专利名称：检测条斑紫菜多糖py-d2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测条斑紫菜多糖PY-D2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法。
背景技术：
已有研究表明海洋植物多糖作为抗肿瘤活性物质，不但资源丰富，而且毒副作用小，如可以克服癌症患者的化疗和放疗过程中，在杀死肿瘤细胞的同时造成对机体正常细胞的损伤，因此，从海洋植物多糖中寻找高效低毒的抗癌药物是当前肿瘤研究的重要内容之一。
条斑紫菜呈紫红微带蓝色，在分类上属于红藻门红毛菜科，是一种高蛋白、低脂肪营养丰富的食用海藻。目前且尚未出现条斑紫菜多糖PY-D2对抗肿瘤及增强免疫力作用的报导，条斑紫菜多糖PY-D2是从条斑紫菜中提取的活性物质，经实验发现条斑紫菜多糖PY-D2对免疫系统也有重要的的调节作用且具有刺激淋巴细胞增殖的结果，淋巴细胞增殖反应是常用且十分重要的免疫指标，由此，一方面可以说明条斑紫菜多糖PY-D2对提高机体免疫力的作用；另一方面通过机体免疫力的增强可以降低癌症的发病率以及间接抑制肿瘤细胞的生长，即预示着条斑紫菜多糖PY-D2在肿瘤治疗上有着广阔的应用前景。
发明内容
本发明的目的是要提供一种检测条斑紫菜多糖PY-D2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法，它不但能有效地揭示条斑紫菜多糖PY-D2的抗肿瘤及增强免疫力的作用，而且，还对条斑紫菜多糖PY-D2的利用有了进一步的认识，也促进了条斑紫菜多糖PY-D2的广泛应用。
为了达到上述的目的，本发明是这样实现的本发明的检测条斑紫菜多糖PY-D2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法的操作如下 1、多糖提取与纯化 1)条斑紫菜叶状体解冻后，烘干并剪碎，酒精回流3h脱脂肪，自然阴干，阴干后样品按照1∶50比例加水提取多糖，经过恒温100℃加热3h后抽滤，收集提取液，提取液经浓缩后，采用台式低速离心机4000rpm离心10min以弃沉渣，采用Sevag法脱蛋白，取上清液加入95％乙醇，4000rpm离心10min后取沉淀，冷冻干燥机冷冻干燥后获得粗多糖； 2)用去离子水平衡DEAE-52离子交换层析柱24h，流速为0.75mL·min-1，粗多糖配制为20mg·mL-1溶液后上样(流速为0.5mL·min-1)，用蒸馏水及3mol/LNaCl洗脱液分别洗脱，自动部分收集器收集，每管5ml，洗至无糖，用苯酚硫酸法检测，分离得到两个多糖组分，PY-D1和PY-D2，分别透析脱盐后冷冻干燥，4℃保存； 2、MTT法检测肿瘤细胞的生长 HO-8910、MCF-7、7721和K562细胞培养于含10％NCS的RPMI1640培养基中，于37℃、5％CO2培养箱中常规培养，取对数生长期细胞(5×105个/ml)，按每孔100μl接种于96孔培养板板中，培养24h后加PY-D2诱导，对HO-8910和MCF-7细胞诱导的试验组加入六个浓度(5mg·L-1，25mg·L-1，50mg·L-1，100mg·L-1，500mg·L-1和1000mg·L-1)PY-D2；对7721和K562细胞诱导的试验组加入四个浓度(25mg·L-1，50mg·L-1，100mg·L-1和500mg·L-1)PY-D2；以生理盐水为空白对照组；加入体积均为10μl/孔，各设定12个平行孔，继续培养72h后，加入10μl/孔MTT溶液(5g·L-1)，37℃孵育4～6h，加入10％SDS 37℃溶解过夜，待沉淀完全溶解后，用酶标仪于595nm处测定吸光度(A)； 3、流式细胞仪分析肿瘤细胞的细胞周期 分别选取对数生长期的细胞，每种细胞设定二个组空白对照组和高浓度多糖诱导组(500mg·L-1)。用70％乙醇于-20℃固定过夜，PBS洗2遍，依次加入50μg/mL碘化丙啶和1mg/mLRNaseA，室温避光孵育30min后上机检测； 4、数据处理 抑制率＝(A空白对照组-APY-D2诱导组)/A空白对照组)×100％，采用SPSS11.