滤液倒入1290mL的正 己烷中。过滤，将所得固体烘干，得全保护九肽11. 2g，收率59. 3%。
[0038] 7 切割 取上述"3"所得全保护九肽肽树脂27. 8g，加入215mL20%TFE/DCM溶液中室温搅拌裂 解1. 5小时。滤除树脂，再加入215mL20%TFE/DCM溶液中室温搅拌裂解1. 5小时后滤去树 月旨，合并滤液，浓缩，将滤液倒入6倍体积的正己烷中。过滤，将所得固体烘干，得全保护九 肽 14. 6g。收率 77. 3%。
[0039] 8亮丙瑞林全保护肽的合成 取上述"6" 所得全保护九肽 11.2g(5. 9mmol)，HOSu0. 75g(6. 49mmol)，溶于 50mL DCM，降温至5°C。取DCC1.34g(6. 49mmol)，溶于lOmLDCM，滴入上述已降温溶液中5°C反 应3小时。取乙胺盐酸盐0. 72g(8. 85mmol)，DIEA1. 5mL溶于50mLDCM，降温至10°C。 滴加上述反应液，l〇°C反应lh。过滤，滤液浓缩至油状，加入乙酸乙酯50mL溶解。纯化水 50mL充分震荡洗涤，过滤，滤液静置弃水相。有机相饱和食盐水洗涤4次，每次50mL;纯化 水洗涤4次每次50mL。所得有机相无水硫酸钠干燥8小时，过滤，浓缩滤液至干，得亮丙瑞 林全保护肽10. 6g，收率93. 3%。
[0040] 9、亮丙瑞林全保护肽的合成 取上述"7" 所得全保护九肽 14.6g(7.6mmol)，HBTU4.32g(11.4mmol)，H0BT L54g(11.4mmol)乙胺盐酸盐 0.93g(11.4mmol)，溶于 50mLDMF。滴加DIEA6.0mL室温 反应1小时。将反应液倒入400mL饱和碳酸氢钠溶液中析晶，所得固体纯化水冲洗4次， 干燥。得亮丙瑞林全保护肽14. 2g，收率95. 7%，总收率74. 0%。
[0041] 10、裂解 配制TFA:苯甲硫醚：EDT:苯甲醚=90:5:3:2 (体积比）的裂解液85mL冰浴至5°C。 取上述"6"所得亮丙瑞林全保护肽10. 6g加入上述裂解液中，室温裂解2h，加入510mL冰乙 醚中析晶。离心，所得固体乙醚研洗离心3次，真空减压干燥。得粗肽11. 4g，HPLC定量含 目的肽g，收率77. 4%，总收率42. 8%。
[0042] 11、裂解 配制TFA:TIS:EDT:水=92. 5:2. 5:2. 5:2. 5(体积比）的裂解液115mL冰浴至5°C。取 上述"6"所得亮丙瑞林全保护肽14. 2g加入上述裂解液中，室温裂解2h，加入690mL冰乙醚 中析晶。离心，所得固体乙醚研洗离心3次，真空减压干燥。得粗肽15.6g，HPLC定量含目 的肽g，收率84. 7%，总收率62. 7%。
[0043] 所得产品MS，HPLC见图1和图2。
[0044] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当 改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是 显而易见的它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了 描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行 改动或适当变更与组合，来应用和实现本发明技术。
【主权项】
1. 一种亮丙瑞林的合成方法，其特征在于：该方法采用液相合成二肽中间体再用于固 相合成得全保护九肽肽树脂，将全保护九肽从树脂上切割下来在液相中接乙胺得到全保护 亮丙瑞林，经裂解得到亮丙瑞林粗品； 其具体步骤如下： (1) 在缩合剂作用下，由Fmoc-Leu-ΟΗ和HOSU缩合得到Fmoc-Leu-OSU脂； (2) Fmoc-Leu-OSU脂与H_Arg(pbf)-〇H在喊作用下反应得到Fmoc-Leu_Arg(pbf)-〇H; (3) Fmoc-Pro-OH与CTCResin在喊作用下反应得到Fmoc-Pro-CTCResin; (4) 脱去Fmoc，在缩合剂作用下，依次偶联下列氨基酸： Fmoc-Leu-Arg(pbf)-OH,Fmoc-D-Leu-〇H,Fmoc-Tyr(tBu)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Trp (Boc) -OH,Fmoc-His(Trt) -OH,Pyr-OH，得到全保护九肽肽树脂； (5) 使用切割试剂切割全保护九肽肽树脂得到全保护九肽； (6) 全保护九肽与乙胺盐酸盐在缩合剂作用下得到亮丙瑞林全保护肽，经裂解得到亮 丙瑞林粗品。2. 根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其特征在于：步骤（1)中所述的缩 合剂选自DCC，DIC，EDC·HC1中任意一种。3. 