Cd36鉴定癌症对象以用于治疗的用图

Cd36鉴定癌症对象以用于治疗的用图
【专利说明】CD36鉴定癌症对象以用于治疗的用途
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求于2013年3月14日提交的美国临时申请No. 61/782, 850之提交日的 权益，其整个内容通过引用并入本文。
[0003] 联邦政府资助的研究和开发
[0004] 本发明是在美国国家癌症研究所授予的R01CA135417的美国政府支持下完成的。 美国政府对本发明享有某些权益。
[0005] 发明背景
[0006] 癌症依然是一个主要的公众健康首要问题。例如，估计2008年有760万人死于癌 症。对于癌症的治疗随着技术和科学的进步不断改善。遗憾的是，很明显许多癌症疗法仅 对癌症患者的亚群有效，甚至仅对于具有相同类型癌症的患者亚群有效。因此，寻找鉴定可 能响应于治疗之患者的方式变得越来越重要。
[0007] 发明概述
[0008] 本公开内容的一些方面部分地基于以下发现：肿瘤细胞中升高的CD36水平指示 患者对Psap肽治疗有响应或可能有响应。因此，本公开内容的一些方面涉及通过确定样品 (例如，肿瘤样品）中的CD36水平来评估患者对Psap肽治疗的响应性的方法。在一些实施 方案中，本文所述方法涉及基于样品中的CD36水平来鉴定或选择用于Psap肽治疗的患者。 本公开内容的另一些方面涉及用于治疗患有癌症的对象的组合物和方法，所述对象的特征 在于升高的CD36水平。
[0009] 在一些方面，本公开内容涉及用于评估对象对Psap肽治疗的响应性的方法，所述 方法包括确定从患有癌症之对象获得的样品中的CD36水平，其中与对照水平相比，所述样 品中升高的CD36水平指示所述对象对Psap肽治疗有响应或可能有响应。在一些实施方案 中，通过进行测定来确定样品中的CD36水平。在一些实施方案中，所述方法还包括鉴定在 样品中具有与对照水平相比升高的CD36水平的对象为对Psap肽治疗有响应或可能有响 应。在一些实施方案中，所述方法还包括向被鉴定为对Psap肽治疗有响应或可能有响应的 对象施用有效量的Psap肽以治疗癌症。
[0010] 本公开内容的另一些方面涉及治疗患有癌症之对象的方法，所述方法包括向患有 癌症的对象施用有效量的Psap肽以治疗癌症，所述对象的特征在于与对照水平样品相比 样品中升高的CD36水平。在一些实施方案中，对照水平是从患有癌症的所述对象获得的非 癌细胞或组织中的CD36水平。在一些实施方案中，对照水平是从健康对象或健康对象群体 获得的细胞或组织中的CD36水平。在一些实施方案中，对照水平是预定的水平。在一些实 施方案中，CD36水平是CD36蛋白水平。
[0011] 本公开内容的另一些方面涉及用于治疗患有癌症之对象的方法，所述方法包括： (a)基于已知对象在样品中具有与对照水平相比升高的CD36水平来选择患有癌症的对象； 以及（b)因为所述对象在样品中具有与对照水平相比升高的CD36水平，所以向所述对象施 用有效量的Psap肽。在一些实施方案中，对照水平是从患有癌症的所述对象获得的非癌细 胞或组织中的CD36水平。在一些实施方案中，对照水平是从健康对象或健康对象的群体获 得的细胞或组织中的CD36水平。在一些实施方案中，对照水平是预定的水平。在一些实施 方案中，CD36水平是CD36蛋白水平。
[0012] 在本文提供的任意方法的一些实施方案中，癌症是前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺 癌、白血病、胰腺癌、多形性胶质母细胞瘤、星形细胞瘤或黑素瘤。
[0013] 在本发明提供的任意方法的在一些实施方案中，Psap肽包含氨基酸序列 CDWLPK(SEQIDN0:1)、DWLPK(SEQIDN0:2)或DWLP(SEQIDN0:3)，或者其氨基酸替换变 体，其中所述氨基酸替换是：
