关闭双侧负压收集出孔11和中间负压收集出孔13，将进样孔2的去离子水更换为待筛选的样品溶液，打开出样孔12，打开双侧负压收集出孔11和中间负压收集出孔13，保持流速，进行不间断筛选。样品溶液在阶角和扰流柱15的影响下，在阶角处发生扰动湍流，符合阶角微通道6的宽度的微粒被吸入收集池7。
[0020]样品全部注入进样孔2后，关闭出样孔12、关闭双侧负压收集出孔11和中间负压收集出孔13，一次筛选完毕。将出样孔12第一次筛选过的样品，再次在型号一芯片上重复筛选2次。
[0021]最后一次样品全部注入进样孔2后，关闭出样孔12、关闭双侧负压收集出孔11和中间负压收集出孔13，更换样品为去离子水，打开出样孔12、打开双侧负压收集出孔11和中间负压收集出孔13，注入去离子水冲洗5分钟。
[0022]将三次在负压收集出孔11和中间负压收集出孔13收集的筛选样品，按照以上操作，再在型号二芯片上，筛选3次，在型号二芯片的出样孔12收集得到粒径区间在200 μπι< 0 < 300 μ m的微球。
[0023]经测试，经过两规格型号芯片各3次筛选，获得的200 μπι < 0 < 300 μm区间的微球的粒径分散度小于6.5%。
[0024]注意，去离子水和样品溶液之间要连续流动，在芯片的任何一个通道中两者之间不能有气泡隔断。
[0025]实施例二
参照图1至图3的形状结构，一种阶梯型微球筛选芯片，型号八芯片:，主通道3长1mm,宽1mm，支通道4和台阶筛选通道5的宽度是0.8mm，其连接的两条台阶筛选通道5是10级、阶长10mm，梯台高5mm的阶梯，台阶筛选通道5汇合后通过1mm长的通道通向出样孔12。阶角微通道6的宽度5 μm，收集池出样通道8的宽度是25 μπι。双侧收集主通道9和中间收集主通道10的宽度均为0.5mm ;芯片的通道深度一致是10 μπι。
[0026]按照实施例一操作，筛选3次，在型号八芯片的负压收集出孔11和中间负压收集出孔13收集的筛选样品，其尺寸为粒径< 5 ym的微球。
[0027]实施例三
参照图1至图3的形状结构，一种阶梯型微球筛选芯片，型号四芯片:主通道3长10mm，宽1_，支通道4和台阶筛选通道5的宽度是0.8mm,其连接的两条台阶筛选通道5是7级、阶长10_，梯台高5mm的阶梯，台阶筛选通道5汇合后通过5mm长的通道通向出样孔12。阶角微通道6的宽度70 μm，收集池出样通道8的宽度是280 μπι。双侧收集主通道9和中间收集主通道10的宽度均为0.5mm ;芯片的通道深度一致是200 μπι。
[0028]型号六芯片:主通道3长5mm，宽1mm，支通道4和台阶筛选通道5的宽度是0.8mm，其连接的两条台阶筛选通道5是8级、阶长10mm，梯台高5mm的阶梯，台阶筛选通道5汇合后通过1mm长的通道通向出样孔12。阶角微通道6的宽度30 μ m，收集池出样通道8的宽度是150 μπι。双侧收集主通道9和中间收集主通道10的宽度均为0.5mm ;芯片的通道深度一致是 100 μ m。
[0029]按照实施例一操作，在型号四芯片和型号六芯片上各筛选3次，最后在型号六芯片的出样孔12收集得到粒径区间在30 μπι < 0 < 70 μπι的微球。
[0030]经测试，经过两规格型号芯片各3次筛选，获得的200 μπι < 0 < 300 μm区间的微球的粒径分散度小于5%。
[0031]说明:如果管道堵塞，利用双侧负压收集出孔(11)、出样孔(12)、中间负压收集出孔(13)、和备用压力孔(14)的组合使用，加压反冲，解决堵塞。
【主权项】
