专利名称：同型半胱氨酸含量检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及ー种检测试剂盒，特别涉及ー种同型半胱氨酸含量检测试剂盒，其属于医学体外诊断领域，具体是ー种可用定量測定人血清中同型半胱氨酸的含量，作辅助诊断用。
背景技术：
同型半胱氨酸含量检测试剂盒用于检测人血液中的同型半胱氨酸(Hey)。同型半胱氨酸是蛋氨酸代谢生产的ー种含硫氨基酸，80%的Hcy在血中通过ニ硫键与蛋白质结合，只有很少一部分游离同型半胱氨酸參加循环。Hcy水平与心血管疾病密切相关，是心血管疾病发病的ー个重要危险因子。血液中增高的Hcy因为刺激血管壁引起动脉血管的损伤，导致炎症和管壁的斑块形成，最終引起心脏血流受阻。高同型半胱氨酸尿症患者，由于严重遗传缺陷影响Hcy代谢，造成高Hcy血症。轻微的遗传缺陷或B族维生素营养缺乏会伴随中度或轻度的Hcy的升高，也会增加心脏病的危险。Hcy升高还可引起神经管畸形及先天性畸形等出生缺陷类疾病。此外，近年来的研究表明，同型半胱氨酸除与血管疾病有关外，还与神经管畸形、先兆子痫、帕金森病、胎儿生长缓慢、慢性肾功能衰竭等多种疾病及某些药物、肿瘤的影响有夫。同型半胱氨酸作为独立的心血管风险指标已被广泛接受，是高血脂、吸烟、糖尿病之外的又ー危险因子。尽管许多有关高同型半胱氨酸血症的生物化学基础有待明确，其检测与各种疾病的关系和治疗检测将需进一步探讨，虽然使用叶酸、维生素B12、维生素B6后可降低其体内浓度，但并非用于治疗。目前，临床使用的快速便捷测定同型半胱氨酸的方法主要包括荧光偏振免疫分析法和酶循环法。酶循环法具有试剂稳定，操作简便，流程短，重复性和精确性好，以及适用于多种自动化分析仪等特点。国内外此类产品的方法学主要包括以下几种I、循环酶法该方法的特点是操作简单，自动化程度高，具有快速、准确、方便的优点，而且相对荧光偏振免疫分析法价格比较便宜，适合临床使用，更易普及。2、同位素法该方法通过14C标记的腺苷与Hcy缩合后，经色谱分离，液体闪烁计数放射強度来测Hcy浓度。该方法灵敏度高，特异性强，但操作繁琐且有放射污染，未能推广使用。3、色谱法——质谱法气相色谱——质谱法測定同型半胱氨酸，虽然灵敏度、特异性好，但此法操作十分复杂，耗时长，仪器设备要求高，现除了在某些专门的实验进行測定外，普及很困难。4、高效液相色谱法(HPLC) 高效液相色谱法是经典的參考方法，但其操作比较复杂、试验耗时比较长，试验数据变异比较大。5、酶免疫分析法(EIA)[0015]是临床上測定Hcy水平的常用方法，其特点是操作比较方便、快捷，重复性好，方法稳定可靠。缺点是大部分操作好是手工操作，比较耗吋。6、离子色谱法主要用于实验研究，临床上较少使用。7、高效毛细血管电泳法与传统的反相高效液相色谱相比，高效毛细血管电泳是近年来发展的一项高效分离、分析技木，目前主要用于实验研究，其缺点是操作比较复杂，试验耗时较长30min左右，试验数据变异比较大。8、荧光偏振免疫检测(FPIA)法美国雅培公司采用全自动荧光偏振免疫技术，用AXSYM仪器检测Hcy，此方法快捷、操作简单、自动化程度高，可減少人为误差，具有良好的准确度与精密度，适合大多数临床实验室应用。FPIA法灵敏度高，检测速度快，但价格昂贵，故短时期内不易普及。
实用新型内容本实用新型所要解决的技术问题是提供ー种同型半胱氨酸含量检测试剂盒，其结构简单、使用方便，成本低。为解决所述技术问题，本实用新型提供了ー种同型半胱氨酸含量检测试剂盒，其特征在于，其包括盒盖、盒体、第一试剂单元、第二试剂单元、稀释液单元，第一试剂单元、第ニ试剂单元、稀释液单元都由ー个可密封的试剂瓶组成，盒盖和盒体连接，第一试剂单元、第二试剂单元、稀释液单元顺序放置于盒体中。本实用新型的积极进步效果在于本实用新型成本低，结构简単，比进ロ的同型半胱氨酸測定试剂盒使用方便，而且与市售产品检测结果有很强的相关性，经过校正后，可以得到与市售产品相似的结果，符合临床检测的需要，为预防心血管疾病、控制病人病情起到的积极作用。