[0014] a)酪氨酸（Y)替换色氨酸（W);
[0015] b)选自缬氨酸（V)、丙氨酸（A)或甘氨酸（G)或者类似大小的非标准氨基酸 (non-canonicalaminoacid)或其衍生物的氨基酸替换亮氨酸（L);
[0016] C)精氨酸（R)替换赖氨酸（K);
[0017] d)天冬氨酸（D)的D-异构体替换天冬氨酸（D)的L-异构体和/或亮氨酸（L)的 D-异构体替换亮氨酸（L)的L-异构体；
[0018] e)色氨酸（W)的D-异构体替换色氨酸（W)的L-异构体和/或脯氨酸⑵的D-异 构体替换脯氨酸（P)的L-异构体；或其组合。在一些实施方案中，Psap肽的长度为50个 氨基酸或更少。在一些实施方案中，Psap肽的长度为30个氨基酸或更少。在一些实施方 案中，Psap肽的长度为15个氨基酸或更少。在一些实施方案中，Psap肽的长度为6个氨基 酸或更少。在一些实施方案中，Psap肽为环肽。在一些实施方案中，类似大小的非标准氨 基酸为甲基缬氨酸、甲基亮氨酸或肌氨酸。
[0019] 在另一个方面，本公开内容涉及用于治疗患有癌症的对象的组合物，所述对象的 特征在于与对照水平相比样品中升高的⑶36水平，所述组合物包含Psap肽。
[0020] 在另一个方面，本公开内容涉及组合物在制造用于治疗患有癌症之对象的药物中 的用途，所述对象的特征在于与对照水平相比样品中升高的CD36水平，所述组合物包含 Psap肽。
[0021] 在本文提供的用途或组合物的一些实施方案中，对照水平是从患有癌症的所述对 象获得的非癌细胞或组织中的CD36水平。在本文提供的用途或组合物的一些实施方案中， 对照水平是从健康对象或健康对象的群体获得的细胞或组织中的CD36水平。在本文提供 的用途或组合物的一些实施方案中，对照水平是预定的水平。在本文提供的用途或组合物 的一些实施方案中，⑶36水平是⑶36蛋白水平。
[0022] 在本文描述的用途或组合物的一些实施方案中，癌症是前列腺癌、乳腺癌、卵巢 癌、肺癌、白血病、胰腺癌、多形性胶质母细胞瘤、星形细胞瘤或黑素瘤。
[0023] 在本文描述的用途或组合物的一些实施方案中，Psap肽包含氨基酸序列 CDWLPK(SEQIDN0:1)、DWLPK(SEQIDN0:2)或DWLP(SEQIDN0:3)，或者其氨基酸替换变 体，其中所述氨基酸替换是：
[0024] a)酪氨酸⑴替换色氨酸（W);
[0025] b)选自缬氨酸（V)、丙氨酸（A)或甘氨酸（G)或者类似大小的非标准氨基酸或其 衍生物的氨基酸替换亮氨酸（L);
[0026] c)精氨酸（R)替换赖氨酸（K);
[0027] d)天冬氨酸（D)的D-异构体替换天冬氨酸（D)的L-异构体和/或亮氨酸（L)的 D-异构体替换亮氨酸（L)的L-异构体；
[0028] e)色氨酸（W)的D-异构体替换色氨酸（W)的L-异构体和/或脯氨酸⑵的D-异 构体替换脯氨酸（P)的L-异构体；或其组合。在一些实施方案中，Psap肽的长度为50个 氨基酸或更少。在一些实施方案中，Psap肽的长度为30个氨基酸或更少。在一些实施方 案中，Psap肽的长度为15个氨基酸或更少。在一些实施方案中，Psap肽的长度为6个氨基 酸或更少。在一些实施方案中，Psap肽为环肽。在一些实施方案中，类似大小的非标准氨 基酸为甲基缬氨酸、甲基亮氨酸或肌氨酸。
[0029] 在本文提供的方法、组合物或用途的一些实施方案中，样品是肿瘤样品。
[0030] 附图简述
[0031] 图1A是示出在添加系列稀释量的重组Tsp-Ι或DWLPK(SEQIDNO:2)肽后48小 时LLC细胞的增殖的图。
[0032] 图1B是western印迹的照片，其示出⑶36蛋白在LLC细胞中表达。