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差(X±S)表示，两组比较用t检验，p＜0.05表示差异有统计学意义； 5、鼠脾淋巴细胞的制备及原代培养 引颈脱臼法处死昆明小鼠，75％乙醇浸泡消毒，取出脾脏后用生理盐水清除血液，研磨脾脏并挤压过200目筛网，反复冲洗网膜，收集脾细胞悬液，加入淋巴细胞分离液离心(2000r/min×20min，室温)，吸出淋巴细胞层，加入RPMI1640培养液洗涤细胞，离心(800r/min×5min，室温)，用RPMI1640培养液(含10％FBS)重悬细胞，调整细胞浓度为2.0×105个/ml，淋巴细胞传96孔板，每孔100μl，细胞板置于CO2细胞培养箱培养，培养条件为37℃，5％CO2。细胞培养1天后加入一定浓度条斑紫菜多糖PY-D2组分继续培养； 6、MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的存活率 淋巴细胞96孔板加样设置如下条斑紫菜多糖组分别设置0mg·mL-1、0.25mg·mL-1、0.5mg·mL-1和1mg·mL-1；ConA组设置为条斑紫菜多糖0mg·mL-1、0.25mg·mL-1、0.5mg·mL-1和1mg·mL-1分别加100mg·L-1ConA；LPS组设置为条斑紫菜多糖0mg·mL-1、0.25mg·mL-1、0.5mg·mL-1和1mg·mL-1分别加100mg·L-1LPS，空白对照均为生理盐水，条斑紫菜多糖、ConA和LPS均为每孔10μl，每组设6个复孔，加样后置96孔板于37℃，5％CO2培养箱中，培养三天后每孔加MTT10μl(5g·L-1)，37℃孵育4～6h后，加入10％SDS 37℃溶解过夜，待沉淀完全溶解后，用酶标仪于595nm处测定吸光度(A)； 7、流式细胞仪检测淋巴细胞的细胞周期 选取对数生长期的淋巴细胞，设定六个组分别是空白对照组、100mg·L-1ConA组、100mg·L-1LPS组、1mg·mL-1PY-D2组、1mg·mL-1PY-D2组协同100mg·L-1ConA组和1mg·mL-1PY-D2组协同100mg·L-1LPS组。用70％乙醇于-20℃固定过夜，PBS洗2遍，依次加入50μg/mL碘化丙啶和1mg/mLRNaseA，室温避光孵育30min后，流式细胞仪检测细胞周期； 8、数据处理 细胞存活率＝(APYP诱导组/A空白对照组)×100％，空白对照组的细胞存活率设定为100％，采用SPSS11.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差(X±S)表示，两组比较用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。
由于使用了检测条斑紫菜多糖PY-D2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法，充分证实条斑紫菜多糖PY-D2对抗肿瘤及增强免疫力的作用，这对条斑紫菜多糖PY-D2的推广应用起了可靠而积极的作用。
图1是DE-52层析柱分离纯化条斑紫菜多糖。
图2是PY-D2对HO-8910细胞生长的抑制作用与空白对照组(0)比较#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001，n＝12，x±S。
图3是PY-D2对MCF-7细胞生长的抑制作用与空白对照组(0)比较#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001，n＝12，x±S。
图4是PY-D2对7721细胞生长的抑制作用与空白对照组(0)比较#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001，n＝12，x±S。
图5是PY-D2对K562细胞生长的抑制作用与空白对照组(0)比较#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001，n＝12，x±S。
图6是PY-D2对人肝癌细胞7721细胞周期的影响。
图7是PY-D2对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响。
