吲达帕胺的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了吲达帕胺的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的吲达帕胺的药物组合物中含有吲达帕胺和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)。吲达帕胺、化合物(Ⅰ)单独作用时，对脂肪性肝炎具有治疗作用；吲达帕胺和化合物(Ⅰ)联合作用时，对脂肪性肝炎的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗脂肪性肝炎的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
间达帕胺的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，设及吗I达帕胺的新用途，具体设及吗I达帕胺的药物组 合物及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 吗I达帕胺为横胺类利尿药，具有利尿和巧括抗作用，是一种强效、长效的降压药。 临床上还用于充血性屯、力衰竭时水钢滞留的治疗。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种吗I达帕胺的药物组合物，该药物组合物中含有吗I达帕 胺和一种结构新颖的天然产物，吗I达帕胺和该天然产物可协同治疗脂肪性肝炎。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0005] -种具有下述结构式的化合物(I)，
[0006]
[0007] -种吗I达帕胺的药物组合物，包括吗I达帕胺、如权利要求1所述的化合物（I)和药 学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。
[000引进一步地，药学上可W接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：（a)将弟活粉碎，用65~75%乙醇 热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取， 分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中正下醇取物用大 孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65 %乙醇洗脱10个柱体积，收集65%洗脱 液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中65%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离， 依次用体积比为65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤 (C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1、7:巧Pl:l的二氯甲烧-甲醇梯度 洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分 浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化 合物(I)。
[0011] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用70%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012] 进一步地，化合物(I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0013] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烧代替乙酸乙醋进行萃 取，得到二氯甲烧萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备治疗脂肪性肝炎的药物中的应用。
[0015] 上述吗I达帕胺的药物组合物在制备治疗脂肪性肝炎的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017] 本发明提供的吗I达帕胺的药物组合物中含有吗I达帕胺和一种结构新颖的天然产 物，吗化帕胺、化合物（I)单独作用时，对脂肪性肝炎具有治疗作用；吗化帕胺和化合物（I) 联合作用时，对脂肪性肝炎的治疗效果进一步提高，可W开发成治疗脂肪性肝炎的药物。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020] 分离方法：（a)将弟活（2kg)粉碎，用70%乙醇热回流提取（1化X3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水饱和的正下醇 (化X3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙醋萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65%乙醇洗脱 10个柱体积，收集65%洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中65%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1(9个柱体积）、35:1(10个柱体积）、15:1(8 个柱体积)和7:1(8个柱体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤k)中组分4 用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1(6个柱体积）、7:1(7个柱体积)和1:1(6个柱 体积)的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)(纯度大于98 % )。