[0033]图2是western印迹的照片，其示出⑶36蛋白在乳腺癌（MDA-231、MCF-7)、卵巢 癌（ID8)、黑素瘤（B16)、前列腺癌（PC3和LNCaP)以及肺癌（LLC)细胞系中表达。
[0034] 图3是western印迹的照片，其示出⑶36蛋白在来自患者腹水的原发性卵巢癌细 胞（primaryovariancancercell)中表达。
[0035]图4是western印迹的照片，其示出CD36蛋白在胰腺癌（AsPCl)、卵巢癌（DF-14 和ID-8)、乳腺癌（MDA-MB231 和LM2)、前列腺癌（PC3、PC3-M-LN4、LN-CAP和LN-CAP-LN3)、 黑素瘤（B16-B16)和肺癌（LLC)细胞中表达。框中示出了示例性的高和低表达CD36的细 胞系。
[0036] 图5是示出dWlP(SEQIDNO:47)肽引起表达高水平CD36的癌症模型中癌症消退 的图。
[0037] 图6是示出表达⑶36的卵巢癌细胞对Tsp-Ι介导的细胞杀伤敏感的图。
[0038] 图7是示出用表达高水平的CD36的AsPC胰腺癌细胞注射然后用dWlP(SEQIDN0: 47)肽或对照处理的小鼠的原发性肿瘤块的图。通过肽处理抑制了原发性肿瘤块。
[0039] 图8是这样的图，其示出用dWlP(SEQIDNO:47)肽对患有B16-B16黑素瘤（其表 达低水平CD36)的小鼠的处理抑制了肿瘤生长，但是没有使肿瘤消退。
[0040] 发明详述
[0041] Psap肽是含有最初来源于SaposinA(-种已知的抗血管发生蛋白质）之片段的 氨基酸序列的治疗性肽。Psap-般包含核心序列CDWLPK(SEQIDN0:1)、DWLPK(SEQIDN0: 2)或DWLP(SEQIDNO:3)或者其氨基酸替换变体，并且可以少至4个氨基酸的长度（例如， 由DWLP(SEQIDNO:3)或其氨基酸替换变体组成的肽）。之前已经表明，这样的Psap肽对 治疗多种类型的癌症有效（参见，例如，PCT公开W02009002931和W0/2011/084685 ;PCT申 请PCT/US2012/71424,其以PCT公开W0/2013/096868公开，以及美国专利申请12/640, 788 和13/516, 511，其全部通过引用以其整体并入本文）。以前认为施用Psap肽刺激体内的血 小板反应蛋白（Tsp-Ι)，其继而作用于内皮细胞，引起抗血管发生作用而导致间接抑制癌症 和/或转移瘤生长。
[0042] 如本文所述，已经发现来自多种不同类型的对Psap肽有响应的癌症的肿瘤细胞 表达⑶36。CD36是细胞表面蛋白的B类清道夫受体（scavengerreceptor)家族的成员，并 且具有许多配体，包括氧化的低密度脂蛋白、氧化的磷脂、长链脂肪酸、胶原蛋白和Tsp-1。 不希望受到任何理论或机制的约束，认为施用Psap肽刺激了Tsp-1，其然后通过与肿瘤细 胞上的⑶36相互作用而直接作用于肿瘤细胞。Tsp-Ι与肿瘤细胞上的⑶36之间的相互作 用可导致抑制肿瘤增殖和/或诱导肿瘤细胞凋亡。因此，Psap肽似乎通过两种不同的独立 机制来治疗癌症，间接地通过抗血管发生作用和直接地通过Tsp-Ι与肿瘤细胞上的⑶36相 互作用。因此，患有癌症的对象对Psap肽治疗的响应性可能依赖于癌症所表达的CD36水 平。
[0043] 因此，本公开内容的一些方面涉及用于通过确定样品（例如，肿瘤样品）中的⑶36 水平来评估对象对Psap肽治疗的响应性的方法。在一些实施方案中，本文所述方法涉及基 于样品（例如，肿瘤样品）中的CD36水平来鉴定或选择用于Psap肽治疗的对象。本公开 内容的另一些方面涉及用于治疗患有癌症之对象的组合物和方法，所述对象的特征在于升 高的CD36水平（例如，基于癌症在样品中具有与对照水平相比升高的CD36水平选择或鉴 定）。
