浓度，研究不同pH值对QDlO菌株吸附效果的影响。
[0081] 1. 4. 3不同温度对QDlO菌株吸附效果的影响
[0082] 在微生物的生长过程中，温度影响酶的活性、细胞质膜的流动性以及物质的溶解 等，从而导致其生长速率和吸附效果发生改变。在250ml的三角瓶中加入100mL的去离子 7K，在三角瓶中加入浓度为50mg/L的Cd2+和100mg/L的Pb2+的溶液，不同温度（15°C，20°C， 25°C，30°C，30°C，40°C )，pH值为自然，加入0. 2g菌丝震荡60min后离心，取上清液，测定上 清液中Cd2+和Pb 2+的浓度，研究不同pH值对QDlO菌株吸附效果的影响。
[0083] 1. 4. 4不同时间对QDlO菌株吸附效果的影响
[0084] 在250ml的三角瓶中加入100mL的去离子水，在三角瓶中加入浓度为50mg/L的 Cd2+和100mg/L的Pb 2+的溶液，温度为30°C，pH值为自然，加入0. 2g菌丝震荡不同时间 (Omin，20min，40min，60min，80min，lOOmin，120min，140min，160min，180min，200min)后离 心，取上清液，测定上清液中Cd 2+和Pb 2+的浓度，研究不同pH值对QDlO菌株吸附效果的影 响。
[0085] 2 结果
[0086] 2. I QDlO菌株的微生物形态与理化性质鉴定结果
[0087] 2. I. I QDlO菌株的微生物形态
[0088] QDlO菌株的菌落特征见图1，在固体培养基上菌落表面呈白色（图1A)，反面呈淡 黄色（图1B)，质地棉絮状，生长快速，在固体培养基生长48h时，其直径可2-3cm。在培养 IOd后表面会出现结晶。光学显微镜下显示QDlO营养菌丝壁光滑，菌丝无色透明，菌丝发 达，顶端渐细成明显的细长颈，可见大量椭圆形孢子，图2所示。
[0089] 2. I. 2 QDlO菌株的理化性质鉴定结果
[0090] QDlO菌株的理化性质鉴定结果见表1。
[0091] 表1 QDlO菌株的理化性质鉴定结果
[0093] 2. I. 3 QDlO菌株的分子生物学鉴定结果
[0094] 分子生物学鉴定结果发现：QDlO菌株的ITS s-rDNA序列（SEQ ID NO: 1所示）与 目前发表的拟青霉属真菌的ITSs-rDNA序列，同源性达到98%以上。综合形态特征与分子 生物学鉴定，QDlO菌株为拟青霉属（Paecilomyces sp.)真菌。
[0095] 上述筛选到的菌株命名为拟青霉QDlO (Paecilomyces sp. QD10)，于2015年6月 26日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号是CCTCC NO. M 2015405。
[0096] 2.2 QDlO菌株在不同条件下的吸附效果
[0097] 2. 2. 1不同投菌量对QDlO菌株吸附效果的影响
[0098] 结果见图3,根据图3可知，在投菌量为0. 2g到1.0 g时Cd2+和Pb 2+两种离子的吸 附率都是逐渐上升的趋势而吸附量呈逐渐下降的趋势。在投菌量为0. 2g到0. 6g时菌株的 吸附量变化明显，在投菌量为〇. 6g到I. 2g是变化渐缓，趋于平稳，说明在一定的浓度时，菌 丝体质量达到饱和，单位体积的吸附量也会随之趋于平稳。
[0099] 2. 2. 2不同pH值对QDlO菌株吸附效果的影响
[0100] 结果见图4,根据图4可知，在pH值3到9的情况下吸附率呈总体上升的趋势。在 pH值为3时，吸附率很低，可能是由于溶液中的H30+与Pb 2+竞争细胞壁表面的活性位点的 原因。在pH值大于7偏碱性时，Cd2+和Pb 2+可与OH离子形成氢氧化物的沉淀，吸附率的 上升不能完全归结于菌株的吸附，所以我们认为在PH值为6时，Cd 2+和Pb 2+吸附效果为最 好，吸附率达到47. 50%和75. 58%。
[0101] 2. 2. 3不同温度对QDlO菌株吸附效果的影响
