专利名称：一种生发凝胶的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种具有中药组合物的质量控制方法，特别涉及生发凝胶的质量控制 方法。
背景技术：
斑秃(Alopecia areata)俗称“鬼剃头”，是一种骤然发生的局限性斑片状的脱发 性毛发病。其病变处头皮正常，无炎症及自觉症状。本病病程经过缓慢，可自行缓解和复 发。若整个头皮毛发全部脱落，称全秃(alopecia totalis)；若全身所有毛发均脱落者，称 普秃(alopecia universalis).该病与免疫力失调、压力突然加大有一定关系。本病与气 血双虚，肝肾不足，血瘀毛窍有关。发为血之余，气虚则血难生，毛根不得需养，故发落成片； 肝藏血，肾藏精，精血不足则发无生长之源；阻塞血路，新血不能养发，故发脱落。辨证分为 心脾气虚(神志不畅、头晕目眩、夜寐梦多、失眠)，肝郁血瘀(气泻胸闷、肝脾肿大、胸肋胀 痛)，气血两虚(病后或病久脱发，神疾乏力，面色苍白，形体消瘦)，肝肾不足(头晕耳鸣， 腰背痛、遗精滑泄，阳痿口干)。生发凝胶由闹羊花、补骨脂、生姜等药味加工制成的凝胶剂， 具有温经通脉之功效，用于斑秃脱发症。为了严格控制生发凝胶的质量，有必要研究一套生 发凝胶的质量控制方法。
发明内容
本发明目的就是在于公开生发凝胶的质量控制方法。本发明是通过以下技术方案实现的一种生发凝胶的质量控制方法，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一 种或几种鉴别取本品3g，加硅藻土适量，拌勻，水浴蒸干，加石油醚(30 60°C )30ml，超声处 理10分钟，滤过，残渣挥尽石油醚，加水饱和的正丁醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取闹羊花对照药材，自“加石油醚 (30 60°C )30ml”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部 附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇 (10 0.4)或甲苯-醋酸乙酯-甲醇(5 4 0.5)或氯仿-甲醇(10 1)或氯仿-甲 醇(20 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显 色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加提取溶媒甲醇或75%乙 醇或乙腈-水(35 65)适量，提取方式为超声处理或加热回流，提取时间为15-45分钟， 放冷，再加相同提取溶媒稀释至刻度，摇勻，用0. 45 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试 品溶液。精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每Iml各含20μ g的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(35 65)为流动 相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补骨脂素计算应不低于3000， 照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液与供 试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定。优选的生发凝胶的质量控制方法为鉴别取本品3g，加硅藻土适量，拌勻，水浴蒸干，加石油醚(30 60°C )30ml，超声处 理10分钟，滤过，残渣挥尽石油醚，加水饱和的正丁醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取闹羊花对照药材，自“加石油醚 (30 60°C )30ml”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部 附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇 (10 0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显 色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功 率250W，频率40KHz) 30分钟，放冷，再加甲醇稀释至刻度，摇勻，用0. 45 μ m微孔滤膜滤过， 取续滤液，即得供试品溶液。精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇 制成每Iml各含20 μ g的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲 醇-水(55 45)为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补骨 脂素计算应不低于3000，照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别精 密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每g含补骨脂以补骨脂素(C11H6O3)和异补骨脂素(C11H6O3)的总量计，不得少 于 0. 33mg0其中薄层鉴别中优选的展开剂为氯仿-甲醇(10 0.4)；含量测定方法中优选的 提取溶媒为甲醇，优选的提取方式为功率250W，频率40KHz条件下超声提取，优选的提取时 间为超声30分钟。现行检测方法是依据药典会国家标准提高要求，主要从操作简单、节约检测、降低 试剂毒性、提高专属性着手进行修订、补充、完善质量标准检测方法，生发凝胶的质量控制 方法有如下有点(1)原检测方法中未收载闹羊花的鉴别方法，本技术方案制定了专属性强，重现性 好的薄层鉴别方法来鉴别。(2)补骨脂素、异补骨脂素为补骨脂的特征性有效成份，原标准为薄层鉴别，现修 订为高效液相色谱法。实验例1药典中收载的闹羊花的鉴别方法为显微鉴别，由于该方法专属性不强，故参 考相关文献，确定用灵敏度较高的薄层鉴别方法来鉴别。曾以甲苯-醋酸乙酯-甲醇 (5:4: 0.5)、氯仿-甲醇(10 1)、氯仿-甲醇(20 1)、氯仿-甲醇(10 0. 4)为展 开剂展开，均取得良好分离效果。其中用氯仿-甲醇(10 0.4)为展开剂展开，斑点分离 效果最好。取缺闹羊花的群药，按所确定的制备工艺方法制成阴性样品制剂，再按供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液，试验结果表明，薄层色谱斑点清晰，阴性样品无干扰。实验例2含量测定1、仪器与试药仪器美国Agilent高效液相色谱仪。