[0044] 本文使用的"对Psap肽治疗有响应"包括但不限于响应于Psap肽治疗而防止或 减少癌症的发生、降低癌症的症状、阻抑或抑制癌症的生长、防止现有癌症的转移和/或侵 袭、促进或诱导癌症的消退、抑制或阻抑癌细胞的增殖、减少血管发生和/或增加凋亡癌细 胞的量。
[0045] 本文使用的"对Psap肽治疗无响应"包括但不限于响应于Psap肽治疗未能防止 或减少癌症的发生、未能降低癌症的症状、未能阻抑或抑制癌症的生长、未能防止现有癌症 的转移和/或侵袭、未能促进或诱导癌症的消退、未能抑制或阻抑癌细胞的增殖、减少凋亡 癌细胞的量和/或未能减少血管发生。
[0046] 诊断和治疗诊断性（theranostic)方法
[0047] 本公开内容的一些方面涉及可用于评估对象对Psap肽治疗的响应性的诊断和治 疗诊断性方法。在一些实施方案中，所述方法包括确定从患有癌症之对象获得的样品中的 CD36水平，其中与对照水平相比所述样品中升高的CD36水平指示所述对象对Psap肽治疗 有响应或可能有响应（即，如果样品中的CD36水平与对照水平相比升高，则所述对象被鉴 定为对Psap肽治疗有响应或可能有响应）。在一些实施方案中，所述方法还包括将在样品 中具有与对照水平相比升高的CD36水平的对象鉴定为对Psap肽治疗有响应或可能有响 应。在一些实施方案中，所述方法还包括向被鉴定为对Psap肽治疗有响应或可能有响应的 对象施用有效量的本文所述Psap肽以治疗癌症。在一些实施方案中，从患有癌症之对象获 得的样品是肿瘤样品。
[0048] 在一些实施方案中，与对照水平相比样品中升高的⑶36水平指示响应于Psap肽 治疗，癌症将消退或可能消退。在一些实施方案中，所述方法还包括将在样品中具有与对照 水平相比升高的CD36水平的对象鉴定为患有响应于Psap肽治疗而将消退或可能消退的癌 症。在一些实施方案中，所述方法还包括向被鉴定为患有响应于Psap肽治疗而将消退或可 能消退的癌症的对象施用有效量的本文所述Psap肽以造成所述癌症的消退。
[0049] 本文使用的"升高的⑶36水平"意指⑶36水平高于对照水平，例如高于预定阈值 或或对照样品中的CD36水平。本文详细描述了对照水平。升高的CD36水平包括比对照水平 高例如 1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、150%、200%、 300%、400%、500%或更高的⑶36水平。升高的⑶36水平还包括现象从零状态（例如，对 照中无或不可检测的CD36表达）增加到非零状态（例如，样品中一些CD36表达或可检测 的⑶36表达）。
[0050] 本文使用的"Psap肽治疗"意指包括向对象施用Psap肽。本文描述了Psap肽。 应理解的是，Psap肽治疗可包括仅用Psap肽治疗或可包括用多种药剂或疗法的治疗，例如 Psap肽和另外的化疗剂和/或另外形式的疗法，例如手术、放射疗法或化学疗法。
[0051] 治疗
[0052] 本公开内容的另一些方面涉及治疗患有癌症之对象的方法。在一些实施方案中， 所述方法包括向患有癌症的对象施用有效量的本文所述Psap肽以治疗癌症，所述对象的 特征在于与对照水平相比，在从所述对象获得的样品中CD36水平升高。在一些实施方案 中，所述方法包括：
[0053] (a)基于已知对象在样品中具有与对照水平相比升高的⑶36水平来选择患有癌 症的对象；以及
[0054] (b)因为所述患者在样品中具有与对照水平相比升高的⑶36水平，所以向所述对 象施用有效量的Psap肽。
[0055] 本公开内容的另一些方面涉及组合物以及组合物在制造用于治疗患有癌症之对 象的药物中的用途，所述对象的特征在于在样品中具有升高的CD36水平。在一些实施方案 中，组合物包含本文所述的Psap肽。在一些实施方案中，样品是肿瘤样品。
