专利名称：化妆品中林可霉素类抗生素的快速检测方法
技术领域：
本发明涉及林可霉素类抗生素的检测方法，特别涉及一种林可霉素类抗生素的快速检测方法，具体为化妆品中非法添加林可霉素类抗生素的快速检测方法。
背景技术：
近年来，一些不法企业商家为牟取暴利，在祛痘化妆品中擅自添加抗生素等药物， 从而达到快速起效的目的，并谎称“天然中草药提取”，吹嘘和夸大疗效。消费者在毫不知情的情况下长期使用，会给身体健康造成了严重危害。本发明人通过调查、实验发现，市场上祛痘化妆品中非法添加林可霉素类抗生素的现象比较严重。林可霉素类抗生素(Lincosamides)是具有抗革兰阳性需氧菌和革兰阳性或阴性厌氧菌活性的抗生素，通常用于需氧菌及厌氧菌混合感染的治疗。林可霉素类药物常见的有林可霉素、克林霉素。林可霉素(Lincomycin)又名洁霉素，是链霉菌4-10 产生的抗生素。克林霉素(Cindamycin)又名氯洁霉素，是对林可霉素结构修饰而得到的半合成衍生物， 克林霉素比林可霉素具有更高的活性。临床上林可霉素类药物局部应用于炎症性痤疮，对轻至中度面部炎症性痤疮极为有效。不法分子利用此类抗生素的特性，在祛痘化妆品中擅自添加，从而达到快速起效的目的。然而，此类抗生素虽然具有抗菌和消炎作用，对消除“痘痘”、“粉刺”、“痤疮”等有一定的效果，但长期使用会刺激皮肤，表现为皮肤有烧灼感，瘙痒、 红斑、脱屑等反应，还会引起肾功能障碍和革兰氏阳性菌的耐药性增加，给人们群众的身体健康造成严重危害。目前，国家尚未颁布祛痘化妆品中非法添加林可霉素类抗生素的检验方法。中国发明专利CN200710026852. 8公开了一种化妆品中克林霉素的检测方法，是一种采用高效液相色谱仪检测化妆品中克林霉素的分析方法，该方法采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18柱或C8柱；使用紫外检测器或二极管阵列检测器在190 - 380nm处进行检测； 流动相采用磷酸二氢铵溶液一乙腈缓冲液或磷酸二氢铵溶液一甲醇缓冲液；样品用无水甲醇或乙腈溶解萃取，经超声提取20min后，再12000rpm/min离心约5min，取上清液作为供试样液，如有必要可再用0. 45 μ m滤膜过滤备用；根据样品的保留时间和光谱图进行定性分析，根据其峰面积进行定量分析。上述方法需应用多种分析检测设备，例如价格昂贵的高效液相色谱仪，并且应用多种化学试剂，检测人员需有较强的检测设备操作水平，检测时间过长，因此该方法不适宜简易条件下的快速检测。针对高科技、高智能制售假劣化妆品案件给化妆品监管工作带来的新挑战，有必要寻找出更简便易行的林可霉素类抗生素的检测方法。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题是提供一种祛痘化妆品中违法添加林可霉素类抗生素进行快速检测的方法，达到靶向抽样、目标检验的目的，方法简便容易操作，检测迅速，结果准确，检验成本极低，可实现对大批量样品的快速筛查，。
本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现 一种化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法为
在待测样品或待测样品溶液中加入高碘酸盐溶液、酸性调节剂和环己烷，3 30分钟后， 观察上层溶剂颜色，如呈粉红至紫红色，则说明待测样品中含有林可霉素类抗生素；如果环己烷层不显粉红至紫红色，则说明该待测化妆品中不含有林可霉素类抗生素。当待测样品为非溶液类时，需加入水或甲醇配制成待测样品溶液。作为上述技术方案的改进，所述水或甲醇的用量为;Tl5ml/g待测样品。作为上述技术方案的改进，在待测样品或待测样品溶液中加入高碘酸钠溶液、酸性调节剂和环己烷后，需摇勻后静置观察，当待测样品本身为溶液类时，静置观察时间为 4^6分钟，当待测样品为非溶液类并配制成待测样品溶液时，静置观察时间为15 25分钟。