专利名称：甾醇基色谱固定相的制备方法
甾醇基色谱固定相的制备方法技术领域
本发明属于液相色谱技术领域，具体涉及一种留醇基色谱固定相的制备方法。
背景技术：
高效液相色谱法(HPLC)是当代色谱技术最主要的组成部分，是近代分析化学发展最快、应用最广的分离分析技术，它在化学、医药、食品、环保、生化及工业制备等众多领域发挥越来越重要的作用。在高效液相色谱系统中，固定相居于重要地位，高选择性色谱固定相的研制是现代分析化学的前沿研究领域，新型液相色谱固定相的开发具有十分重要的科研意义与应用价值。。
留醇是一类由3个己烷环及一个环戊烷稠合而成的环戊烷多氢菲衍生物，它是广泛存在于生物体内的一类重要天然活性物质，按其原料来源可分为动物性留醇、植物性甾醇和菌类留醇等三大类。动物性留醇以胆固醇为主，植物性留醇主要为谷留醇、豆留醇和菜油甾醇等。它们不仅是构成生物膜的重要组成部分，而且还是合成许多激素的前体物质。
留醇的分子结构不仅赋予其极强疏水性，而且还使其具有独特的空间结构与液晶性能，正因为如此，近年来以留类化合物为配体的色谱分离材料引起了广大色谱分析工作者的极大兴趣，开发了多种留醇基色谱固定相，并将其广泛用于正相色谱分离留类激素化合物、反相色谱分离疏水性化合物如稠环芳烃类化合物、富勒烯、萘乙胺光学异构体等。该类固定相不仅具有与ODS键合固定相相类似的疏水作用特点，而且随着分离温度的变化呈现一定的液晶性能，在高水相体系条件下不会发生固定相“坍塌“而导致溶质保留降低的现象，另外，一些电负性元素(如O、N)的引入，使得该固定相由于某些极性基团的出现(如醚、甲酸酯、酯)而呈现一定的极性特点。
目前报道的留醇类固定相制备方法主要有两种方法一种方法是先将硅胶与三乙氧基硅烷反应生成硅氢化硅胶，然后在Karstedt催化剂作用下通过硅氢加成反应将胆固醇不饱和酸酯固定在娃胶表面(J. J. Pesek, Μ. T. Matyska, E. J. ffilliamsen, R. Tam, Chromatog raphia, 41 (1995) 301-310),该类固定相已被美国MicroSolv公司商品化；另一种方法操作相对简便——通过甾醇氯甲酸酯与氨丙基硅烷改性的硅胶直接键合而成(B. Buszewski, M. Jezierska, O. G. Barbara. Materials Chemistry and Physics, 72 (2001) 30 - 41)。但两种方法都需要首先将留醇进行改性，大幅增加了原料成本，而且第一种方法的反应条件还较为严格，且催化剂非常昂贵；第二种方法所使用的配体原料留醇氯甲酸酯除成本相对未改性的留醇较高外，性质还较活泼，对空气湿度比较敏感。发明内容
本发明的目的在于提供一种留醇基色谱固定相制备方法。该固定相制备方法简单，成本低廉，用途广泛。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为
一种留醇基色谱固定相的制备方法，所述留醇基色谱固定相由偶联剂分别与微球形的无机基质填料和留醇类化合物反应制得，所述偶联剂为具有如下的结构通式的异氰酸烧基娃烧:
权利要求
1.一种留醇基色谱固定相的制备方法，其特征在于所述留醇基色谱固定相由偶联剂分别与微球形的无机基质填料和留醇类化合物反应制得，所述偶联剂为具有如下结构通式的异氰酸烷基硅烷
2.根据权利要求I所述的留醇基色谱固定相的制备方法，其特征在于所述偶联剂先与微球形的无机基质填料反应，然后再与留醇类化合物反应，具体步骤为1)在溶有异氰酸烷基硅烷偶联剂的无水甲苯溶液中加入微球形无机基质填料，惰性氛围下加入三乙胺作为催化剂，100 160°C下回流反应8 24小时，经冷却、抽滤、洗涤、真空干燥，得到异氰酸烷基硅烷偶联剂键合固定相；2)然后，将异氰酸烷基硅烷偶联剂键合固定相分散于无水甲苯中，惰性氛围下加入甾醇类化合物与吡啶，搅拌溶解后于50 100°C下反应8 24小时，经冷却、抽滤、洗涤、干燥，即得留醇基色谱固定相。
3.根据权利要求I所述的留醇基色谱固定相的制备方法，其特征在于所述偶联剂先与甾醇类化合物反应，然后再与微球形的无机基质填料反应，具体步骤为1)在溶有留醇类化合物的无水甲苯溶液中逐滴加入异氰酸烷基硅烷偶联剂，惰性氛围下加入吡啶，在50 100°C下搅拌反应8 24小时；2)然后，往反应体系中加入微球形无机基质材料，惰性氛围下加入三乙胺作为催化剂， 100 160°C下回流反应8 24小时，经冷却、抽滤、洗涤、真空干燥，即得甾醇基色谱固定相。
4.根据权利要求1、2或3所述的留醇基色谱固定相的制备方法，其特征在于所述甾醇类化合物为胆固醇、谷留醇、豆留醇、菜油留醇和真菌固醇中的一种。
5.根据权利要求1、2或3所述的制备方法，其特征在于所述无机基质填料为硅胶、氧化错、氧化钛和氧化招中的一种。
6.根据权利要求4所述的留醇基色谱固定相的制备方法，其特征在于所述无机基质填料为硅胶、氧化锆、氧化钛和氧化铝中的一种。
7.根据权利要求1、2或3所述的留醇基色谱固定相的制备方法，其特征在于所述异氰酸烷基硅烷的用量为I 6mmol/克无机基质填料，异氰酸烷基硅烷与留醇类化合物的摩尔比为I :1 I :8。
8.根据权利要求6所述的留醇基色谱固定相的制备方法，其特征在于所述异氰酸烷基硅烷的用量为I 6mmol/克无机基质填料，异氰酸烷基硅烷与留醇类化合物的摩尔比为 11~1 :8。
全文摘要
本发明公开了一种甾醇基色谱固定相的制备方法，所述甾醇基色谱固定相由偶联剂分别与微球形的无机基质填料和甾醇类化合物反应制得，所述偶联剂为具有如下结构通式的异氰酸烷基硅烷，其中，X为甲基或乙基，m=3～8。本发明由于直接使用甾醇类化合物进行反应，因此，制备过程简单、成本低廉；制备的甾醇基色谱固定相是一种普适型疏水作用色谱固定相，对绝大部分化合物都具有很好的分离选择性，可广泛用于各类样品分离。
文档编号B01J20/30GK102974329SQ201210505338
公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月30日 优先权日2012年11月30日
发明者胡志雄, 张维农, 齐玉堂, 李勇强 申请人:武汉工业学院