色谱柱迪马公司Inertsil 0DS-3。对照品补骨脂素(批号110739-200309)，异补骨脂素(批号110738-200309) 由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用药品。试剂乙腈为色谱试剂，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。2、色谱条件(1)流动相的选择中国药典2000年版一部补骨脂未收载含量测定项，参考 相关文献，选用流动项为甲醇-水(55 45)，甲醇-水(40 60)，甲醇-0. 冰醋酸 (45 55)，经试验，采用上述流动相测定生发凝胶中补骨脂素、异补骨脂素的峰形一般， 两峰基本能分离。后改用乙腈-水(35 65)，两峰分离效果更好，所以优选乙腈-水 (35 65)为流动相。(2)检测波长的选择取补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别加甲醇制适宜浓度的 溶液，用紫外可见分光光度仪在200 400nm波长范围内进行扫描，结果表明，补骨脂素和 异补骨脂素无共有最大吸收，后参考相关文献，最终选择246nm作为检测波长。3、供试品制备方法的考察(1)提取溶媒的筛选取本品适量，混勻，取3份，每份约5g，分别精密称定，置50ml量瓶中，分别加入 75%乙醇、乙腈-水(35 65)及甲醇适量，超声处理(功率250W，频率40KHz)30分钟，放 冷，分别用相应溶媒稀释至刻度，摇勻，分别用微孔滤膜(0.45μπι)滤过，取续滤液，制得供 试品溶液I、II、III，按正文含量测定项下测定法进行测定，测定结果见表1。表1提取溶媒筛选结果 结果表明，以75%乙醇、乙腈-水(35 65)、甲醇为提取溶媒均能提取出补骨脂 素和异补骨脂素，但以甲醇为溶媒制备的供试品溶液中补骨脂素和异补骨脂素含量最高， 故优选提取溶媒为甲醇。(2)提取方式的筛选取本品适量，混勻，取2份，每份约5g，分别精密称定，各置于50ml具塞三角瓶中， 加入甲醇适量，分别加热回流1小时、超声处理(功率250w ；频率40KHz)30分钟，放冷，分 别移至50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别用微孔滤膜(0.45μπι)滤过，取续滤液，制得 供试品溶液I、II，按前述技术方案含量测定项下测定法进行测定，测定结果见表2表2提取方式筛选结果 结果表明，超声处理和加热回流均能有效提出补骨脂素和异补骨脂素，但超声处 理制备的供试品溶液含量较高，且操作简便，故优选的提取方式为超声处理。(3)提取时间的筛选取本品适量，混勻，取3份，每份约5g，分别精密称定，置50ml量瓶中，各加入甲醇 适量，分别超声处理(功率250W，频率40KHz) 15分钟、30分钟、45分钟，放冷，分别用甲醇稀 释至刻度，用微孔滤膜(0.45μπι)滤过，取续滤液，制得供试品溶液I、II，III，按前述技术 方案含量测定项下测定法进行测定，测定结果见表3。表3提取时间筛选结果 由表3可知，超声提取15-45分钟均能有效提取出补骨脂素和异补骨脂素，但30 分钟和45分钟补骨脂素和异补骨脂素总量均高于15分钟，且30分钟和45分钟效果相当， 表明超声30分钟已基本提取完全，综合考虑，优选超声提取时间法为30分钟。4、方法学验证色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水 (35 65)为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补骨脂素计 算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇 制成每Iml各含20 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲 醇适量，超声处理(功率250W，频率40KHz) 30分钟，放冷，再加甲醇稀释至刻度，摇勻，用微 孔滤膜(0. 45 μ m)滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测 定，即得。(1)阴性干扰排除试验按本处方量称取缺补骨脂的群药，按照生发凝胶制备工艺的提取方法，制成阴性 样品，再按“供试品溶液的制备”方法制成阴性样品溶液，按照上述含量测定项下测定法进 行检测，结果表明，在补骨脂素、异补骨脂素出峰位置未见其它峰(见
图1样品HPLC图；图 2阴性样品HPLC图)，说明方中其他药材对补骨脂素、异补骨脂素的测定无干扰。(2)线性关系考察A补骨脂素线性关系考察
精密称取补骨脂素对照品适量，加甲醇制成浓度为0. 548mg/ml的对照品溶液，各 精密吸取上述溶液2ml、3ml、4ml、5ml、6ml置IOml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，分别吸 取上述对照品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，分别连续测定2次，记录峰面积，结果见表4。以 补骨脂素的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线(见图3补骨脂素标准 曲线图)。表4补骨脂素线性关系考察
以进样量对峰面积进行线性回归，得回归方程为y = 732. 48x-15. 28，r = 0. 9998，说明补骨脂素进样量在1. 096 3. 288g之间，线性关系良好。B补骨脂素线性关系考察精密称取异补骨脂素对照品适量，加甲醇溶解制得浓度为0. 516mg/ml的对照品 溶液，各精密吸取上述溶液2ml、3ml、4ml、5ml、6ml置IOml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇 勻，分别吸取上述对照品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，分别连续测定2次，记录峰面积，结 果见表5。以异补骨脂素的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线(见图 4异补骨脂素标准曲线图)。 表5异补骨脂素线性关系考察