作为上述技术方案的改进，所述高碘酸盐溶液的浓度为0. 5 3%，加入量为广5ml/ g待测样品。所述高碘酸盐选自高碘酸钠、高碘酸钾、高碘酸钡中的至少一种。所述酸性调节剂选自硫酸、盐酸、乙酸、磷酸中的至少一种。作为上述技术方案的改进，所述酸性调节剂为浓度30%的硫酸，用量为 0. 5^2. 5ml/g待测样品。所述环己烷的用量为3 15ml/g待测样品。所述林可霉素类抗生素是指林可霉素或克林霉素。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果
1、本发明的检测方法的测定目标为林可霉素类抗生素，包括林可霉素、克林霉素等，本检测方法形成一套这类物质的完整的系统筛查程序，符合监管应用的需要。2、本发明的检测方法，操作简单、检测速度快，检测结果易观察，可实现对大批量样品的快速筛查，从大批量样品中将阳性样品挑选出来，后续可再对这些阳性样品进一步地细致确证，大大降低了成本，减少了工作量，在化妆品监管中具有实际意义。3、本发明针对待测样品基质复杂的问题，对待测物质的提取方法、显色反应进行了摸索和优化，最后得到的检测方法不但操作简单，成本低，而且可有效去除待测样品中的干扰物，保证了检测的高灵敏度和准确度。4、结果容易判别。本发明的检测方法中，显色层是在上层的环己烷中，阳性样品显粉红至紫红色，非常易观察判断。5、本发明的检测方法只需加入几种溶液，振摇数次，操作简单，容易上手，无需对检测人员进行特殊培训。6、本发明的快筛方法通过环己烷层显色，25分钟内即可完成对待测化妆品中是否添加林可霉素类抗生素的筛查，检查结果直观可靠，经高效液相色谱法(二极管阵列检测器)验证与液质联用技术进行确证，结果正确率高于92%，假阴性率为洲，达到了简便快速价廉准确的目的，符合监管现场快速检查的需要，对提高监管部门的运作效率、快速打击不法分子有着重大的社会效益。7、本发明的快筛检测方法主要是针对化妆品监管工作实际而设计，可填补行内对林可霉素类抗生素系统筛查的空白，有效施行化妆品市场监管。
具体实施例方式
林可霉素、克林霉素同属于林可霉素类抗生素，其分子结构中均含甲硫基团。有机硫化物很易被氧化生成亚砜a2so)并进一步形成砜a2so2)。上述物质在酸性条件下用高碘酸盐氧化硫原子释放出游离的碘，碘被萃取至环己烷中呈紫红色。由于受到化妆品中复杂基质的影响，环己烷层将呈粉红至紫红色。反应方程式如下所示。祛痘类化妆品一般分为溶液类和非溶液类(包括乳液、啫喱、霜剂、膏体等)。当待测样品为溶液类时，不需要加水或甲醇溶解待测物质，可以直接加入高碘酸盐溶液、酸性调节剂和环己烷。当待测样品为非溶液类时，由于此类化妆品中含有很多不溶杂质，所以需要加水后充分振摇，使样品分散均勻且待测物质溶解出来后再加其他试剂进行显色反应。基于林可霉素类化合物在水、甲醇易溶，而化妆品的基质比较复杂，多为脂溶性成分，为有效、环保、安全起见，首选水为提取溶剂。因化妆品的基质多为脂溶性成分，不溶于7jC，溶剂的使用量，以可以使待测样品均勻分散为宜，发明人经试验比较，加水量为3 15ml/g待测样品时，可满足不同样品的需要。由于反应是在酸性条件下进行，因此可以用任何一种可在水中游离出H+的酸性调节剂，例如硫酸、盐酸、乙酸、磷酸等。发明人比较了不同的酸、不同的用量、不同的浓度的实验结果，发现选用30%的硫酸溶液0. 5^2. 5ml/g待测样品时，可保证显色反应的较高灵敏度。上述的检测方法中，选择了高碘酸盐为氧化剂，因为其易溶于水，且具有较强的氧化性，能很易就完全把林可霉素类化合物分子结构中的甲硫基团氧化生成亚砜a2so)并进一步形成砜a2so2)同时释放出游离的碘。高碘酸钠、高碘酸钾、高碘酸钡等含Io3-的物质都可以达到相同的效果，但是由于高碘酸钾和高碘酸钡有毒，因此本发明优选高碘酸钠。由于环己烷不溶于水，能与上述复杂的基质及反应液很好地分层，而碘被萃取至环己烷中呈粉红至紫红色，使得检测结果容易观察。本发明人对115批次待测样品分别采用本发明的快筛检测方法进行检测，同时采用高效液相色谱法(二极管阵列检测器)与液质联用技术对30批阳性样品进行验证和确证， 结果正确率高于92%，假阴性率为2%，达到了简便快速价廉准确的目的，可胜任现场的监管检查。为了便于本领域技术人员理解，下面将结合实施例对本发明做进一步的描述。下述实施例仅是本发明的优选实施方式，不是对本发明的限制。实施例1某品牌痘立清清痘去印洁面乳
