一株拟青霉属真菌及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一株拟青霉属真菌，特别涉及一株拟青霉属真菌QDlO菌株及其用途。 本发明属于微生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 随着世界经济的飞速增长，人类经济活动增加，带来了一个全球不容忽视的大问 题一环境污染，特别是工业废物排放、农用化学品的随意处理，给土壤、河流等造成很大的 污染，尤其是重金属污染。目前为止，全世界平均每年排放铅约5 X IO5万kg，汞约1500万 kg等。还有研究表明，一些进入市场的初级农产品有重金属残留物，如镉米等。这些进入食 物链，会给自然环境甚至人体造成很大的损伤。因此，重金属污染修复工作的开展对于整个 人类和生态环境都有很重大的意义。
[0003] 重金属污染的治理工作已得到多方关注，尤其是对铅镉污染的土壤修复。铅、镉属 于五大污染重金属，其污染范围很广，水体、土壤等均受其害。特别是土壤，近些年来污染范 围越来越广。据统计，我国约有1.3X10 4hm2耕地受到铅等重金属严重污染，致使粮食减产 达LOX 107t。含铅汽油的使用也加重了土壤中铅的污染。近些年，在对蔬菜等可食用农作 物的检测过程中发现有铅、镉超标的现象。
[0004] 土壤铅镉的污染所带来的危害是很大的，对人类和生态环境都有很大的影响。在 植物方面，首先会导致产量下降，严重的植物会死亡。在人和动物方面，铅、镉对动物和人的 毒害是通过食物链进入人体和动物体内。铅积累过量会导致肾脏衰竭、智力下降等中毒症 状。镉积累过量可能会导致"痛痛病"，引起肾小球功能衰竭等疾病，影响动物的生产活动， 严重的重金属会遍布动物全身。
[0005] 与微生物修复技术相比，常见的物理化学修复技术易造成二次污染。而微生物修 复以污染小、成本低等特点成为热门的重金属土地污染修复技术，越来越受到关注。微生物 修复重金属污染土壤及水体是指通过生物体与重金属颗粒间的相互作用来减轻重金属对 于环境的危害。在生物修复方法所用的生物材料中，真菌材料具有生物量大、重金属吸附容 量大、吸附后金属易回收等众多优点。而微生物代谢物质如胞外多糖，几丁质等也参与重金 属的吸附与固定化过程。这主要是基于微生物细胞表面的功能基团，如羟基，羰基，巯基和 胺基基团等，这些功能基团能够与重金属阳离子有效地结合，从而具有对重金属的吸附作 用。真菌对重金属的生物吸附是污染治理研究和运用的重点。
[0006] 本发明经筛选和鉴定得到了一株拟青霉属（Paecilomyces sp.)真菌QDlO菌株， 该菌株的最低抑菌浓度（MIC)为镉（Cd2+) 1000mg/L，共同抗性为800&1500mg/L(Cd2+&Pb2+)。 通过研究吸附条件改善其吸附效果，提高吸附能力，使高抗性QDlO菌株其自身抗逆性更 强，更有利于实际应用。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的之一在于提供一株拟青霉属真菌，该真菌的最低抑菌浓度（MIC)为 镉（Cd2+) 1000mg/L，共同抗性为 800&1500mg/L(Cd2+&Pb2+)。
[0008] 本发明的目的之二在于提供所述的拟青霉属真菌在重金属镉或铅污染治理中的 应用。
[0009] 为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：
[0010] 本发明筛选到的一株拟青霉属（Paecilomyces sp.)真菌，命名为拟青霉 QDlO (Paecilomyces sp. QD10)，分类命名为拟青霉 QDlO (Paecilomyces sp. QD10)，于 2015 年6月26日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号是CCTCC NO. M 2015405。
[0011] 拟青霉属真菌QDlO菌株具有如下特性：
[0012] 微生物特征：在固体培养基上菌落表面呈白色，反面呈淡黄色，质地棉絮状，生长 快速，在固体培养基生长48h时，其直径可2-3cm。在培养IOd后表面会出现结晶。光学显 微镜下显示QDlO营养菌丝壁光滑，菌丝无色透明，菌丝发达，顶端渐细成明显的细长颈，可 见大量椭圆形孢子。
