一种混合乳酸菌发酵方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及乳酸菌发酵领域，尤其涉及一种混合乳酸菌发酵方法。
【背景技术】
[0002] 近年来，乳酸菌成为人们研究的热点，并且在食品、药品等行业中广泛应用。乳酸 菌（lactic acid bacteria，LAB)是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的 通称。其对机体的调节作用是其它肠道菌群不可替代的，这种活的微生物，需要摄入充足的 数量，才可对宿主产生一种或多种益处。乳（培养基）中含有丰富的蛋白质、乳糖、脂肪、维 生素和矿物质，但其中游离的氨基酸和小肽的含量很低。这就需要乳酸菌来降解乳中的大 分子蛋白来维持其持续增长，而大部分乳酸菌的蛋白水解能力较弱，甚至需要在乳中添加 小分子的多肽来促进生长。
[0003] 瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌均是食品工业中常用的乳酸菌。与其它乳酸菌相比， 瑞士乳杆菌具有较强的蛋白水解能力。鼠李糖乳杆菌仅可代谢单糖和小分子蛋白，耐酸性 良好，肠道定植能力强。传统的乳酸菌发酵方法中没有将这两种乳酸菌混合发酵的方法。
【发明内容】
[0004] 鉴于此，有必要提供一种瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus)QC-1和鼠李糖 乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus)QC_2混合发酵的方法。
[0005] -种混合乳酸菌发酵方法，包括如下步骤：
[0006] 将瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种分别进行活化处理，得到瑞士乳杆菌种子液和 鼠李糖乳杆菌种子液；
[0007] 先将所述瑞士乳杆菌种子液中的瑞士乳杆菌接种至改良的番前汁肉汤培养基中， 培养2h_4h后，再将所述鼠李糖乳杆菌种子液中的鼠李糖乳杆菌也接种至所述改良的番茄 汁肉汤培养基，在30°C -37°C的恒温条件下静置培养22h-24h，其中，瑞士乳杆菌和鼠李糖 乳杆菌的体积比为1:1-1:2,所述瑞士乳杆菌和所述鼠李糖乳杆菌的总接种量为5% -7%， 所述改良的番茄汁肉汤培养基的初始pH值为6. 6-7. 0,得到发酵后的混合乳酸菌菌液。
[0008] 在其中一个实施例中，将瑞士乳杆菌进行活化处理包括如下步骤，按照8 % -10 % 的接种量，取在-80°C的甘油中保存的瑞士乳杆菌菌种接种至第一液体培养基中培养 17h-19h，接着，按照3 % -6 %的接种量，取所述第一液体培养基中的瑞士乳杆菌菌液接种 至第二液体培养基中培养17h-19h，然后，按照3% -6%的接种量，取所述第二液体培养基 中的瑞士乳杆菌菌液接种至第三液体培养基中培养17h-19h，得到所述瑞士乳杆菌种子 液；
[0009] 将鼠李糖乳杆菌进行活化处理包括如下步骤，按照8% -10%的接种量，取 在-80 °C的甘油中保存的鼠李糖乳杆菌菌种接种至第四液体培养基中培养17h_19h，接着， 按照3% -6%的接种量，取所述第四液体培养基中的鼠李糖乳杆菌菌液接种至第五液体培 养基中培养17h-19h，然后，按照3% -6%的接种量，取所述第五液体培养基中的鼠李糖乳 杆菌菌液接种至第六液体培养基中培养17h-19h，得到所述鼠李糖乳杆菌种子液。
[0010] 在其中一个实施例中，所述第一液体培养基、所述第二液体培养基、所述第三液体 培养基、所述第四液体培养基、所述第五液体培养基和所述第六液体培养基均为改良的番 前汁肉汤培养基。
[0011] 在其中一个实施例中，
[0012] 将瑞士乳杆菌进行活化处理还包括如下步骤，取所述第三液体培养基中的瑞士乳 杆菌菌液涂布到第一平板固体培养基，培养至有菌落长出，接着挑取所述第一平板固体培 养基中的单菌落至第七液体培养基，培养17h_19h，然后按照3% -6 %的接种量，取所述第 七液体培养基中的瑞士乳杆菌菌液接种至第八液体培养基，培养17h_19h后得到所述瑞士 乳杆菌种子液；
[0013] 将鼠李糖乳杆菌进行活化处理还包括如下步骤，取所述第六液体培养基中的鼠李 糖乳杆菌菌液涂布到第二平板固体培养基，培养至有菌落长出，接着挑取所述第二平板固 体培养基中的单菌落至第九液体培养基，培养17h-19h，然后按照3% -6%的接种量，取所 述第九液体培养基中的鼠李糖乳杆菌菌液至第十液体培养基，培养17h_19h后得到所述 鼠李糖乳杆菌种子液。
[0014] 在其中一个实施例中，所述第七液体培养基、所述第八液体培养基、所述第九液体 培养基和所述第十液体培养基均为改良的番茄汁肉汤培养基。
