靛红酰肼类衍生物及其制备方法
【专利摘要】本发明属于有机合成领域，具体涉及一种靛红酰肼类衍生物及其制备方法。所述的靛红酰肼类衍生物为4?氯?N'?((2,3?吲哚醌?1?基)甲基)苯甲酰肼或N'?((2,3?吲哚醌?1?基)甲基)?2?甲氧基苯甲酰肼。所述的靛红酰肼类衍生物的制备方法包括以下步骤：先将取代的苯甲酸、氯化亚砜进行回流反应，经减压蒸馏后，与浓硫酸在甲醇中进行回流反应，反应后经减压蒸馏、萃取、干燥、蒸干，再与水合肼在乙醇中进行回流反应，反应后经减压蒸馏，最后与靛红一起加入到乙醇中，再加入甲醛、冰乙酸，常温搅拌得到靛红酰肼类衍生物。本发明的衍生物不仅对肿瘤具有明显抑制作用，而且反应步骤少，产率高。
【专利说明】
靛红酰肼类衍生物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于有机合成领域，具体涉及一种靛红酰肼类衍生物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 近年来，靛红类化合物在有机合成和医药中的应用已引起了有机化学界和药学界 的广泛关注。靛红及衍生物是一类重要的氮杂环化合物，具有广泛的生物活性。在有机合成 中，作为活泼中间体。含靛红氮杂环的化合物可以进一步合成许多类型有机化合物，这些化 合物大多具有高效的药理活性，有些已经开发成为临床药物。
[0003] 酰肼类衍生物具有抗菌、抗病毒等生物活性。因此，酰肼类衍生物作为很有潜力的 药物的前景十分值得关注。随着靛红类和酰肼类药物研究的不断深入，在对其抗菌以及抗 癌作用机制不断了解的基础上进行有效地结构改造与修饰和分子设计，将会有越来越多的 高效、低毒的含酰肼结构的靛红类新型药物用于临床，造福人类。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种对肿瘤具有明显抑制作用的靛红酰肼类衍生物;本发明 同时提供其简单易行的制备方法以及用途。
[0005] 本发明所述的靛红酰肼类衍生物的结构式为：
[0006] 或
[0007] 所述的靛红酰肼类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
[0008] (1)将取代的苯甲酸、氯化亚砜进行回流反应，经减压蒸馏得到产物；
[0009] (2)将步骤(1)中得到的产物和浓硫酸在甲醇中进行回流反应，经减压蒸馏、萃取、 干燥、蒸干得到产物；
[0010] (3)将步骤(2)中得到的产物和水合肼在乙醇中进行回流反应，经减压蒸馏得到产 物；
[0011] (4)将步骤（3)得到的产物和靛红加入到乙醇中，然后加入甲醛、冰乙酸，常温搅 拌，得到靛红酰肼类衍生物。
[0012] 其中：
[0013]步骤⑴中，取代的苯甲酸、氯化亚砜的用量比例为lg:5mL，取代的苯甲酸为对氯 苯甲酸或邻甲氧基苯甲酸。
[0014] 步骤(1)中，回流反应2~4h。
[0015] 步骤⑵中，浓硫酸、甲醇与步骤⑴中取代的苯甲酸的用量比例为lmL:10mL:2g。
[0016] 步骤(2)中，回流反应2~4h。
[0017] 步骤⑶中，7K合肼、乙醇与步骤⑴中取代的苯甲酸的用量比例为5mL:10mL:lg。
[0018] 步骤(3)中，回流反应7~8h。
[0019] 步骤（4)中，靛红、乙醇、甲醛、冰乙酸与步骤（1)中取代的苯甲酸的用量比例为 0 · 2g: 20mL: 0 · 06g: 0 · 5mL: 2g，常温搅拌 8 ~9h。
[0020] 所述的靛红酰肼类衍生物用于制备抗肿瘤药物。
[0021] 本发明的有益效果如下：
[0022]本发明将具有良好抗肿瘤活性的靛红引入酰肼骨架，得到对肿瘤具有明显抑制作 用的靛红酰肼类衍生物，且所用原料便宜，简单易得，反应步骤少，产率高，适合工业化生 产。
【具体实施方式】
[0023]以下结合实施例对本发明做进一步描述。
[0024] 实施例1
[0025] 4-氯4'-((2,3-吲噪醌-1-基）甲基)苯甲酰肼的制备：