根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其特征在于：步骤（2)中所述的碱 选自DIEA，NMM，Py，DMAP，NaOH，NaHC03,Na2C03中任意一种。4. 根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其特征在于：步骤（3)中CTC Resin替代度为 0· 5-2.Ommol/g。5. 根据权利要求4所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其特征在于：步骤（3)中CTC Resin替代度为 1. 0-1. 5mmol/g。6. 根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其特征在于：步骤（3)中所述的碱 选自DIEA，NMM，Py，DMAP中任意一种。7. 根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其特征在于：步骤（4)的具体操作 如下： 4. 1 采用DBLK使所述Fmoc-Pro-CTCResin脱除Fmoc保护基，得到H-Pro-CTCResin， 所述DBLK为PIP/DMF=l/4的溶液； 4. 2在缩合剂系统存在下H-Pr〇-CTCResin和Fmoc-Leu-Arg(pbf) -0H偶联得到 Fmoc-Leu-Arg(pbf)-Pr〇-CTCResin； 4. 3重复步骤4. 1和4. 2得到全保护九肽肽树脂。8. 根据权利要求1或7所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其特征在于：步骤（4)中所述 偶联使用缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt，HBTU，HCTU，TBTU，PyBOP其中之一 与HOBt、DIEA、NMM其中之一组合，或者HATU、PyAOP其中之一与HOAt、DIEA、NMM其中之一 组合；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMS0或它们之间的任意组合。9. 根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其特征在于：所投 Fmoc-Leu-Arg(pbf)-0H的用量为所投CTCResin总摩尔数的1. 2-6倍，优选为1. 5-2. 5 ;偶 联时间为室温条件下40-180分钟，优选为60-90分钟。10. 根据权利要求1所述的一种亮丙瑞林的合成方法，其特征在于：所述步骤（5)和 (6)的具体方法如下：使用全保护九肽肽树脂重量（g)10倍体积（mL)的1-2%TFA/DCM或者 20%TFE/DCM室温下切割肽树脂得到全保护九肽：将全保护九肽、乙胺盐酸盐溶于有机溶剂 中，降温至5°C以下，加入偶联剂，室温反应；其中有机溶剂选自DMF、THF;偶联剂选自HBTU、 HCTU、TBTU、PyBOP其中之一与HOBt、DIEA、NMM其中之一组合，或者HATU、PyAOP其中之一 与HOAt、DIEA、NMM其中之一组合；配制偶联剂的溶液采用的溶剂选自DMF、THF;反应的时 间为室温条件下30-300分钟，优选室温条件下30-60分钟；反应完毕后，通过常规后处理得 到亮丙瑞林粗品；一个具体的后处理方法是：将反应液倒入8倍体积的饱和碳酸氢钠溶液 中析晶，所得固体水洗涤4次，烘干，得亮丙瑞林全保护九肽；全保护九肽加入8倍体积的裂 解液中裂解2h后，加入6倍体积的冰乙醚中析晶，所得固体乙醚研洗离心3次，真空减压干 燥，得亮丙瑞林粗品。
【专利摘要】本发明是一种亮丙瑞林的合成方法：该方法采用液相合成二肽中间体再用于固相合成得全保护九肽肽树脂，将全保护九肽从树脂上切割下来在液相中接乙胺得到全保护亮丙瑞林，经裂解得到亮丙瑞林粗品；其具体步骤如下：在缩合剂作用下，缩合得到Fmoc-Leu-OSU脂；与H-Arg(pbf)-OH在碱作用下反应得到Fmoc-Leu-Arg(pbf)-OH；在碱作用下反应得到Fmoc-Pro-CTC？Resin；脱去Fmoc，在缩合剂作用下，依次偶联氨基酸得到全保护九肽肽树脂；使用切割试剂切割全保护九肽肽树脂得到全保护九肽；全保护九肽与乙胺盐酸盐在缩合剂作用下得到亮丙瑞林全保护肽，经裂解得到亮丙瑞林粗品。本发明方法显著地提高了亮丙瑞林的收率与纯度，无需氨解，反应简单可控，适用于工业生产。
【IPC分类】C07K7/23, C07K1/02, C07K1/06, C07K1/04
【公开号】CN105330726
【申请号】CN201510741266
【发明人】王蔡典, 刘标, 谷海涛, 徐峰, 孙美禄, 李家瑾
【申请人】江苏诺泰生物制药股份有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年11月5日