[0015] 在其中一个实施例中，所述改良的番茄汁肉汤培养基的组分为：
[0016] 番恭浸粉 2.5g/L; 牛肉膏粉 10.0g/L; 酵母浸粉 5.0g/L; 酷酸纳 5.0g/L; 葡萄糖 2.0g/L; 乳糖 20.0g/L; 磷酸氢二钾 2.0g/L; 吐温 80 LOg/Lc
[0017] 在其中一个实施例中，所述固体培养基的组分为：
[0018] 番茄浸粉 2.5g/L; 牛肉膏粉 10.0g/L; 酵母浸粉 5.0g/L; 醋酸钠 5,0g/L; 葡萄糖 2.0g/L; 乳糖 20.0g/L; 磷酸氢二钟 2. Og/L; 吐温 80 I .Og/L; 琼脂 20g/L。
[0019] 在其中一个实施例中，所述瑞士乳杆菌菌株的保藏单位名称为中国典型培养物保 藏中心，保藏日期为2015年9月15日，保藏号为CCTCC M 2015539。
[0020] 在其中一个实施例中，所述鼠李糖乳杆菌菌株的保藏单位名称为中国典型培养物 保藏中心，保藏日期为2015年9月15日，保藏号为CCTCC M 2015540。
[0021] 上述混合乳酸菌发酵方法，采用的瑞士乳杆菌与其它乳酸菌相比有较强的蛋白水 解能力，它可将培养基中的大分子蛋白水解成小分子，给共同发酵的鼠李糖乳杆菌提供一 定的小分子蛋白，从而充分利用培养基中的营养成分，从而同时获得较多的瑞士乳杆菌和 鼠李糖乳杆菌的活菌数。
【附图说明】
[0022] 图1为一实施方式的混合乳酸菌发酵方法的流程图；
[0023] 图2为将瑞士乳杆菌进行活化处理的流程图；
[0024] 图3为将鼠李糖乳杆菌进行活化处理的流程图；
[0025] 图4为实施例1中两种乳酸菌混合发酵的吸光值与对比例1和2中两种乳酸菌单 独发酵的吸光值的对比图；
[0026] 图5为实施例4中两种乳酸菌混合发酵的吸光值随温度变化图；
[0027] 图6为实施例5中两种乳酸菌混合发酵的吸光值随pH值变化图。
【具体实施方式】
[0028] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清晰，如下结合附图及实施例，对本发 明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用 于限定本发明。
[0029] 如图1所示，一实施方式的混合乳酸菌发酵方法，包括如下步骤：
[0030] S10、将瑞士乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种分别进行活化处理，得到瑞士乳杆菌种子 液和鼠李糖乳杆菌种子液。
[0031] 瑞士乳杆菌菌株的保藏单位名称为中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2015 年9月15日，保藏号为CCTCC M 2015539。保藏单位地址：武汉，中国典型培养物保藏中心 (武汉大学）。邮编=430072。
[0032] 鼠李糖乳杆菌菌株的保藏单位名称为中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2015 年9月15日，保藏号为CCTCC M 2015540。保藏单位地址：武汉，中国典型培养物保藏中心 (武汉大学）。邮编=430072。
[0033] 瑞士乳杆菌菌株和鼠李糖乳杆菌菌株具有生长快、起发早、发酵时间短、对酸耐受 力强、稳定性好等特点。
[0034] 请参考图2,将瑞士乳杆菌进行活化处理包括如下步骤：
[0035] Slll、按照8% -10%的接种量，取在-80°C的甘油中保存的瑞士乳杆菌菌种接种 至第一液体培养基中培养17h_19h。
[0036] S112、接着，按照3% -6%的接种量，取第一液体培养基中的瑞士乳杆菌菌液接种 至第二液体培养基中培养17h-19h。
[0037] S113、然后，按照3% -6%的接种量，取第二液体培养基中的瑞士乳杆菌菌液接种 至第三液体培养基中培养17h-19h，得到瑞士乳杆菌种子液。
[0038] 第一液体培养基、第二液体培养基和第三液体培养基均为改良的番茄汁肉汤培养 基。
[0039] 请参考图3,将鼠李糖乳杆菌进行活化处理包括如下步骤：
[0040] S121、按照8% -10%的接种量，取在-80°C的甘油中保存的鼠李糖乳杆菌菌种接 种至第四液体培养基中培养17h-19h。
[0041] S122、接着，按照3% -6%的接种量，取第四液体培养基中的鼠李糖乳杆菌菌液接 种至第五液体培养基中培养17h_19h。
[0042] S123、然后，按照3% -6%的接种量，取第五液体培养基中的鼠李糖乳杆菌菌液接 种至第六液体培养基中培