[0027] (1)将2g对氯苯甲酸、10mL氯化亚砜置于圆底烧瓶中，回流反应2h，减压蒸馏得到 产物；
[0028] (2)将步骤（1)中得到的产物、lmL浓硫酸置于圆底烧瓶中，加入10mL甲醇作为反应 溶剂，回流反应4h。然后减压蒸馏，用水和乙酸乙酯萃取，保留有机层，无水硫酸钠干燥、蒸 干得到产物；
[0029] (3)将步骤(2)中得到的产物与lOmL水合肼置于圆底烧瓶，加入20mL乙醇作为反应 溶剂，回流反应7h，减压蒸馏，得产物；
[0030] (4)将0 · 23g步骤(3)中得到的产物、0 · 2g靛红置于圆底烧瓶，加入20mL乙醇，然后 加入0.06g甲醛，0.5mL冰乙酸，常温搅拌8h得最终产物。
[0031] 实施例1产品测试结果如下：
[0032] 黄色粉末，产率为55%，Mp:282.7-282.8°C 匪R(400MHz，CDC1 3) :4.6288(s, 2H),7.1919-7.2455(m,2H),7.4715-7.5103(m,lH),7.6762-7.7174(m,3H),7.9201-7.9415 (d，J = 8.56Hz,2H)，13.3418(s，lH)，13.7089(s，lH)。
[0033] 实施例2
[0034] ~'-((2,3-吲哚醌-1-基）甲基)-2-甲氧基苯甲酰肼的制备：
[0036] (1)将2g邻甲氧基苯甲酸、lOmL氯化亚砜置于圆底烧瓶中，回流反应2h，减压蒸馏 得到产物；
[0037] (2)将步骤(1)中得到的产物、lmL浓硫酸置于圆底烧瓶中，加入lOmL甲醇作为反应 溶剂，回流反应4h。然后减压蒸馏，用水和乙酸乙酯萃取，保留有机层，无水硫酸钠干燥、蒸 干得到产物；
[0038] (3)将步骤(2)中得到的产物与lOmL水合肼置于圆底烧瓶，加入20mL乙醇作为反应 溶剂，回流反应8h，减压蒸馏，得产物；
[0039] (4)将0.226g步骤(3)中得到的产物、0.2g靛红置于圆底烧瓶，加入20mL乙醇，然后 加入0.06g甲醛，0.5mL冰乙酸，常温搅拌9h得最终产物。
[0040] 实施例2产品测试结果如下：
[0041] 黄色粉末，产率为80%，]\^:300.9-301.0°(：.1!1丽1?(40010^，〇0(：13):4.0708-4.1051(d,3H),4.5700-4.6279(m,2H),7.1740-7.2119(m,2H),7.2650-7.3593(m,2H), 7.4482-7.5514(m,lH),7.6504-7.6873(m,lH),7.9427-8.1540(m,2H),11.8072(s,lH), 13.2072(s，lH)〇
[0042] 对实施例1-2得到的产品进行如下抗癌活性研究：
[0043] 1、实验材料
[0044] 1.1细胞株
[0045] 人乳腺癌细胞（human breast cancer cells) ;MCF
[0046] 人胃癌细胞（human gastric cancer cells);SGC
[0047] 1.2试剂
[0048] RPMI 1640培养基（GIB⑶），新生牛血清（杭州四季青生物工程材料），胰蛋白酶 (Sigma)，MTT(Sigma)，注射用链霉素（山东瑞阳制药，lg 100万单位/支），注射用青霉素钠 (山东鲁抗医药，80万单位/支）。其它常用化学试剂均为国产分析纯。
[0049] 2、实验方法
[0050] 2.1培养基的配制
[0051 ] RPMI 1640培养基(Gibcio USA)-袋加水一升，补加2g碳酸氢钠，10万单位青霉素 和100mg链霉素，调节pH值至7.4，用0.22mm除菌滤膜过滤除菌。90mL培养基加灭活新生牛血 清10mL即为完全培养液。胰蛋白酶用D-hanks缓冲液配成0.25%溶液，过滤除菌后4°C保存 备用。
[0052] 2.2药液的配制
[0053] 准确称取被测样品1 .Omg，加到灭菌的1.5mL离心管中，加入DMSO lmL，配成lmg/mL 原液，-40 °C冷冻保存。临用前融化后用适量D-hanks稀释成相应浓度应用。
