽，经裂解得到亮 丙瑞林粗品。
[0019] 实施例2,实施例1所述的一种亮丙瑞林的合成方法中：步骤（1)中所述的缩合剂 选自DCC，DIC，EDC·HC1中任意一种。
[0020] 实施例3,实施例1或2所述的一种亮丙瑞林的合成方法中：步骤（2)中所述的碱 选自DIEA，NMM，Py，DMAP，NaOH，NaHC03,Na2C03 中任意一种。
[0021] 实施例4,实施例1所述的一种亮丙瑞林的合成方法中：步骤（3)中CTCResin替 代度为 〇· 5-2. 0mmol/g。
[0022] 实施例5,实施例1所述