专利名称：一种治疗不畏寒型胃炎颗粒剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗不畏寒型胃炎颗粒剂的质量控制方法。
背景技术：
在防病治病方面，传统的中药及其提取制剂占据着重要的位置，其质量控制 方法都是薄层鉴别与含量测定。但在各类国家质量标准中，薄层鉴别多是单一 药材的鉴别。为排除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的毒性 有机试剂反复纯化处理，费力、费时、费试剂、污染环境，危害健康，检测周
期长。目前一个含5 6项薄层鉴别和二项含量测定的质量标准检测完成，至少 要花费4 5天的时间，如遇复试花费时间更长，检测速度严重制约着中药现代 化生产速度。所以寻找简便、快捷的检测方法、提高检测效率、降低检测成本， 减少毒性试剂对环境的污染，成为中药质量控制必须突破的难关。
一种治疗不畏寒型胃炎颗粒剂，由旋复花、当归、泽兰、茜草、郁金、桃 仁、柏子仁七味中药组成，其处方组成中各中药材的重量份数比为旋覆花、 当归、茜草、郁金、泽兰、桃仁、柏子仁各3 5份。按传统的检测方法完成5 项鉴别和1项含量测定，至少要3 4天时间。
本发明就是针对上述难点，发明了采用同一甲醇超声的供试品溶液，在3块 薄层板上，简便、快捷地鉴别当归、茜草、桃仁、柏子仁和旋复花五味药材， 而且展开剂也均为无毒的有机试剂。并将含水醇液，直接采用酸水溶液稀释法， 进行萃取除杂，避开蒸干对待测成分阿魏酸的破坏，确保了测定方法的准确性 与重现性。
该发明有效提高检测速度，降低检测成本，减少环境污染，并为全方位控制 药品质量提供了高水准药品质量标准。
发明内容
采用薄层色谱法对处方中的5味中药，当归、茜草、桃仁、柏子仁和旋复花 进行鉴别，五味药材的薄层鉴别采用同一供试品溶液，在3块薄层板上完成， 而且对照药材也均是甲醇超声的上清溶液，五项鉴别只需甲醇26ml，无毒展开 剂30ml，时间1.0小时。简便、快捷、成本低、无污染。
用高效液相法，以乙腈一甲醇一0.1%磷酸为流动相；316nm为检测波长，对 制剂中的有效成分阿魏酸进行定量。采用酸水溶液直接稀释含水甲醇溶液的方 法，避开蒸干操作，再通过低沸点的乙醚萃取，限温蒸发， 一则排除干扰，二 则减少阿魏酸因高温，使含量降低的弊端，有效提高了方法的准确性，重现性 和精密度。方法学研究表明阿魏酸进样量在0.00584 1.46|Jg，进样量与峰面 积呈良好的线性关系，其回归方程为Y=6801136X-15199.5， Y=0.99998。采用
加样回收实验，阿魏酸的回收率为98.97°/。 (n=9)， RSD为0.77% (见表l)。 本发明解决其技术问题所采用的方案为
鉴别(1)取本品2 3g，加甲醇3 5ml，超声处理5 10分钟，滤过，滤 液作为供试品溶液。另取当归、茜草对照药材粉末各0.2 lg，分别加甲醇4 8ml，超声处理5 10分钟，上清液作为各自对照药材溶液，吸取对照药材溶液3 5pl，供试品溶液6-8iJl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254 薄层板上，以环己垸-乙酸乙酯-甲酸(4 8: 1 2: 0.1 0.2)为展开剂，展开， 取出，晾干，尽快置紫外光灯G65nm)下检视，供试品色谱中，在与茜草对照 药材色谱相应的位置上，至少显二个相同颜色的荧光斑点；在与当归对照药材 色谱相应的位置上，显一个相同的荧光主斑点(见图l)。
(2)取旋覆花对照药材粉末0.2 0.4g，分别加甲醇4 6ml，超声处理5 10 分钟，上清液作为对照药材溶液，吸取对照药材溶液和鉴别(1)项下的供试品 溶液各5-8[jl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF^薄层板上， 以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(12 18: 1 1.2: 0.5 0.6: 0.5 0.6)为展开剂，展 开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材 色谱相应的位置上，至少显一个相同颜色的荧光斑点；再置紫外光灯(254nm) 下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同颜 色的荧光熄灭斑点(见图2、 3)。
(3)取桃仁对照药材粉末O. 2 0.5g、柏子仁对照药材粉末O. 05 0.2g，加甲 醇3 6ml，超声处理5 10分钟，上清液作为各自对照药材，吸取对照药材溶液 3 5Ml和鉴别(1)项下的供试品溶液各7 8Ml，分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4 8: 1 2: 0.1 0.2) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%的磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色 清晰，供试品色谱中，在与桃仁和柏子仁对照药材色谱相应位置上，分别显1 2个相同颜色的主斑点(见图4)。
[含量测定l照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈一甲 醇_0.1%磷酸溶液(10 16: 2 5: 70 79)为流动相；检测波长为316nm，流 速08 1.0ml/min。理论板数，按阿魏酸峰计算不低于4000。