[0102] 结果见图5,根据图5可知，菌株对Cd2+和Pb 2+的吸附都是先上升后下降的过程， 在25°C和30°C时去除率较好。在30°C的温度范围内也是菌丝体生长繁殖比较适宜的温度， 所以Cd 2+和Pb 2+去除率达到了最大值39. 58%和61. 73%。
[0103] 2. 2. 4不同时间对QDlO菌株吸附效果的影响
[0104] 结果见图6,根据图6可知，菌株在0~60min时吸附速度很快，刚开始菌株大量的 活性位点与Cd 2+和Pb2+结合，使溶液中的重金属迅速被吸附。在60min到IOOmin以后趋势 逐渐减缓并且趋向于平衡，说明大量离子与位点结合，吸附已经达到饱和。
[0105] 实施例2拟青霉属真菌QDlO菌株在重金属镉或铅污染治理中的应用
[0106] 采用盆栽芦苇进行实验，盆栽芦苇为用种子种植3-5个月的芦苇植株。设计为A、 B两组，每组5种处理，每种处理三个重复，100g 土 /盆。先将土壤老化，Cd2+和Pb2+的含 量分别为：A 组：13. 67mg/kg 和 54. 26mg/kg，B 组：22. 39mg/kg 和 137. 8mg/kg。将土壤灭菌 后使用，分别为：Cl为加入IOml QDlO菌液，C2为加入20ml QDlO菌液，Y为盆栽芦苇，Kl 为盆栽芦苇加入IOml QDlO菌液，K2为盆栽芦苇加入20ml QDlO菌液。整个修复期加无菌 水，修复时间为40天。
[0107] 其中，QDlO菌液按照以下方法制备：1、让QDlO菌种在试管斜面培养基上生长， 至长出孢子，2、待长满孢子后，在超净台上操作，用无菌蒸馏水（生理盐水、PBS缓冲液均 可）注入斜面试管内，用无菌接种环轻轻刮一下斜面表面，使孢子充分洗脱，混匀；3、将 步骤2中液体通过无菌洁净的滤纸，普通漏斗过滤（除去非孢子东西），用无菌洁净的小 烧杯，盛装滤液，取滤液即可得到孢子悬液，即QDlO菌液；4、用血球计数板计数，浓度为 2X10 s-2X1010CFU/ml〇
[0108] 结果如图7所示，根据图7可知植物微生物联合修复的效果较为明显，土壤中的剩 余重金属含量较低，接种菌株量为20ml的效果好于10ml，说明在不破坏土壤内菌群环境， 菌群平衡的条件下接菌量较大的修复效果较好。微生物单独修复没有植物微生物联合修复 的效果好，植物在修复过程中起到的很大作用，微生物在土壤中能增强植物对重金属的吸 附效果。
【主权项】
1. 一株拟青霉属（Paecilomycessp.)真菌，命名为拟青霉QD10,保藏在中国典型培 养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号是CCTCCNO.Μ2015405,保藏日期为2015 年6月26日。2. 权利要求1所述的拟青霉属真菌在重金属镉或铅的污染治理中的应用。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于将权利要求1所述的拟青霉属真菌与植物 联用，共同用于重金属镉或铅的污染治理。
【专利摘要】本发明公开了一株拟青霉属真菌及其用途。所述的拟青霉属(Paecilomyces？sp.)真菌，命名为拟青霉QD10，保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号是CCTCC？NO.M2015405，保藏日期为2015年6月26日。该拟青霉属真菌QD10的最低抑菌浓度(MIC)为镉(Cd2+)1000mg/L，共同抗性为800&1500mg/L(Cd2+&Pb2+)。通过研究吸附条件能够改善其吸附效果，提高吸附能力，使高抗性QD10菌株自身抗逆性更强，因此可将其应用于重金属镉或铅污染治理中。CCTCC NO. M201540520150626
【IPC分类】C12N1/14, B09C1/10, C12R1/79
【公开号】CN105400703
【申请号】CN201510811853
【发明人】金忠民, 刘丽杰, 金一峰, 陈阳, 朱琨, 李丹, 赵婧彤, 郝宇
【申请人】齐齐哈尔大学
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年11月20日