以进样量对峰面积进行线性回归，得回归方程为y = 750X-64. 68, r = 0. 9998，说 明异补骨脂素进样量在1. 0320 μ g 3. 0960 μ g之间，线性关系良好。(3)取本品按上述条件制备供试品溶液，重复进样5次，结果见表6。表6精密度实验 试验结果表明，补骨脂素及异补骨脂素的精密度试验RSD < 2%，符合相关的要 求。(4)稳定性试验取本品，按上述条件制备供试品溶液，于0h，2h，4h，8h，24h进行测定，测定结果见 表7。表7稳定性实验 试验结果表明，RSD < 2%，说明供试品溶液24h内稳定。(5)重复性试验取本品，按上述条件制备6份供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，以外标一点 法计算补骨脂素和异补骨脂素的总量，结果见表8。表8重复性实验 试验结果表明，补骨脂素和异补骨脂素的平均含量分别为0.2339mg/g及 0. 1792mg/g，二者RSD < 2%，说明用高效液相色谱法测定生发凝胶中补骨脂素和异补骨脂 素总量的方法重复性良好。(6)回收率实验采用加样回收法测定。取本品适量，混勻，取约2. 5g，精密称定，平行称取6份，分 别加入适量的补骨脂素、异补骨脂素对照品，按照正文含量测定项下方法测定，以外标一点 法计算补骨脂素、异补骨脂素的总量，按以下公式计算回收率，结果见表9、10。由重复性试验可知，样品含补骨脂素为0. 2339mg/g，异补骨脂素为0. 1792mg/g。
测得补骨脂素的量—样品中补骨脂素的量
补骨脂素回收率(％)= -^ , 扭叱主4啦口队旦-X 100%
加入补骨脂素对照品的量
测得异补骨脂素的量一样品中异补骨脂素的量
异补骨脂素回收率(％) 二M、X 100%
加入异补骨脂素对照品的量表9补骨脂素加样回收率测定结果数据表
9 表10异补骨脂素加样回收率测定结果数据表 试验结果表明，补骨脂素和异补骨脂素加样回收率RSD值均小于2%，说明该方法 准确可信。5、样品及原料补骨脂含量测定取样品按“4方法学验证”制备供试品溶液，吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μ 1注入液相色谱仪测定面积，计算样品补骨脂素和异补骨脂素含量。见表11
C标X A样
补骨脂素(异补骨脂素)的含量(mg/g) = A XC#XM XNA样样品峰面积C样进样量(mg)A标标准品峰面积C标注入标准品的量(mg)N 稀释倍数M 取样量(g)表11样品含量测定结果数据表 原料补骨脂含量测定结果见表12表12三批补骨脂药材含量测定 根据上述测定结果，暂定本品每g含补骨脂以补骨脂素(C11H6O3)和异补骨脂素 (C11H6O3)的总量计，不得少于0. 33mg。
具体实施例方式实验例1 生发凝胶的质量控制方法鉴别取本品3g，加硅藻土适量，拌勻，水浴蒸干，加石油醚(30 60°C ) 30ml，超 声处理10分钟，滤过，残渣挥尽石油醚，加水饱和的正丁醇50ml，超声处理20分钟，滤过， 滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取闹羊花对照药材，自“加石油 醚(30 60°C ) 30ml”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一 部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇 (10 0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显 色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功 率250W，频率40KHz) 30分钟，放冷，再加甲醇稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0. 45 μ m)滤 过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇 制成每Iml各含20 μ g的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙 腈-水(35 65)为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补骨 脂素计算应不低于3000，照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别精 密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每g含补骨脂以补骨脂素(C11H6O3)和异补骨脂素(C11H6O3)的总量计，不得少于0.33mg。实验例2 生发凝胶的质量控制方法鉴别取本品3g，加硅藻土适量，拌勻，水浴蒸干，加石油醚(30 60°C )30ml，超声处 理10分钟，滤过，残渣挥尽石油醚，加水饱和的正丁醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取闹羊花对照药材，自“加石油醚 (30 60°C )30ml”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部 附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇 (10 0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显 色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加75%乙醇适量，超声处 理(功率250W，频率40KHz)30分钟，放冷，再加75%乙醇稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜 (0. 45 μ m)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照 品适量，加甲醇制成每Iml各含20 μ g的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂；甲醇-水(55 45)为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨 脂素、异补骨脂素计算应不低于3000，照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法 测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。