图8是PY-D2对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响。
图9是PY-D2对人白血病细胞K562细胞周期的影响。
图10是条斑紫菜多糖PY-D2协同ConA对小鼠脾淋巴细胞的作用(n＝6，X±S)；*P＜0.05，**P＜0.01，与生理盐水空白对照组(0)比较；#P＜0.05，##P＜0.01，与ConA组比较。
图11条斑紫菜多糖PY-D2协同LPS对小鼠脾淋巴细胞的作用(n＝6，X±S)；*P＜0.05，**P＜0.01，与生理盐水空白对照组(0)比较；#P＜0.05，##P＜0.01，与ConA组比较。
具体实施例方式 以下将对本发明的检测条斑紫菜多糖PY-D2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法作进一步的详细描述。
具体实施如下 1、多糖提取与纯化 1)条斑紫菜叶状体解冻后，烘干并剪碎，酒精回流3h脱脂肪，自然阴干，阴干后样品按照1∶50比例加水提取多糖，经过恒温100℃加热3h后抽滤，收集提取液，提取液经浓缩后，采用台式低速离心机4000rpm离心10min以弃沉渣，采用Sevag法脱蛋白，取上清液加入95％乙醇，4000rpm离心10min后取沉淀，冷冻干燥机冷冻干燥后获得粗多糖； 2)用去离子水平衡DEAE-52离子交换层析柱24h，流速为0.75mL·min-1，粗多糖配制为20mg·mL-1溶液后上样(流速为0.5mL·min-1)，用蒸馏水及3mol/LNaCl洗脱液分别洗脱，自动部分收集器收集，每管5ml，洗至无糖，用苯酚硫酸法检测，分离得到两个多糖组分，PY-D1和PY-D2，分别透析脱盐后冷冻干燥，4℃保存； 2、MTT法检测肿瘤细胞的生长 HO-8910、MCF-7、7721和K562细胞培养于含10％NCS的RPMI1640培养基中，于37℃、5％CO2培养箱中常规培养，取对数生长期细胞(5×105个/ml)，按每孔100μl接种于96孔培养板板中，培养24h后加PY-D2诱导，对HO-8910和MCF-7细胞诱导的试验组加入六个浓度(5mg·L-1，25mg·L-1，50mg·L-1，100mg·L-1，500mg·L-1和1000mg·L-1)PY-D2；对7721和K562细胞诱导的试验组加入四个浓度(25mg·L-1，50mg·L-1，100mg·L-1和500mg·L-1)PY-D2；以生理盐水为空白对照组；加入体积均为10μl/孔，各设定12个平行孔，继续培养72h后，加入10μl/孔MTT溶液(5g·L-1)，37℃孵育4～6h，加入10％SDS 37℃溶解过夜，待沉淀完全溶解后，用酶标仪于595nm处测定吸光度(A)； 3、流式细胞仪分析肿瘤细胞的细胞周期 分别选取对数生长期的细胞，每种细胞设定二个组空白对照组和高浓度多糖诱导组(500mg·L-1)。用70％乙醇于-20℃固定过夜，PBS洗2遍，依次加入50μg/mL碘化丙啶和1mg/mLRNaseA，室温避光孵育30min后上机检测； 4、数据处理 抑制率＝(A空白对照组-APY-D2诱导组)/A空白对照组)×100％，采用SPSS11.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差(X±S)表示，两组比较用t检验，p＜0.05表示差异有统计学意义； 5、鼠脾淋巴细胞的制备及原代培养 引颈脱臼法处死昆明小鼠，75％乙醇浸泡消毒，取出脾脏后用生理盐水清除血液，研磨脾脏并挤压过200目筛网，反复冲洗网膜，收集脾细胞悬液，加入淋巴细胞分离液离心(2000r/min×20min，室温)，吸出淋巴细胞层，加入RPMI1640培养液洗涤细胞，离心(800r/min×5min，室温)，用RPMI1640培养液(含10％FBS)重悬细胞，调整细胞浓度为2.0×105个/ml，淋巴细胞传96孔板，每孔100μl，细胞板置于CO2细胞培养箱培养，培养条件为37℃，5％CO2。