[0021] 结构确证:皿斗51-15显示[1+化]+为111八473.3014，结合核磁特征可得分子式为 C3地42〇3，不饱和度为 10。核磁共振氨谱数据δκ(邮m，DMSO-ds，500MHz):H-1 (2.04，m)，H-1 (2.29，m)，H-3(2.11，m)，H-3(2.36，m)，H-5(1.55，m)，H-6(1.32，m)，H-6(1.58，m)，H-7 a.83，m)，H-7(2.07，m)，H-ll(1.86，m)，H-ll(2.04，m)，H-12(1.31，m)，H-12(2.05，m)，H-15 (2.26，m)，H-15(2.32，m)，H-16(1.40，m)，H-16(1.49，m)，H-18(0.86，s)，H-19(0.91，s)，H- 20(2.17，m)，H-21(0.94，d，J = 6.5)，H-22(1.33，m)，H-22(1.69，m)，H-23(4.85，d，J = 11.0)，H-24(6.97，s)，H-27(1.83，s)，H-28(1.06，s)，H-29(1.01，s)，H-30(4.42，br，s)，H- 30 (4.68，br，s);核磁共振碳谱数据Sc (ppm，DMSO-ds，125MHz): 51.7 (C出，1-〇,209.4((：，2- C)，55.6(CH2,3-C)，38.5(C，4-C)，52.4(CH，5-C)，19.8(CH2,6-C)，25.7(CH2,7-C)，135.4(C， 8-C)，147.1(C，9-C)，35.2(C，10-C)，25.9(Ol2，ll-C)，31.1(ai2，12-C)，67.7(C，13-C)， 155.0(C，14-C)，26.5(Ol2，15-C)，37.6(CH2，16-C)，49.1(C，17-C)，18.2(CH3，18-C)，17.3 (CH3，19-C)，34.4(CH，20-C)，15.1(CH3,21-C)，35.3(CH2,22-C)，78.9(CH，23-C)，149.2(CH， 24-C)，129.0(C，25-C)，173.7(C，26-C)，10.2(Ol3,27-C)，26.1(ai3,28-C)，20.7(ai3,29- 〇，1〇3.2(畑2,3〇-〇。红外光谱表明该化合物含有幾基（1714細-1)和曰，0-不饱和内醋 (1754cnfi) c/H-NlR谱数据显示五个单峰甲基信号[δW.86(Me-18)，0.91(Me-19)，1.01(Me- 29)，1.06(]^-28)，1.83(]^-27)]，一个双峰甲基信号[5朋.94((1^ = 6.5化，]\^-21)]，一个 締属亚甲基质子信号[SH4.42(br，s，H-30)和4.68(枯，3，护30)]，一个締属次甲基质子信号 [δ册.97(3，护24)]，^及一个含氧次甲基质子信号[6^.85((1，1=11.0化，护23)]。13(：-醒尺 谱显示30个共振碳信号，包括六个甲基，十个亚甲基(一个締属亚甲基），四个次甲基（一个 締属次甲基，一个含氧次甲基），W及十个季碳(两个幾基，四个締控季碳）dHMB幻普中Η-24(δ 册.97)与 〇22(5〔35.3)，(：-23(5〔78.9)，(：-25(5(：129.0)，(：-26(5(：173.7)和(：-27(5(：10.2)的 相关性表明该化合物含有一个α，β-不饱和内醋结构。通过iH-iH COSY谱中自旋系统此-1/ 出-3，H-5/出-6/出-7，出-11/出-12，此-30/出-15/出-16，出-21/H-20/出-22，HMBC 谱中 Me-18， Me-19，Me-21，Me-28，Me-29和此-30的相关性W及α，β-不饱和内醋结构可W构建该化合物 的平面结构。综合氨谱、碳谱、歷Β村普和N0ESY谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本 确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。
[0022] 该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0023]
〇
[0024] 实施例2:药理作用
[0025] 本实施例使用高能量合剂制备脂肪性肝炎大鼠模型，测定大鼠多种血清指标水 平，观察药物对脂肪性肝炎的治疗作用。
[0026] 1、材料与方法
[0027] 1.1 动物
[00%] SD大鼠，SPF级，体质量(200 ± 20) g(甘肃中医学院实验动物中屯、）。
[00巧]1.2试剂与样品
[0030] 吗I达帕胺购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例1。大 鼠 IgG化ISA、白蛋白化ISA、ALTELISA检测试剂盒(美国USCN);大鼠 SO呢LISA、丙二醒化ISA 试剂盒（日本株式会社同仁化学研究所）。乙醇为分析纯（国药集团）。
[0031] 1.3 仪器
[0032] 恒溫水浴箱、分光光度计、移液枪(广州聚能生物科技有限公司）
[0033] 1.4大鼠分组及模型制备
[0034] 取正常喂养1周后的大鼠100只，随机分为空白对照组、模型对照组、吗I达帕胺组 (80mg · kg-i)、化合物（I)组(80mg · kg-i) J引达帕胺与化合物（I)组合物组【40mg · kg-i日引达 帕胺+40mg · kg-i化合物（I)】。每组20只，均给W普通饲料，自由饮水。其中，模型组大鼠附加 高能量合剂，用合剂加蒸馈水配制成质量浓度为Ig/mL的混浊液，按Ig高能合剂/lOOg大鼠 体质量的量，每天灌胃1次，连续30d。结果，观察到大鼠行动迟缓、毛色晦暗、肝脏有不同程 度的肿大或右肋下触痛敏感、进食量减少等体貌特征，而且肝脏组织肥染色发现，肝小叶结 构完整，少许细胞出现脂肪变性，汇管区有炎症细胞浸润，部分肝细胞坏死，说明造模成功。 (高能量合剂的组成为猪油15g、植物油15g、胆固醇7.5g、薦糖15g、胆盐Ig、奶粉8g、复合维 生素〇.5g、吐溫8.5mL、丙二醇5血，加蒸馈水至100血。）造模成功后7d开始给药，各药物组将 药物混入粉碎的饲料中，压制烘干，连续给药15d，给药结束后按造模前正常的饲养方法进 行饲养。