实验例3 生发凝胶的质量控制方法鉴别取本品3g，加硅藻土适量，拌勻，水浴蒸干，加石油醚(30 60°C )30ml，超声处 理10分钟，滤过，残渣挥尽石油醚，加水饱和的正丁醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取闹羊花对照药材，自“加石油醚 (30 60°C )30ml”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部 附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇 (20 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色 清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加乙腈-水(35 65)适量， 超声处理30分钟，放冷，再加乙腈-水(35 65)稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0.45μπι) 滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加 甲醇制成每Iml各含20 μ g的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 甲醇-水(55 45)为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补 骨脂素计算应不低于3000，照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。实验例4 生发凝胶的质量控制方法鉴别取本品3g，加硅藻土适量，拌勻，水浴蒸干，加石油醚(30 60°C )30ml，超声处 理10分钟，滤过，残渣挥尽石油醚，加水饱和的正丁醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液
12蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取闹羊花对照药材，自“加石油醚 (30 60°C )30ml”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部 附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇 (10 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色 清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定取本品本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理 (功率250W，频率40KHz) 45分钟，放冷，再加甲醇稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0. 45 μ m) 滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加 甲醇制成每Iml各含20 μ g的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 甲醇-0.1%冰醋酸(45 55)为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨 脂素、异补骨脂素计算应不低于3000，照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法 测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。实验例5 生发凝胶的质量控制方法鉴别取本品3g，加硅藻土适量，拌勻，水浴蒸干，加石油醚(30 60°C )30ml，超声处 理10分钟，滤过，残渣挥尽石油醚，加水饱和的正丁醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取闹羊花对照药材，自“加石油醚 (30 60°C )30ml”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部 附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙 酯-甲醇(5 4 0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C加 热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定取本品本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理 (功率250W，频率40KHz) 15分钟，放冷，再加甲醇稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0. 45 μ m) 滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加 甲醇制成每Iml各含20 μ g的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 甲醇-水(40 60)为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补 骨脂素计算应不低于3000，照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。实验例6 生发凝胶的含量测定方法取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，加热回流15分 钟，放冷，再加甲醇稀释至刻度，摇勻，用0. 45 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶 液。精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每Iml各含20 μ g的溶 液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%冰醋酸(45 55) 为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补骨脂素计算应不低于 3000,照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液 与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。实验例7 生发凝胶的含量测定方法
