桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种桦褐孔菌发酵技术的培养方法，尤其涉及一种桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法。
【背景技术】
[0002]桦褐孔菌(Inonotusobliquus)是一种药用价值很高的名贵真菌，其有效成分在食品、药品、保健品中有着广泛的应用。随着对桦褐孔菌研究的深入，大量的活性成分被分离出来，主要有:桦褐孔菌素、桦褐孔菌醇和多种氧化三萜类化合物。桦褐孔菌化学成分有多糖、桦褐孔菌素、桦褐孔菌醇、多种氧化三萜类化合物、栓菌酸、多种羊毛留醇型三萜类化合物、叶酸衍生物、芳香族的香草酸、丁香酸及γ羟基苯甲酸，还有报道称已分离出单宁化合物、类固醇、生物碱类化合物、黑色素类、低分子多酚类及木质素类化合物.桦褐孔菌含有大量的抗癌、降血压、降血糖、复活免疫作用的植物纤维类多糖体。可以提高免疫细胞的活力，抑制癌细胞扩散和复发，在胃肠内防止致癌物质等有害物质的吸收，并促进排泄。
[0003]桦褐孔菌天然资源有限，价格昂贵，而且目前还不能进行人工栽培，其价格日渐升高，因此，运用发酵工程技术生产桦褐孔菌菌丝体，为研究和开发桦褐孔菌提供充足的原材料具有相当大的意义。液体发酵作为现代发酵工程的产物有着生产周期短，不受季节气候限制，产物产量高和易于控制等优点，可以作为获得桦褐孔菌的可靠途径。桦褐孔菌多糖为其主要的保健因子之一，近年来对其各方面的研究投入都不断加大。人们对桦褐孔菌保健功能的市场需求也在不断加大。
[0004]
【发明内容】
:
本发明的目的是提供一种廉价高效的桦褐孔菌多糖的发酵技术培养方法。
[0005]通过以下技术方案来实现:
以桦褐孔菌真菌为发酵菌株，采用斜面液体培养和基础发酵培养。
[0006]斜面培养基的成分:18.0g/L马铃薯，葡萄糖5.0g/L，KH2P040.4g/L，18g/L琼脂，PH 值 5.8-6.1 ο
[0007]基础培养基的成分:18.0g/L葡萄糖，5.0g/L蛋白胨，KH2P040.4g/L，MgS04.7H201.5g/L，PH 值 5.8-6.1。
[0008]扩大培养基的成分:18.0g/L葡萄糖，5.0g/L蛋白胨，2.0g/L玉米粉，KH2P040.4g/L，MgS04.7H201.5g/L，PH 值 5.8-6.1。
[0009]本发明具体步骤如下:
步骤1:种子培养:取100ml斜面培养基装入250ml锥形瓶中，121°C灭菌20min，将菌种接于25 °C恒温培养6d ；
步骤2:摇瓶培养:取100ml基础培养基装入250ml锥形瓶中，121°C灭菌20min，用移液器接种10ml液体种子于基础培养基中，摇床培养，温度28°C，培养基PH值5.0，转速150r/min，培养120小时，然后进行扩大培养，取出斜面菌种接入配制的基础培养基中； 步骤3:将步骤2中的摇瓶菌种转接入装有摇瓶扩大培养基的摇瓶再进行扩大培养，在25-33°C下，转速160r/min，培养50小时；
步骤4:按上述培养发酵后，将发酵液送入存储罐中，经过滤，得上清液；将滤液浓缩至原体积的1/6-1/10，取浓缩液，用适量75%的乙醇进行醇析25小时，取沉淀用去离子水溶解，然后喷雾干燥即可得到桦褐孔菌多糖。
[0010]本发明的有益效果:本发明适用于液体深层发酵生产桦褐孔菌水溶性多糖，对于今后的工业化生产和相关产业发展具有重要意义。
[0011]本发明将基础培养基中的葡萄糖分别以蔗糖、麦芽糖、乳糖、可溶性淀粉取代；将基础培养基中的蛋白胨分别以酵母粉、玉米浆、尿素替代；将培养基中的KH2P04用不同的无机盐代替研究桦褐孔菌对不同培养基成分的需求。
具体实施方案
[0012]实施例1
基础培养基:蔗糖 18.0g/L，酵母粉 5.0g/L, KH2P040.4g/L，MgS04.7H201.5g/L，PH 值
5.8~6.1 ο
[0013]本发明具体步骤如下:
种子培养:取100ml斜面培养基装入250ml锥形瓶中，121°C灭菌20min，将菌种接于25°Cta温培养6d。
[0014]摇瓶培养:取100ml基础培养基装入250ml锥形瓶中，121°C灭菌20min，用移液器接种10ml液体种子于基础培养基中，摇床培养，温度28°C，培养PH值5.0，转速150r/min，培养120小时，然后进行扩大培养，取出斜面菌种接入配制的基础培养基中
将步骤2中的摇瓶菌种转接入装有摇瓶扩大培养戒的摇瓶再进行扩大培养，25-33Γ，转速160r/min，培养50小时。
[0015]本发明发酵终止后，将发酵液送入存储罐中，经过滤，得上清液。将滤液浓缩至原体积的1/6-1/10，取浓缩液，用适量75%的乙醇进行醇析25小时，取沉淀用去离子水溶解，然后喷雾干燥即可得到桦褐孔菌多糖。
[0016]实施例2
基础培养基:18.0g/L 麦芽糖，5.0g/L 玉米浆，0.4g/L KH2P04，1.5g/L MgS04.7Η20，ΡΗ值5.8-6.Ιο具体步骤同实施例1。
[0017]实施例3