本实施例的痘立清清痘去印洁面乳为乳液类化妆品，首先准备实验器具具塞比色管(25ml)、刻度管。取痘立清清痘去印洁面乳约lg，置比色管中，加水10ml，振摇数次，使样品分散均勻，加入1%高碘酸钠溶液3ml和30%硫酸溶液anl，再加入环己烷10ml，密塞，振摇，静置， 静置过程中不时轻轻上下来回振摇数次。观察上层环己烷层的颜色变化。环己烷层不呈粉红至紫红色，判为阴性，则说明待测样品中未添加林可霉素类抗生素。采用高效液相色谱法(二极管阵列检测器)与液质联用技术对该样品进行验证和确证，试验结果和本实施例试验结果一致。实施例2某品牌痘点清净白祛痘霜
本实施例的痘点清净白祛痘霜为霜剂类化妆品，首先准备实验器具 具塞比色管(25ml)、刻度管。取痘点清净白祛痘霜约lg，置比色管中，加水10ml，振摇数次，使样品分散均勻， 加入1%高碘酸钠溶液3ml和30%硫酸溶液anl，再加入环己烷10ml，密塞，振摇，静置，静置过程中不时轻轻上下来回振摇数次。观察上层环己烷层的颜色变化。环己烷层呈粉红色， 判为阳性，则说明待测样品中添加林可霉素类抗生素。采用高效液相色谱法(二极管阵列检测器)与液质联用技术对该样品进行验证和确证，试验结果和本实施例试验结果一致。实施例3某品牌高效祛痘神仙水
本实施例的高效祛痘神仙水为溶液类化妆品，首先准备实验器具 具塞比色管(25ml)、刻度管。取高效祛痘神仙水约anl，置比色管中，加入1%高碘酸钠溶液3ml和30%硫酸溶液anl，再加入环己烷10ml，密塞，振摇，静置，静置过程中不时轻轻上下来回振摇数次。观察上层环己烷层的颜色变化。环己烷层呈紫红色，判为阳性，则说明待测样品中添加林可霉素类抗生素。采用高效液相色谱法(二极管阵列检测器)与液质联用技术对该样品进行验证和确证，试验结果和本实施例试验结果一致。实施例4某品牌痘立清清痘去印洁面乳
本实施例的痘立清清痘去印洁面乳为乳液类化妆品，首先准备实验器具 具塞比色管(25ml)、刻度管。取痘立清清痘去印洁面乳约lg，置比色管中，加甲醇15ml，振摇数次，使样品分散均勻，加入3%高碘酸钾溶液5ml和30%盐酸溶液2. 5ml，再加入环己烷15ml，密塞，振摇，静置，静置过程中不时轻轻上下来回振摇数次。静置25分钟后，观察上层环己烷层的颜色变化。环己烷层不呈粉红至紫红色，判为阴性，则说明待测样品中未添加林可霉素类抗生素。采用高效液相色谱法(二极管阵列检测器)与液质联用技术对该样品进行验证和确证，试验结果和本实施例试验结果一致。实施例5某品牌痘点清净白祛痘霜
本实施例的痘点清净白祛痘霜为霜剂类化妆品，首先准备实验器具 具塞比色管(25ml)、刻度管。取痘点清净白祛痘霜约lg，置比色管中，加甲醇:3ml，振摇数次，使样品分散均勻， 加入0. 5%高碘酸钡溶液Iml和30%乙酸溶液0. 5ml，再加入环己烷3ml，密塞，振摇，静置，静置过程中不时轻轻上下来回振摇数次。静置15分钟后观察上层环己烷层的颜色变化。环己烷层呈粉红色，判为阳性，则说明待测样品中添加林可霉素类抗生素。
采用高效液相色谱法(二极管阵列检测器)与液质联用技术对该样品进行验证和确证，试验结果和本实施例试验结果一致。
实施例6某品牌高效祛痘神仙水本实施例的高效祛痘神仙水为溶液类化妆品，首先准备实验器具 具塞比色管(25ml)、刻度管。
取高效祛痘神仙水约anl，置比色管中，加入1. 5%高碘酸钠溶液2. 5ml和30%硫酸溶液1.5ml，再加入环己烷8ml，密塞，振摇，静置，静置过程中不时轻轻上下来回振摇数次。 4分钟后观察上层环己烷层的颜色变化。环己烷层呈紫红色，判为阳性，则说明待测样品中添加林可霉素类抗生素。