细胞培养1天后加入一定浓度条斑紫菜多糖PY-D2组分继续培养； 6、MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的存活率 淋巴细胞96孔板加样设置如下条斑紫菜多糖组分别设置0mg·mL-1、0.25mg·mL-1、0.5mg·mL-1和1mg·mL-1；ConA组设置为条斑紫菜多糖0mg·mL-1、0.25mg·mL-1、0.5mg·mL-1和1mg·mL-1分别加100mg·L-1ConA；LPS组设置为条斑紫菜多糖0mg·mL-1、0.25mg·mL-1、0.5mg·mL-1和1mg·mL-1分别加100mg·L-1LPS，空白对照均为生理盐水，条斑紫菜多糖、ConA和LPS均为每孔10μl，每组设6个复孔，加样后置96孔板于37℃，5％CO2培养箱中，培养三天后每孔加MTT10μl(5g·L-1)，37℃孵育4～6h后，加入10％SDS 37℃溶解过夜，待沉淀完全溶解后，用酶标仪于595nm处测定吸光度(A)； 7、流式细胞仪检测淋巴细胞的细胞周期 选取对数生长期的淋巴细胞，设定六个组分别是空白对照组、100mg·L-1ConA组、100mg·L-1LPS组、1mg·mL-1PY-D2组、1mg·mL-1PY-D2组协同100mg·L-1ConA组和1mg·mL-1PY-D2组协同100mg·L-1LPS组。用70％乙醇于-20℃固定过夜，PBS洗2遍，依次加入50μg/mL碘化丙啶和1mg/mLRNaseA，室温避光孵育30min后，流式细胞仪检测细胞周期； 8、数据处理 细胞存活率＝(APYP诱导组/A空白对照组)×100％，空白对照组的细胞存活率设定为100％，采用SPSS11.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差(X±S)表示，两组比较用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。
利用检测条斑紫菜多糖PY-D2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法所得检测结果 1)DE-52层析柱分离纯化条斑紫菜多糖 如图1所示，条斑紫菜粗多糖上柱后，经洗脱分别在第12管和第50管处出现两个吸收峰。峰形都比较集中，且两个峰分隔的管数较远，由此说明，条斑紫菜粗多糖经DE-52层析柱可以分离出两个组分，分别为PY-D1和PY-D2； 2)条斑紫菜多糖PY-D2组分对HO-8910、MCF-7、K562和7721肿瘤细胞生长的影响 不同浓度的条斑紫菜多糖PY-D2组分诱导肿瘤细胞72小时后，发现HO-8910、MCF-7、K562和7721四种肿瘤细胞的存活率都有所下降，而且，PY-D2浓度越高，肿瘤细胞的存活率越低，在相同诱导浓度下，PY-D2对人乳腺癌细胞MCF-7有较强的抑制作用，见图3，500mg·L-1PY-D2的抑制率为23.6％(p＜0.001)，1000mg·L-1PY-D2的抑制率达到32.5％(p＜0.001)；1000mg·L-1PY-D2诱导人卵巢癌细胞HO-8910的抑制率为23.9％(p＜0.001)，见图2；500mg·L-1PY-D2诱导人肝癌细胞7721的抑制率为21％(p＜0.001)，见图4；相同浓度PY-D2诱导人白血病细胞K562的抑制率为19.8％(p＜0.001)，见图5； 3)条斑紫菜多糖PY-D2对四种肿瘤细胞周期的影响 PY-D2处理人肝癌细胞7721后，诱使G0/G1期细胞增多，G2/M期细胞减少，S期细胞无明显变化，见图6。PY-D2处理人卵巢癌细胞HO-8910后，诱使G0/G1期细胞增多，G2/M期细胞无明显变化，S期细胞减少，见图7。PY-D2处理人乳腺癌细胞MCF-7后，诱使G0/G1期细胞减少，G2/M期细胞增多，S期细胞无明显变化，见图8。PY-D2处理人白血病细胞K562后，诱使G0/G1期细胞减少，G2/M期细胞增多，S期细胞无明显变化，见图9； 4)条斑紫菜多糖PY-D2组分在ConA诱导下对小鼠脾淋巴细胞生长的影响 不同浓度的条斑紫菜多糖PY-D2处理小鼠脾淋巴细胞72小时后，用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞存活率，实验结果见图10。