[0056] 本文使用的"治疗"包括但不限于防止或减少癌症的发生、降低癌症的症状、阻抑 或抑制癌症的生长、防止现有癌症的转移和/或侵袭、促进或诱导癌症的消退、抑制或阻抑 癌细胞的增殖、减少血管发生和/或增加凋亡癌细胞的量。在一些实施方案中，癌症的治疗 直接抑制或阻抑癌细胞的增殖，并且不涉及对血管发生的抑制或阻抑（其间接地导致对癌 细胞增殖的抑制或阻抑）。
[0057] 有效量是足以提供医学上期望结果（例如，对癌症的治疗）的Psap肽的剂量。有 效量会随着被治疗的特定癌症、被治疗对象的年龄和身体状况、病症的严重程度、治疗的持 续时间、任何并存治疗（concurrenttherapy)的性质、特定施用途径等保健从业者知识和 专业技术内的因素而变化。对于向对象（例如人）的施用，通常可使用约〇. 〇〇1、〇. 〇1、〇. 1 或lmg/kg至50、100、150或500mg/kg或更大的剂量。
[0058] Psap肽及其组合物可配制成用于多种施用模式，包括全身、表面（topical)或局 部（localized)施用。技术和制剂通常可在Remington'sPharmaceuticalSciences， MackPublishingCo.，Easton，Pa.最新版中找到。当施用时，Psap肽可以以可药用的量 并在可药用的组合物中应用。这样的制剂可常规地包含盐、缓冲剂、防腐剂、相容性载体和 任选的其他治疗剂。当用于药物时，盐应该为可药用的，但是非可药用盐可方便地用于制备 其可药用盐，并且不从本公开内容的范围内排除。这样的药理学上可用或可药用的盐包括 但不限于由以下酸制备的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬 酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。另外，可药用盐可制备为碱金属或碱土金属盐，例如钠盐、钾盐 或钙盐。
[0059] Psap肽可任选地与可药用载体组合。本文使用的术语"可药用载体"意指适于向 人施用的一种或更多种相容性固体或液体填料、稀释剂或封装物质。术语"载体"表示与活 性成分组合以有利于应用的天然的或合成的有机或无机成分。药物组合物的组分还能够 与本公开内容的分子共混，并且彼此以不明显损害期望的药物效力的相互作用的方式。可 作为可药用载体的物质的一些实例包括：（1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；（2)淀粉，例如 玉米淀粉和马铃薯淡粉；（3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基 纤维素、微晶纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末状西黄蓍胶；（5)麦芽；(6)明胶；（7)润滑剂， 例如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花 生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；（10)二醇，例如丙二醇；（11)多 元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇（PEG) ;(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯； (13)琼脂；（14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；（15)藻酸；（16)无热原水；（17)等渗盐 水；（18)林格氏溶液（RingePssolution) ; (19)乙醇；（20)pH缓冲溶液；（21)聚酯、聚 碳酸酯和/或聚酐；（22)填充剂，例如多肽和氨基酸；(23)血清组分，例如血清白蛋白、HDL 和LDL; (22)C2-C12醇，例如乙醇；以及（23)在药物制剂中使用的其他