[0054] 2.3细胞培养及传代
[0055] 细胞均贴壁培养于含10mL完全培养液细胞培养瓶中，于37°C、5%⑶2、饱和湿度下 培养。细胞长满瓶底后用灭菌D-hanks液洗两次，加0.25 %胰蛋白酶消化细胞2min，倒掉胰 蛋白酶，待轻摇细胞能完全脱落后，加完全培养液30mL后，用移液管吹散细胞，分装于3个新 的细胞培养瓶中，继续培养。
[0056] 2.4抗癌活性测试
[0057]取刚刚长成完整单层的细胞一瓶，胰蛋白酶消化后收集细胞，用移液管吹打均匀， 取两滴细胞悬液锥虫蓝(Trypan Blue)染色，于显微镜下计数活细胞数目（死细胞数目不得 超过5% )，用完全培养液调整细胞数目至1 X 104个细胞/mL。于96孔细胞培养板中每孔加入 100yL细胞悬液，将培养板置于C02培养箱中培养24h，取出培养板后于每孔中加 IlyL含不同 浓度被测样品的溶液，使得药物终浓度分别为50，25，12.5，6.25和3.125yg/mL，每个浓度设 3个平行孔，另设6孔细胞作正常对照孔和阳性5-氟尿嘧啶对照孔。加完药后培养板于微孔 板振荡器上振荡混匀，置于⑶2培养箱中继续培养24h。取出培养板，每孔加入25yL 5mg/mL 的MTT液，振荡混匀，继续培养4h。加入每孔100yL DMS0后培养10min。酶标仪测定各孔光吸 收(0D值），测定波长490nm。根据各孔0D值通过CalcuSyn软件计算药物对四种细胞增殖的抑 制率，g卩IC 5〇值，实验结果见表1。
[0058]表1药物抗癌细胞增殖实验
[0060] 三次平行实验，实验结果取平均值，误差在5-10 %之间。
【主权项】
1. 一种靛红酰肼类衍生物，其特征在于其结构式为：2. -种权利要求1所述的靛红酰肼类衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 将取代的苯甲酸、氯化亚砜进行回流反应，经减压蒸馏得到产物； (2) 将步骤（1)中得到的产物和浓硫酸在甲醇中进行回流反应，经减压蒸馏、萃取、干 燥、蒸干得到产物； (3) 将步骤(2)中得到的产物和水合肼在乙醇中进行回流反应，经减压蒸馏得到产物； (4) 将步骤(3)得到的产物和靛红加入到乙醇中，然后加入甲醛、冰乙酸，常温搅拌，得 到靛红酰肼类衍生物。3. 根据权利要求2所述的靛红酰肼类衍生物的制备方法，其特征在于:步骤（1)中，取代 的苯甲酸、氯化亚砜的用量比例为1 g: 5mL，取代的苯甲酸为对氯苯甲酸或邻甲氧基苯甲酸。4. 根据权利要求2所述的靛红酰肼类衍生物的制备方法，其特征在于:步骤（1)中，回流 反应2~4h。5. 根据权利要求2所述的靛红酰肼类衍生物的制备方法，其特征在于:步骤(2)中，浓硫 酸、甲醇与步骤(1)中取代的苯甲酸的用量比例为lmL :10mL:2g。6. 根据权利要求2所述的靛红酰肼类衍生物的制备方法，其特征在于:步骤(2)中，回流 反应2~4h。7. 根据权利要求2所述的靛红酰肼类衍生物的制备方法，其特征在于:步骤(3)中，水合 肼、乙醇与步骤(1)中取代的苯甲酸的用量比例为5mL :10mL:lg。8. 根据权利要求2所述的靛红酰肼类衍生物的制备方法，其特征在于:步骤(3)中，回流 反应7~8h。9. 根据权利要求2所述的靛红酰肼类衍生物的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，靛 红、乙醇、甲醛、冰乙酸与步骤（1)中取代的苯甲酸的用量比例为0.2g: 20mL: 0.06g: 0.5mL: 2g，常温搅拌8~9h。10.-种权利要求1所述的靛红酰肼类衍生物的应用，其特征在于:靛红酰肼类衍生物 用于制备抗肿瘤药物。
【文档编号】A61P35/00GK106045896SQ201610510449
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月30日
【发明人】孙娟, 朱海亮, 连志敏, 王苏, 刘汉宇
【申请人】山东理工大学