1.一种阶梯型微球筛选芯片，其主要由进样孔(2)，台阶筛选通道(5)和出样孔(12)三部分组成，其特征在于:在芯片体(I)的一端开有进样孔(2)，长5-10mm的主通道(3)—端与进样孔(2)连通，另一端分为两侧两条支通道(4)，每条支通道(4)各自联通一条台阶筛选通道(5);两条台阶筛选通道(5)的阶梯走向均向着内侧的主通道(3)的中间线，在通过7~10级阶梯后汇入到一起，通过5-10mm长的通道与出样孔(12)连接；每条台阶筛选通道(5)的每一个阶梯的拐角的一侧和上一阶与下一阶连接拐角，都对称加工有I个阶角微通道(6)，每个阶角微通道(6)都连接一个收集池(7);在每条台阶筛选通道(5)的阶梯外侧拐角的收集池(7)，通过收集池出样通道(8)与双侧收集主通道(9)相连，双侧收集主通道(9)平行于主通道(3)的中间线，并且通向在出样孔(12)—端的双侧负压收集出孔(11);在每条台阶筛选通道(5)的阶梯内侧拐角的收集池(7)，通过收集池出样通道(8)与在主通道(3)的中间线上的中间收集主通道(10)相连，中间收集主通道(10)朝向出样孔(12)—端连通中间负压收集出孔(13)，另一端连通备用压力孔(14)。
2.根据权利要求1所述的一种阶梯型微球筛选芯片，其特征在于:所述台阶筛选通道(5)的每一级阶梯尺寸一致，都是阶长10_，梯台高5_，在台阶筛选通道(5)的每一级阶梯的阶角前面，都无规则分布有5-6个长度和粗细不相等的扰流柱(15);台阶筛选通道(5)的阶角微通道(6)的宽度在5 μπι~300 μπι之间，有2~8个规格；每片芯片的2条台阶筛选通道(5)的阶角微通道(6)的宽度尺寸一致；支通道(4)和台阶筛选通道(5)的宽度是主通道(3)宽度的4/5，收集池出样通道(8)的宽度是阶角微通道(6)宽度的2~5倍；双侧收集主通道(9)和中间收集主通道(10)的宽度均为0.5mm ;每片芯片的通道深度一致，各芯片的通道深度根据阶角微通道(6)的宽度2~8个规格，依次对应在10 μπι~1000 μπι之间2~8个规格。
3.使用权利要求1-2所述的一种阶梯型微球筛选芯片的方法，其特征在于，操作步骤如下:操作时，根据筛选微球粒径区间，选择阶角微通道(6)的宽度尺寸一大一小的2片芯片，先将第一片阶角微通道(6)的宽度尺寸大的芯片的双侧负压收集出孔(11)、中间负压收集出孔(13)和备用压力孔(14)关闭，打开出样孔(12)，将去离子水从进样孔(2)打入，直至出样孔(12)有去离子水流出，再打开双侧负压收集出孔(11)、中间负压收集出孔(13)提供负压，将去离子水引入双侧收集主通道(9)和中间收集主通道(10);待双侧负压收集出孔(11)和中间负压收集出孔(13)均有去离子水流出后，关闭出样孔(12)、关闭双侧负压收集出孔(11)和中间负压收集出孔(13)，将进样孔(2)的去离子水更换为待筛选的样品溶液，然后打开出样孔(12)、打开双侧负压收集出孔(11)和中间负压收集出孔(13)，保持流速，进行不间断筛选； 样品全部注入进样孔(2)后，关闭出样孔(12)、关闭双侧负压收集出孔(11)和中间负压收集出孔(13)，将出样孔(12)第一次筛选过的样品，再次在该芯片上重复筛选2次； 最后一次样品全部注入进样孔(2)后，关闭出样孔(12)、关闭双侧负压收集出孔(11)和中间负压收集出孔(13)，更换样品为去离子水，打开出样孔(12)、打开双侧负压收集出孔(11)和中间负压收集出孔(13)，注入去离子水冲洗5分钟； 将三次在负压收集出孔(11)和中间负压收集出孔(13)收集的筛选样品，按照以上操作，再在阶角微通道(6)的宽度尺寸小的第二片芯片上，筛选3次，最后在阶角微通道(6)的宽度尺寸小的芯片的出样孔(12 )收集得到目标粒径区间的微球。
【专利摘要】本发明提供了一种阶梯型微球筛选芯片及使用方法，其特征在于芯片体的一端开有进样孔，主通道一端与进样孔连通，另一端分为两侧两条支通道，每条支通道各自联通一条台阶筛选通道；两条台阶筛选通道在通过7~10级阶梯后汇入到一起，与出样孔连接；使用方法包括进样和筛选操作。本发明有益效果是各型号规格芯片能够组成多组多级筛选不同粒径区间的微球，提高了筛选工作效率。芯片制作方便简单，使用成本低廉，可批量大规模生产和使用。
【IPC分类】B01L3-00
【公开号】CN104607258
【申请号】CN201510028098
【发明人】徐文峰, 廖晓玲, 许杰, 李波
【申请人】重庆科技学院
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年1月20日