对照品溶液制备精密称取阿魏酸适量，加70%甲醇制成每11111含0.003 O.Olmg的溶液，即得。
供试品溶液制备取本品适量，研细，称取约lg，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入60。/。甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理10 60分钟，放冷，再 称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液10 15ml，加0.5% 盐酸(ml/ml) 10 15ml，摇匀，用乙醚萃取4次，每次10 15ml，合并乙醚液， 在4(TC水浴上挥至无乙醚味，用30 70%甲醇，将残留溶液定量转移到5 10ml 量瓶中，并至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 20[Jl，注入液相色谱 仪，测定，即得。 发明原理
1. 根据中药各有效成分的化学结构和极性不同，随着展开剂的移动，在薄层 板上的吸附、解吸附能力而不一样，使各有效成分的斑点得以分离。又借助各 有效成分在不同的检视条件下，呈现不同的斑点颜色，使同一块薄层板上可同 时互不干扰地检测数种成分斑点。
2. 通过简便的酸水稀释、萃取除杂、限温蒸发，以及调整流动相的组分、比 例、检测波长，解决了因杂质峰干扰，无法定量测定的难题，并提高了方法的 准确性，重现性和精密度。使待测成分在所选择的检测波长下，所呈现的峰面 积与含量呈良好线性关系，而得以定量测定。
本发明的创新点及有益效果如下
(1) 突破了一个样品溶液， 一块薄层板，检测一种中药的传统鉴别方式，创新 了同一供试品溶液，在3块薄层板上，完成5味中药的快速薄层鉴别新方法， 当归、茜草在一块薄层板上，旋覆花在一块薄层板上，桃仁和柏子仁在一块薄 层板上。
(2) 在制备薄层供试品溶液和对照药材溶液时，避开了提取、蒸干、萃取等 严重污染环境和实验人员健康的操作步骤，各样品仅是简单的甲醇超声，即可 得到实验溶液。五项鉴别只需样品2 3g，甲醇26ml，展开剂30ml，时间l.O 小时；简便、快捷、成本低、无污染。
(3) 本发明的展开剂系统，避开了苯、甲苯、三氯甲烷等毒性试剂、只采用 无毒性的环己烷、乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水就完成检测，且斑点清晰易判。
(4) 采用酸水溶液直接稀释含水甲醇提取溶液的方法，避开蒸干操作，再通 过低沸点的乙醚萃取，限温蒸发，解决了因杂质峰干扰，无法定量测定的难题 以及阿魏酸因高温，使含量降低的弊端，有效提高了方法的准确性，重现性和 精密度。使待测成分在所选择的检测波长下，波峰分离良好(见图5、 6、 7)。
(5) 本发明与传统的质量控制方法相比，提高检测效率，节省检测时间，降 低检测成本，减少环境污染，并为全方位控制药品质量提供了高水准药品质量 标准。
图1为茜草和当归的薄层鉴别图
图2为旋覆花薄层鉴别(365nm下检视)图
图3为旋覆花薄层鉴别(254nm下检视)图
图4为桃仁和柏子仁薄层鉴别图
图5阿魏酸对照品HPLC色谱图
图6治疗不畏寒型胃炎颗粒剂的HPLC色谱图 图7不含当归的空白样品色谱图
图1中，l为茜草空白样品，2为茜草对照药材，3为当归空白样品，4为 当归对照药材，5.6.7为样品。
图2和图3为同一块薄层板，图2是在紫外灯365nm下检视，图3是在紫外 灯254nm下检视，图2和图3的样品标号一样，1.2.3为样品，4为旋复花对照 药材，5为旋复花空白样品。
图4中，1为柏子仁对照药材，2为桃仁对照药材，3为桃仁、柏子仁空白 样品，4.5.6为样品。
图5中，l为阿魏酸对照品色谱峰。
图6中，l为样品中阿魏酸色谱峰。
图7中，为空白样品的色谱峰。 本发明具体实施方式
如下
[鉴别(1)取本品2 3g，加甲醇3 5ml，超声处理5 10分钟，滤过，滤 液作为供试品溶液。另取茜草、当归对照药材粉末各0.2 lg，分别加甲醇4 8ml，超声处理5 10分钟，上清液作为各自对照药材溶液，吸取对照药材溶液3 5Ml，供试品溶液6-8pl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254 薄层板上，以环己垸-乙酸乙酯-甲酸(4 8: 1 2: 0.1 0.2)为展开剂，展开， 取出，晾干，尽快置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与茜草对照 药材色谱相应的位置上，至少显二个相同颜色的荧光斑点；在与当归对照药材 色谱相应的位置上，显一个相同的荧光主斑点(见图l)。
(2)取旋覆花对照药材粉末0.2 0.4g，分别加甲醇4 6ml，超声处理5 10
分钟，上清液作为对照药材溶液，吸取对照药材溶液和鉴别(1)项下的供试品 溶液各5-8pl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上， 以乙酸乙酉旨-丁酮-甲酸-水(12 18: 1 1.2: 0.5 0.6: 0.5 0.6)为展开剂，展 开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材 色谱相应的位置上，至少显一个相同颜色的荧光斑点；再置紫外光灯(254nm) 下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同颜 色的荧光熄灭斑点(见图2、 3)。