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取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，加热回流30分 钟，放冷，再加甲醇稀释至刻度，摇勻，用0. 45 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶 液。精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每Iml各含20 μ g的溶 液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%冰醋酸(45 55) 为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补骨脂素计算应不低于 3000,照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液 与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。实验例8 生发凝胶的含量测定方法取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，加热回流45分 钟，放冷，再加甲醇稀释至刻度，摇勻，用0. 45 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶 液。精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每Iml各含20 μ g的溶 液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%冰醋酸(45 55) 为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补骨脂素计算应不低于 3000,照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液 与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。实验例9 生发凝胶的含量测定方法取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加乙腈-水(35 65)适量， 超声处理15分钟，放冷，再加乙腈-水(35 65)稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0.45μπι) 滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加 甲醇制成每Iml各含20 μ g的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 甲醇-水(55 45)为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补 骨脂素计算应不低于3000，照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。实验例10 生发凝胶的含量测定方法取本品适量，混勻，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加75%乙醇适量，超声处理 15分钟，放冷，再加75%乙醇稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0.45μπι)滤过，取续滤液，即 得供试品溶液。取精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每Iml各 含20yg的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(55 45) 为流动相；柱温35°C，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补骨脂素计算应不低于 3000,照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液 与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
1权利要求
一种生发凝胶的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种鉴别取本品3g，加硅藻土适量，拌匀，水浴蒸干，加沸点30～60℃石油醚30ml，功率250W，频率40KHz条件下超声处理10分钟，滤过，残渣挥尽石油醚，加水饱和的正丁醇50ml，功率250W，频率40KHz条件下超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取闹羊花对照药材，自“加沸点30～60℃石油醚30ml”起，同法制成对照药材溶液。照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿 甲醇(10∶0.4)或甲苯 醋酸乙酯 甲醇(5∶4∶0.5)或氯仿 甲醇(10∶1)或氯仿 甲醇(20∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定取本品适量，混匀，取约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加提取溶媒甲醇或75％乙醇或乙腈 水(35∶65)适量，提取方式为超声处理或加热回流，提取时间为15 45分钟，放冷，再加相同提取溶媒稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml各含20μg的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈 水(35∶65)为流动相；柱温35℃，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素、异补骨脂素计算应不低于3000，照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。
2.根据权利要求1所述的一种生发凝胶的质量控制方法，其特征在于鉴别中展开剂为 氯仿-甲醇(10 0.4)。
3.根据权利要求1所述的一种生发凝胶的质量控制方法，其特征在于含量测定方法中 提取溶媒为甲醇。
4.根据权利要求1所述的一种生发凝胶的质量控制方法，其特征在于含量测定方法中 提取方式为功率250W，频率40ΚΗζ条件下超声处理。
5.根据权利要求1所述的一种生发凝胶的质量控制方法，其特征在于含量测定方法中 提取时间为30分钟。
6.根据权利要求1所述的一种生发凝胶的质量控制方法，其特征在于含量测定方法中 含量限度为本品每g含补骨脂以补骨脂素(C11H6O3)和异补骨脂素(C11H6O3)的总量计，不得 少于 0. 33mgo
全文摘要
本发明公开了生发凝胶的质量控制方法。该方法采用高效液相色谱法对生发凝胶中的补骨脂素、异补骨脂素进行含量测定，并对有效物质进行鉴别，该方法是依据国家药典会国家标准提高要求，体现了操作简单、节约检测、降低试剂毒性、提高专属性等优点。
文档编号G01N30/36GK101897886SQ20091008499
公开日2010年12月1日 申请日期2009年5月27日 优先权日2009年5月27日
发明者高丽 申请人:北京因科瑞斯医药科技有限公司