[0013] 理化性质：在pH 3-9马铃薯（PDA)培养基中生长良好，在温度10-45°C间生长良 好，能够使明胶液化，水解淀粉和纤维素，还能够利用麦芽糖和纤维素作为碳源。
[0014] 本发明的拟青霉属真菌QDlO菌株的ITS s-rDNA序列与目前发表的拟青菌属真菌 的ITS s-rDNA序列，同源性达到98%以上。综合形态特征与分子生物学鉴定，QDlO菌株为 拟青霉属（Paecilomyces sp.)真菌，其ITSs-rDNA保守序列如SEQ ID NO :1所示。
[0015] 本发明的拟青霉属真菌QDlO菌株的最低抑菌浓度（MIC)为镉（Cd2+) 1000mg/L，共 同抗性为800&1500mg/L(Cd2+&Pb2+)。通过研究吸附条件改善其吸附效果，提高吸附能力，使 高抗性QDlO菌株自身抗逆性较强，更有利于实际应用。
[0016] 因此，进一步的，本发明还提供了所述的拟青霉属真菌在重金属镉或铅污染治理 中的应用。优选的，将所述的拟青霉属真菌与植物联用，共同用于重金属镉或铅的污染治 理。
[0017] 综上所述，本发明筛选出的拟青霉属真菌QDlO菌株混合抗性较强，在 800&1500mg/L(Cd 2+&Pb2+)的混合培养基中也能良好生长。通过研究吸附条件改善其吸附效 果，提高吸附能力，使高抗性QDlO菌株自身抗逆性更强，更有利于实际应用。
【附图说明】
[0018] 图1为QDlO菌株的菌落特征；
[0019] 图2为光学显微镜下显示的QDlO营养菌丝及孢子形态；
[0020] 图3为不同投菌量对QDlO菌株吸附效果的影响图，其中A图为不同投菌量对QDlO 菌株吸附Cd2+效果的影响图，B图为不同投菌量对QDlO菌株吸附Pb 2+效果的影响图；
[0021] 图4为不同pH值对QDlO菌株吸附效果的影响图；
[0022] 图5为不同温度对QDlO菌株吸附效果的影响图；
[0023] 图6为不同时间对QDlO菌株吸附效果的影响图；
[0024] 图7为采用QDlO菌株或与植物联合修复重金属镉或铅污染土壤的效果。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合具体实施例和附图来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着 描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技 术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形 式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0026] 实施例1本发明拟青霉属真菌QDlO菌株的分离、纯化及鉴定
[0027] 1材料与方法
[0028] I. 1培养基和溶液
[0029] 马铃薯（PDA)培养基：葡萄糖20g，20%左右的马铃薯浸出液1000 ml (称取去皮马 铃薯200g，切块，加水1000 ml煮沸半小时，用双层纱布过滤取汁，补足水量至1000ml)，琼脂 20g，pH 自然。
[0030] 基础培养基：葡萄糖10g，硝酸钾lg，硫酸镁0. 2g，磷酸二氢钾0. 5g，琼脂15g，蒸 馏水 1000ml。
[0031] 明胶液化培养基：蛋白胨5g，明胶200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000ml。
[0032] 淀粉水解培养基：Κ2ΗΡ0410· 0g，KH2P04 0· 3, NaCl 0· 5g，MgCO3L 0g，KNO3L 0g，可溶 性淀粉2. 0g，琼脂15g ;pH7. 2,蒸馏水1000ml。
[0033] 纤维素水解培养基：MgSO4 · 7H20 0· 5g，K2HPO4O. 5g，NaCl 0· 5g，KNO3L 0g，滤纸条， 蒸馈水l〇〇〇ml。
[0034] 溶液：配制100g · L 1Pb (NO3) 2的母液和100g · L 1CdSO4的母液，灭菌备用。
[0035] I. 2 QDlO菌株的分离纯化：
[0036] ①取土