专利名称：中华绒螯蟹颤抖病快速诊断方法
技术领域：
本发明涉及一种水产养殖病害的快速检测方法，尤其是一种针对河蟹重大流行病——颤抖病的活体快速诊断方法。
背景技术：
中华绒螯蟹颤抖病是近年来暴发流行的重大水产病害之一，严重威胁着河蟹养殖业的发展，其病蟹患病后期的主要病征是步足颤动，故称为颤抖病，病蟹一旦发现此症状即濒临死亡，此外，近几年还发现有些颤抖病蟹在还没有表现出颤抖症状时即死亡，所以在生产实际中急需一种快速、准确、便捷的诊断技术。
目前的包涵体染色技术可以显示病蟹血液中大量寄生的病原体，但此方法只有在病原体达到一定量是才能显色，此外该技术还需要一个涂片、干燥、染色、冲洗的过程，时间约为半小时，步骤复杂，耗时较长。
发明内容
为了克服现有技术繁锁、耗时的不足，本发明提供一种中华绒螯蟹颤抖病快速诊断方法，利用已确定的颤抖病病原体可侵染蟹血细胞形成包涵体及具游动性的特点，可在不染色的情况下直接观察血液滴片，能很直观地看到病蟹机体被感染程度，只要有一个病原体在血细胞空泡中运动就能作出病原体已侵染机体的判断，有效地解决了问题。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案采用下述步骤a.采血及保存蟹按常规方法活体采血后将血样放入体积百分比为1％-20％甲醛溶液中混匀；b.制片及观察用上述混合液制滴片，在光学显微镜下观察，见血细胞中的空泡内有活动的小微生物体即可确定为颤抖病。
本发明中甲醛溶液的体积百分比优选10％。
为了使视野中的血细胞数目适于观察，本发明推荐血样与甲醛溶液的体积比为1∶0.2至1∶5，优选1∶1。
本发明方法中用光镜观察时，推荐用相差效果会更佳。
对于由相同病原体引起的其他水生动物的疾病的快速诊断可以参照本发明方法进行。
本发明的有益效果是，方法便捷、快速，准确，能在5分钟之内对还为表现出典型颤抖病症状的早期感染病蟹作出明确诊断。本发明利用已确定的颤抖病病原体可侵染蟹血细胞形成包涵体及具游动性的特点，可在不染色的情况下直接观察血液滴片，能很直观地看到病蟹机体被感染程度，只要有一个病原体在空泡中运动就能作出病原体已侵染机体的判断，整个检测过程极其简单，时间只需5分钟，避免了染色制片过程中各种人为的干扰因素。
具体实施例方式
实施例1蟹活体采血及样品保存将蟹体外洗净，用75％酒精消毒第四对步足与蟹体交界处，用微量注射器从此处刺入蟹体内取血0.02mL放入同体积的10％甲醛溶液中混匀，该血液样品可长期保存。
制片和观察取混合液0.01mL滴在载玻片上，加盖片后放置光镜40倍数下观察，见血细胞中的空泡内有活动的小微生物体，即可确定该蟹感染颤抖病。
实施例2蟹活体采血及样品保存将蟹体外洗净，用75％酒精消毒第四对步足与蟹体交界处，用微量注射器从此处刺入蟹体内取血0.02mL放入0.2倍体积的1％甲醛溶液中混匀，该血液样品可长期保存。
制片和观察取混合液0.01mL滴在载玻片上，加盖片后放置光镜100倍数下观察，见血细胞中的空泡内有活动的小微生物体，即可确定该蟹感染颤抖病。
实施例3蟹活体采血及样品保存将蟹体外洗净，用75％酒精消毒第四对步足与蟹体交界处，用微量注射器从此处刺入蟹体内取血0.02mL放入5倍体积的20％甲醛溶液中混匀，该血液样品可长期保存。
制片和观察取混合液0.01mL滴在载玻片上，加盖片后放置光镜40倍数下相差观察，见血细胞中的空泡内有活动的小微生物体，即可确定该蟹感染颤抖病。
实施例4蟹活体采血及样品保存将蟹体外洗净，用75％酒精消毒第四对步足与蟹体交界处，用微量注射器从此处刺入蟹体内取血0.02mL放入0.1倍体积的5％甲醛溶液中混匀。
制片和观察取混合液0.01mL滴在载玻片上，加盖片后放置光镜40倍数下相差观察，见血细胞中的空泡内有活动的小微生物体，即可确定该蟹感染颤抖病。
实施例5蟹活体采血及样品保存将蟹体外洗净，用75％酒精消毒第四对步足与蟹体交界处，用微量注射器从此处刺入蟹体内取血0.02mL放入6倍体积的15％甲醛溶液中混匀。
制片和观察取混合液0.01mL滴在载玻片上，加盖片后放置光镜40倍数下相差观察，见血细胞中的空泡内有活动的小微生物体，即可确定该蟹感染颤抖病。
权利要求
1.中华绒螯蟹颤抖病快速诊断方法是采用下述步骤a.采血及保存蟹按常规方法活体采血后将血样放入体积百分比为1％-20％甲醛溶液中混匀；b.制片及观察用上述混合液制滴片，在光学显微镜下观察，见血细胞中的空泡内有活动的小微生物体即可确定为颤抖病。
2.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹颤抖病快速诊断方法，其特征在于所述甲醛溶液的体积百分比为10％。
3.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹颤抖病快速诊断方法，其特征在于步骤a中血样与甲醛溶液的体积比为1∶0.2-5。
4.根据权利要求3所述的中华绒螯蟹颤抖病快速诊断方法，其特征在于所述的血样与甲醛溶液的体积比为1∶1。
5.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹颤抖病快速诊断方法，其特征在于在光学显微镜下观察时用相差。
全文摘要
本发明涉及一种水产养殖病害的快速检测方法，尤其是一种针对河蟹重大流行病——颤抖病的活体快速诊断方法。本发明所采用的技术方案是蟹按常规方法活体采血后将血样放入体积百分比为1％－20％甲醛溶液中混匀；用上述混合液制滴片，在光学显微镜下观察，见血细胞中的空泡内有活动的小微生物体即可确定为颤抖病。运用本发明的方法进行诊断，便捷、快速，准确，能在5分钟之内对还未表现出典型颤抖病症状的早期感染病蟹作出明确诊断。此外，该发明还可以用于相同病原体的感染的其它动物病害的快速诊断。
文档编号G01N1/28GK1624458SQ200410066028
公开日2005年6月8日 申请日期2004年12月14日 优先权日2004年12月14日
发明者王文 申请人:南京师范大学