采用高效液相色谱法(二极管阵列检测器)与液质联用技术对该样品进行验证和确证，试验结果和本实施例试验结果一致。
权利要求
1.一种化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法，其特征在于在待测样品或待测样品溶液中加入高碘酸盐溶液、酸性调节剂和环己烷，3 30分钟后， 观察上层溶剂颜色，如呈粉红至紫红色，则说明待测样品中含有林可霉素类抗生素；如果环己烷层不显粉红至紫红色，则说明该待测化妆品中不含有林可霉素类抗生素。
2.根据权利要求1所述的化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法，其特征在于当待测样品为非溶液类时，需加入水或甲醇配制成待测样品溶液。
3.根据权利要求2所述的化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法，其特征在于所述水或甲醇的用量为3 15ml/g待测样品。
4.根据权利要求3所述的化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法，其特征在于在待测样品或待测样品溶液中加入高碘酸钠溶液、酸性调节剂和环己烷后，需摇勻后静置观察， 当待测样品本身为溶液类时，静置观察时间为4飞分钟，当待测样品为非溶液类并配制成待测样品溶液时，静置观察时间为15 25分钟。
5.根据权利要求4所述的化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法，其特征在于所述高碘酸盐溶液的浓度为0. 5 3%，加入量为广5ml/g待测样品。
6.根据权利要求5所述的化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法，其特征在于所述高碘酸盐选自高碘酸钠、高碘酸钾、高碘酸钡中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法，其特征在于所述酸性调节剂选自硫酸、盐酸、乙酸、磷酸中的至少一种。
8.根据权利要求7所述的化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法，其特征在于所述酸性调节剂为浓度30%的硫酸，用量为0. 5^2. 5ml/g待测样品。
9.根据权利要求8所述的化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法，其特征在于所述环己烷的用量为3 15ml/g待测样品。
10.根据权利要求9所述的化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法，其特征在于所述林可霉素类抗生素是指林可霉素或克林霉素。
全文摘要
本发明涉及林可霉素类抗生素的检测方法，特别涉及一种林可霉素类抗生素的快速检测方法，具体为祛痘化妆品中非法添加林可霉素类抗生素的快速检测方法。一种化妆品中林可霉素类抗生素的检测方法为在待测样品或待测样品溶液中加入高碘酸盐溶液、酸性调节剂和环己烷，3~30分钟后，观察上层溶剂颜色，如呈粉红至紫红色，则说明待测样品中含有林可霉素类抗生素；如果环己烷层不显粉红至紫红色，则说明该待测化妆品中不含有林可霉素类抗生素。本发明可达到靶向抽样、目标检验的目的，方法简便容易操作，检测迅速，结果准确，检验成本极低，可实现对大批量样品的快速筛查。
文档编号G01N21/78GK102507563SQ20111035563
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月11日 优先权日2011年11月11日
发明者林暖丹, 简淑娟, 翁雪萍 申请人:惠州市食品药品检验所