[0035] 1.5实验动物处理
[0036] 给药结束，正常饲养7d后，麻醉大鼠，股动脉采血(不加抗凝剂)约5mL。然后，断颈 处死大鼠，剖腹摘取肝脏，置于4 %福尔马林溶液中固定。
[0037] 1.6血清检测
[0038] 利用酶联免疫法分别对S0D、MDA、血清白蛋白（ALB)W及ALT运四种生化物质进行 定量检测，将采得的血液置于试管中，待其凝固后，分离血清。然后，准备酶联反应孔板，设 定空白孔、标准孔W及加标孔，分别加样，按照溫育^配液^洗涂^加酶^溫育^洗涂^显 色^终止的步骤，应用SOD试剂得到测定液。在待测样品终止15min内进行测定，W空白孔调 零，450nm波长下依次测量各孔的吸光度，分别得到SOD和MDA的0D值。由于光度值直接反映 了生化物质含有量的变化，因本实验直接用它进行结果比较与分析，不进行含有量值的转 换。
[0039] 1.7统计学方法
[0040] 利用SPSS12.0统计软件进行分析，结果Wx±s表示，实验结果采用方差分析，组间 差异的两两比较采用q检验。
[0041 ] 2、实验结果
[0042] 2.1对SD大鼠血清ALB、ALT、S0D与MDA水平的影响
[0043] 与空白对照组比，模型对照组大鼠血清ALB、S0D水平显著降低(P<0.01)，ALT、MDA 水平显著升高(P<〇.01)，说明造模成功；与模型对照组比，吗I达帕胺组、化合物（I)组大鼠 血清ALB、S0D水平升高(P<0.05)，ALT、MDA水平降低(P<0.05);与模型对照组相比，吗I达帕 胺与化合物（I)组合物组大鼠血清ALB、SOD水平显著升高(P<0.01)，ALT、MDA水平显著降低 。<0.01)。结果见表1。
[0044] 表1对SD大鼠血清ALB、ALT、S0D与MDA水平的影响（X杖)
[0045]
[0046]
[0047] 肝炎发病机制复杂，导致肝细胞损害和坏死，病理过程中免疫系统的参与是主要 的病理环节。有研究证实，在肝病变过程中，肝脏局部会聚集大量的化eg细胞，是外周化eg 细胞对病变组织的趋化，表明在肝病过程中免疫机制是增强的。此外还有非免疫因素，如微 循环障碍、内毒素化TM)和氨基酸失衡等，氧自由基(0FR)与病毒性肝炎关系之研究正日益 引起重视并逐步深入。0FR对组织的损害，除了对肝细胞直接毒性外，它还参与免疫功能素 乱、肝微循环障碍、内毒素血症、巧稳定失衡等一系列病毒性肝炎的病理生理过程，在整个 病理过程中都可能对肝细胞造成损害。
[004引上述结果表明，吗I达帕胺、化合物（I)单独作用时，对脂肪性肝炎具有治疗作用；吗I 达帕胺和化合物（I)联合作用时，对脂肪性肝炎的治疗效果进一步提高，可W开发成治疗脂 肪性肝炎的药物。
[0049]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，υ2. -种吗I达帕胺的药物组合物，其特征在于:包括吗I达帕胺、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的吗I达帕胺的药物组合物，其特征在于:药学上可W接受的载体 包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体 或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的吗I达帕胺的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、胶 囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、 栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将弟 活粉碎，用65~75 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋 和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步 骤(a)中正下醇取物用大孔树脂除杂，先用20 %乙醇洗脱9个柱体积，再用65 %乙醇洗脱10 个柱体积，收集65 %洗脱液，减压浓缩得65 %乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中65 %乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱 得到4个组分；（d)步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1、7:1和1:1 的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相 硅胶分离，用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱液，洗 脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用70%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烧代 替乙酸乙醋进行萃取，得到二氯甲烧萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗脂肪性肝炎的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的吗I达帕胺的药物组合物在制备治疗脂肪性肝炎的药物中 的应用。
【文档编号】C07D307/58GK106083778SQ201610416773
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月7日 公开号201610416773.7, CN 106083778 A, CN 106083778A, CN 201610416773, CN-A-106083778, CN106083778 A, CN106083778A, CN201610416773, CN201610416773.7
【发明人】刘慎权
【申请人】刘慎权