基础培养基:18.0g/L 葡萄糖，5.0g/L 尿素，0.4g/L KH2P04，1.5g/L MgS04.7H20，PH值5.8-6.lo具体步骤同实施例1实施例4
基础培养基:18.0g/L 麦芽糖，5.0g/L 蛋白胨，0.4g/L KH2P04，1.5g/L MgS04.7Η20，PH值5.8-6.lo具体步骤同实施例1。
[0018]本实施方式只是对本专利的示例性说明而并不限定它的保护范围，本领域人员还可以对其进行局部改变，只要没有超出本专利的精神实质，都视为对本专利的等同替换，都在本专利的保护范围之内。
【主权项】
1.桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法，其特征在于:具体包括一下步骤: 步骤1:种子培养:取100ml斜面培养基装入250ml锥形瓶中，121°C灭菌20min，将菌种接于25 °C恒温培养6d ； 步骤2:摇瓶培养:取100ml基础培养基装入250ml锥形瓶中，121°C灭菌20min，用移液器接种10ml液体种子于基础培养基中，摇床培养，温度28°C，培养基PH5.0，转速150r/min，培养120小时，然后进行扩大培养，取出斜面菌种接入配制的基础培养基中； 步骤3:扩大培养:将步骤2中的摇瓶菌种转接入装有摇瓶扩大培养基的摇瓶再进行扩大培养，在25-33°C下，转速160r/min，培养50小时； 步骤4:按上述培养发酵后，将发酵液送入存储罐中，经过滤，得上清液；将滤液浓缩至原体积的1/6-1/10，取浓缩液，用适量75%的乙醇进行醇析25小时，取沉淀用去离子水溶解，然后喷雾干燥即可得到桦褐孔菌多糖。2.根据权利要求1所诉的桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法，其特征在于:所诉斜面培养基的成分:18.0g/L马铃薯，葡萄糖5.0g/L，0.4g/L KH2P04，18g/L琼脂，PH 值 5.8-6.1。3.根据权利要求1所诉的桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法，其特征在于:所述基础培养基的成分:18.0g/L葡萄糖，5.0g/L蛋白胨，0.4g/L KH2P04，1.5g/LMgS04.7H20，PH值 5.8-6.1。4.根据权利要求1所诉的桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法，其特征在于:具体步骤为:所述扩大培养基的成分:18.0g/L葡萄糖，5.0g/L蛋白胨，2.0g/L 玉米粉，0.4g/L KH2P04，1.5g/L MgS04.7H20，PH 值 5.8-6.1。5.根据权利要求1所诉的桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法，其特征在于:所述基础培养基的成分:蔗糖18.0g/L,酵母粉5.0g/L, KH2P040.4g/L，MgS04.7H201.5g/L，PH 值 5.8-6.1。6.根据权利要求1所诉的桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法，其特征在于:所述基础培养基的成分:18.0g/L麦芽糖，5.0g/L玉米浆，0.4g/L KH2P04，1.5g/LMgS04.7H20，PH值 5.8-6.1。7.根据权利要求1所诉的桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法，其特征在于:所述基础培养基的成分:18.0g/L葡萄糖，5.0g/L尿素，0.4g/L KH2P04，1.5g/LMgS04.7H20，PH值 5.8-6.1。8.根据权利要求1所诉的桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法，其特征在于:所述基础培养基的成分:18.0g/L麦芽糖，5.0g/L蛋白胨，0.4g/L KH2P04，1.5g/LMgS04.7H20，PH值 5.8-6.1。
【专利摘要】<b>本发明公开了</b><b>一种桦褐孔菌的培养发酵方法及其水溶性多糖的制备方法</b><b>，通过利用种子培养，</b><b>摇瓶培养，扩大培养等步骤进行桦褐孔菌的培养发酵，根据发酵物的形成，将发酵液经过过滤，浓缩，醇析等方法提取桦褐孔菌的水溶性多糖</b><b>。</b><b>本发明适用于液体深层发酵生产桦褐孔菌水溶性多糖，对于今后的工业化生产和相关产业发展具有重要意义。本发明将基础培养基中的葡萄糖分别以蔗糖、麦芽糖、乳糖、可溶性淀粉取代；将基础培养基中的蛋白胨分别以酵母粉、玉米浆、尿素替代；将培养基中的KH2PO4用不同的无机盐代替研究桦褐孔菌对不同培养基成分的需求。</b><b />
【IPC分类】C12P19/04, C12R1/645, C12N1/14
【公开号】CN105349439
【申请号】CN201510939365
【发明人】陈喜军
【申请人】黑龙江众生生物工程有限公司
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年12月16日