从图中可以看出，用0.25mg·mL-1，0.5mg·mL-1和1mg·mL-1的PY-D2处理小鼠脾淋巴细胞后，与对照组相比较，淋巴细胞的存活率均有很大提高，分别高达157.5％，162.1％和173.4％(P＜0.01)，显示随PY-D2浓度增大，淋巴细胞存活率也随之增大，其中1mg·mL-1浓度组淋巴细胞的存活率最高，存在明显剂量依赖效应。在PY-D2与ConA协同作用的实验中，对照组的ConA对淋巴细胞生长有明显促进作用，高达142％。与对照组比较，三个浓度的PY-D2分别与ConA协同后，都可以明显促进淋巴细胞的生长，存活率均高于ConA单独作用(P＜0.05)，但高浓度组(0.5mg·mL-1和1mg·mL-1)的协同促进作用有所下降，且低于PY-D2单独作用时的存活率，见图10。
5)条斑紫菜多糖PY-D2在LPS诱导下对小鼠脾淋巴细胞生长的影响在条斑紫菜多糖PY-D2与LPS协同对淋巴细胞作用的实验中，三个浓度的PY-D2在与LPS协同的时候，都可以明显的促进淋巴细胞的生长，且均比LPS或PY-D2单独作用时的效果显著。用0.25mg·mL-1，0.5mg·mL-1和1mg·mL-1的PY-D2协同LPS处理小鼠脾淋巴细胞后，小鼠脾淋巴细胞的存活率分别为176.3％，172.6％和162.3％(P＜0.01)(见图11)，可见当PY-D2与LPS协同作用后，低浓度组的淋巴细胞存活率要高于高浓度组的淋巴细胞存活率，0.25mg·mL-1浓度组具有最佳协同效果。
6)流式细胞仪检测细胞周期 流式细胞仪分析细胞周期结果显示见表1。与空白对照组相比，PY-D2诱导淋巴细胞72h后，G1/G0期细胞比值减少了21.6％，G2/M期细胞没有发生明显的变化，S期的比值增加了21.8％(p＜0.01)，表明PY-D2可以促进淋巴细胞DNA合成，使细胞从G1进入S期。
表1为PY-D2对小鼠脾淋巴细胞细胞周期的影响
**P＜0.01，与生理盐水空白对照组(0)比较
权利要求
1、检测条斑紫菜多糖PY-D2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法，其特征是按如下步骤检测
1)、多糖提取与纯化
(a)条斑紫菜叶状体解冻后，烘干并剪碎，酒精回流3h脱脂肪，自然阴干，阴干后样品按照1∶50比例加水提取多糖，经过恒温100℃加热3h后抽滤，收集提取液，提取液经浓缩后，采用台式低速离心机4000rpm离心10min以弃沉渣，采用Sevag法脱蛋白，取上清液加入95％乙醇，4000rpm离心10min后取沉淀，冷冻干燥机冷冻干燥后获得粗多糖；
(b)用去离子水平衡DEAE-52离子交换层析柱24h，流速为0.75mL·min-1，粗多糖配制为20mg·mL-1溶液后上样(流速为0.5mL·min-1)，用蒸馏水及3mol/LNaCl洗脱液分别洗脱，自动部分收集器收集，每管5ml，洗至无糖，用苯酚硫酸法检测，分离得到两个多糖组分，PY-D1和PY-D2，分别透析脱盐后冷冻干燥，4℃保存；
2)、MTT法检测肿瘤细胞的生长
HO-8910、MCF-7、7721和K562细胞培养于含10％NCS的RPMI 1640培养基中，于37℃、5％CO2培养箱中常规培养，取对数生长期细胞(5×105个/ml)，按每孔100μl接种于96孔培养板板中，培养24h后加PY-D2诱导，对HO-8910和MCF-7细胞诱导的试验组加入六个浓度(5mg·L-1，25mg·L-1，50mg·L-1，100mg·L-1，500mg·L-1和1000mg·L-1)PY-D2；对7721和K562细胞诱导的试验组加入四个浓度(25mg·L-1，50mg·L-1，100mg·L-1和500mg·L-1)PY-D2；以生理盐水为空白对照组；加入体积均为10μl/孔，各设定12个平行孔，继续培养72h后，加入10μl/孔MTT溶液(5g·L-1)，37℃孵育4～6h，加入10％SDS 37℃溶解过夜，待沉淀完全溶解后，用酶标仪于595nm处测定吸光度(A)；
3)、流式细胞仪分析肿瘤细胞的细胞周期
分别选取对数生长期的细胞，每种细胞设定二个组空白对照组和高浓度多糖诱导组(500mg·L-1)。用70％乙醇于-20℃固定过夜，PBS洗2遍，依次加入50μg/mL碘化丙啶和1mg/mLRNaseA，室温避光孵育30min后上机检测；