(3)取桃仁对照药材粉末O. 2 0.5g、柏子仁对照药材粉末O. 05 0.2g，加甲 醇3 6ml，超声处理5 10分钟，上清液作为各自对照药材，吸取对照药材溶液 3 5pl和鉴别(1)项下的供试品溶液各7 8pl，分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以环己垸-乙酸乙酯-甲酸(4 8: 1 2: 0.1 0.2) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%的磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色 清晰，供试品色谱中，在与桃仁和柏子仁对照药材色谱相应位置上，分别显1 2个相同颜色的主斑点(见图4)。[含量测定l照高效液相色谱法(屮国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂，乙腈一甲 醇一0.1%磷酸溶液G0 16: 2 5: 70 79)为流动相；检测波长为316nm，流 速08 1.0ml/min。理论板数，按阿魏酸峰计算不低于4000。
对照品溶液制备精密称取阿魏酸适量，加70。/。甲醇制成每lml含0.003 O.Olmg的溶液，即得。
供试品溶液制备取木品适量，研细，称取约lg，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入60Q/。甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理10 60分钟，放冷，再 称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液10 15ml，加0.5°/。 盐酸(ml/ml) 10 15ml，摇匀，用乙醚萃取4次，每次10 15ml，合并乙醚液， 在4(TC水浴上挥至无乙醚味，用30 70%甲醇，将残留溶液定量转移到5 10ml 量瓶中，并至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 20[jl，注入液相色谱 仪，观啶，即得。测定了4批样品含量，结果见附表2。
附表i阿魏酸回收率试验结果
样品取样对照品加入总测得量样品测得量对照品测冋收率XRSD
量(g)量(n g)(Pg)(Ug)得量(ug)(%)(%)(%)
0.501142.6109.467.641.898.12
0.502042.6110.167.842.399.30
0.501542,6109.967.742.299.06
0.501971.0138.967.871.1100.14
0.506771.0139.368.470.999.8698.970.77
0.501771.0138.267.770.599.30
0.500199.4165.067.597.598.09
0.501199.4165.767.698.198.69
0.507399.4166.168.597.698.19
附表2治疗不畏寒型胃炎样品中阿魏酸含Jt测定结果
样品名称样品批号阿魏酸含量(mg/g)
治疗不畏寒型胃炎颗粒0602020. 135
治疗不畏寒型胃炎颗粒0605040. 133
治疗不畏寒型胃炎颗粒0605050.132
治疗不畏寒型胃炎颗粒0605060.13权利要求
1.薄层鉴别A.以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4～8∶1～2∶0.1～0.2)为展开剂，以硅胶为载体，紫外光灯365nm为检视波长，在同一块薄层板上同时鉴别了当归、茜草。B.以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(12～18∶1～1.2∶0.5～0.6∶0.5～0.6)为展开剂，以硅胶为载体，紫外光灯365nm和254nm为检视波长，鉴别了旋复花。C.以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4～8∶1～2∶0.1～0.2)为展开剂，以硅胶为载体，1％磷钼酸乙醇溶液为显色剂，在同一块薄层板上同时鉴别了桃仁和柏子仁。上述所有鉴别采用同一份供试品溶液，所有对照药材均是甲醇超声的上清液，方法简便、快捷、斑点清晰。
全文摘要
本发明涉及一种治疗不畏寒型胃炎颗粒剂的质量控制方法。其特征在于采用薄层色谱法对制剂中的川芎、茜草、旋复花、桃仁和柏子仁进行鉴别，五味药材的薄层鉴别采用同一供试品溶液，在3块硅胶薄层板上完成，简便、快捷、无污染。用HPLC法，以乙腈—甲醇—0.1％磷酸为流动相，316nm为检测波长，对制剂中的有效成分阿魏酸进行了定量，通过萃取除杂，排除了干扰峰，使方法准确、重现。本发明的效果是处方中七味药材，增订了五味药材的薄层鉴别和君药有效成分的定量测定，构成了一部高水准的药品质量标准，不但可全方位控制药品质量，而且与常规方法相比，检测效率高，花费时间短，成本低，无污染。
文档编号G01N30/90GK101352558SQ200810055340
公开日2009年1月28日 申请日期2008年7月7日 优先权日2008年7月7日
发明者安丽娜, 张文武, 赵志军, 韩桂茹 申请人:张文武