4)、数据处理
抑制率＝(A空白对照组-APY-D2诱导组)/A空白对照组)×100％，采用SPSS11.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差(X±S)表示，两组比较用t检验，p＜0.05表示差异有统计学意义；
5)、鼠脾淋巴细胞的制备及原代培养
引颈脱臼法处死昆明小鼠，75％乙醇浸泡消毒，取出脾脏后用生理盐水清除血液，研磨脾脏并挤压过200目筛网，反复冲洗网膜，收集脾细胞悬液，加入淋巴细胞分离液离心(2000r/min×20min，室温)，吸出淋巴细胞层，加入RPMI1640培养液洗涤细胞，离心(800r/min×5min，室温)，用RPMI1640培养液(含10％FBS)重悬细胞，调整细胞浓度为2.0×105个/ml，淋巴细胞传96孔板，每孔100μl，细胞板置于CO2细胞培养箱培养，培养条件为37℃，5％CO2。细胞培养1天后加入一定浓度条斑紫菜多糖PY-D2组分继续培养；
6)、MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的存活率
淋巴细胞96孔板加样设置如下条斑紫菜多糖组分别设置0mg·mL-1、0.25mg·mL-1、0.5mg·mL-1和1mg·mL-1；ConA组设置为条斑紫菜多糖0mg·mL-1、0.25mg·mL-1、0.5mg·mL-1和1mg·mL-1分别加100mg·L-1ConA；LPS组设置为条斑紫菜多糖0mg·mL-1、0.25mg·mL-1、0.5mg·mL-1和1mg·mL-1分别加100mg·L-1LPS，空白对照均为生理盐水，条斑紫菜多糖、ConA和LPS均为每孔10μl，每组设6个复孔，加样后置96孔板于37℃，5％CO2培养箱中，培养三天后每孔加MTT10μl(5g·L-1)，37℃孵育4～6h后，加入10％SDS 37℃溶解过夜，待沉淀完全溶解后，用酶标仪于595nm处测定吸光度(A)；
7)、流式细胞仪检测淋巴细胞的细胞周期
选取对数生长期的淋巴细胞，设定六个组分别是空白对照组、100mg·L-1ConA组、100mg·L-1LPS组、1mg·mL-1PY-D2组、1mg·mL-1PY-D2组协同100mg·L-1ConA组和1mg·mL-1PY-D2组协同100mg·L-1LPS组。用70％乙醇于-20℃固定过夜，PBS洗2遍，依次加入50μg/mL碘化丙啶和1mg/mLRNaseA，室温避光孵育30min后，流式细胞仪检测细胞周期；
8)、数据处理
细胞存活率＝(APYP诱导组/A空白对照组)×100％，空白对照组的细胞存活率设定为100％，采用SPSS11.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差(X±S)表示，两组比较用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。
全文摘要
一种检测条斑紫菜多糖PY-D2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法。本发明的检测条斑紫菜多糖PY-D2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法的主要特征是检测方法的步骤按如下程序进行多糖提取与纯化；MTT法检测肿瘤细胞的生长；流式细胞仪分析肿瘤细胞的细胞周期；数据处理；鼠脾淋巴细胞的制备及原代培养；MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的存活率；流式细胞仪检测淋巴细胞的细胞周期；数据处理。本发明的检测条斑紫菜多糖PY-D2抗肿瘤及增强免疫力作用的方法可揭示条斑紫菜多糖PY-D2在肿瘤治疗上的重大作用，同时，也有力地推动了条斑紫菜多糖PY-D2在肿瘤治疗上的应用价值。
文档编号G01N33/48GK101308130SQ20071004059
公开日2008年11月19日 申请日期2007年5月14日 优先权日2007年5月14日
发明者何培民, 张陆曦 申请人:上海水产大学