图I为本实用新型盒盖打开时的立体结构图。图2为连接为一体的三个单元的结构图。
具体实施方式
下面举个较佳实施例，并结合附图来更清楚完整地说明本实用新型。如图I所示，本实用新型同型半胱氨酸含量检测试剂盒包括盒盖I、盒体2、第一试剂单元3、第二试剂单元4、稀释液单元5，第一试剂单元3、第二试剂单元4、稀释液单元5都由ー个可密封的试剂瓶组成，三个试剂単元分别盛装有第一同型半胱氨酸測量试剂R1、第ニ同型半胱氨酸測量试剂R2、稀释液，盒盖I和盒体2连接，第一试剂单元3、第二试剂单元4、稀释液单元5顺序放置于盒体2中，本实用新型的盒盖I和盒体2可密封，使用前打开。以下结合在Beckman生化分析仪上使用本产品对本实用新型作进ー步说明。首先设定生化分析仪參数，测量样本中同型半胱氨酸的含量，具体如下预处理，取本实用新型稀释液单元5中盛装的稀释液，加入第二试剂单元4中，与第二同型半胱氨酸測量试剂R2充分混匀，组成测试试剂。检测样品时，第一试剂单元3中盛装第一同型半胱氨酸测量试剂R1，加入样本，混匀后，37°C孵育5分钟，加入第二试剂单元4中盛装的第二同型半胱氨酸測量试剂R2，在主波长为340nm和副波长为405nm下检测，混匀后，37°C保温150秒后，读取吸光度Al，150秒后，读取吸光度A2计算AA/min。AA= (A2-A1)。測量结果的计算。使本实用新型检测的结果与市售产品检测结果相近。本实施例采用如下的式⑴Hcy ( U mo I/L) = AA样本/AA标准X稀释液浓度..................式(I)本实用新型同型半胱氨酸含量检测试剂盒的三个试剂単元的密封容器形成一体，如图2所示。第一试剂单元3、第二试剂单元4、稀释液单元5组成的独立密封容器的外壁借助外部固定支架7连接为一体。本实用新型包括三个试剂単元，比现有的同型半胱氨酸測定试剂盒使用更加方便，因其结构紧凑，拆取方便，操作简单，应用灵活，可满足不同检测目的和仪器的需求。而且由于使用循环酶法，因此使本产品的成本大大降低，为产品市场推广奠定基础。本实用新型试剂盒的设计原理如下通过原理分析，我们先通过在三(2-羧こ基)膦氯酸(TCEP)作用下，氧化型同型半胱氨酸转化为游离型Hcy，游离型Hcy与共价底物S-腺苷甲硫氨酸(SAM)在同型半胱氨酸甲基转移酶(HMTase)催化下反应形成蛋氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)。SAH在S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHase)作用下水解成腺苷和Hcy，形成的Hcy可以循环加入反应，从而放大了检测信号，腺苷(Ado)在腺苷脱氨酶(ADA)作用下立即被水解为次黄嘌呤和氨，氨在谷氨酸脱氢酶(GLDH)的作用下，在a -酮戊ニ酸存在下使NADH转化为NAD+，样本中的Hcy的浓度与NADH的变化成正比。通过在340nm处测定吸光值的变化速率，来确定样本中Hcy的浓度。计算后可得到同型半胱氨酸測量值。第一同型半胱氨酸测量试剂Rl包含有S-腺苷甲硫氨酸0. lmmol/L>NADH0. 2mmol/L、三(2羧こ基)膦氯化氢0. 5mmol/L、a -酮戊ニ酸5. OmmoI/L,Hcy甲基转移酶5. 0KU/L、谷氨酸脱氢酶10KU/L、腺苷脱氨酶5. 0KU/L、防腐剤、稳定剂。第二同型半胱氨酸測量试剂R2包含有S-腺苷同型半胱氨酸水解酶3. 0KU/L、防腐剤、稳定剂。稀释液包含防腐剤、稳定齐U。同型半胱氨酸含量检测试剂盒还可以包括有固定物，如泡沫塑料、海绵等。固定物填充于独立密封容器周围，起到固定、抗震的作用。本实用新型试剂盒尤其适用于测定病人血清中同型半胱氨酸的含量，使患者在治疗中能够有效的预防心血管疾病。本实用新型成本低，结构简单，比进ロ的同型半胱氨酸測定试剂盒使用方便，而且与市售产品检测结果有很强的相关性，经过校正后，可以得到与市售产品相似的结果，符合临床检测的需要，为预防心血管疾病、控制病人病情起到的积极作用。虽然以上描述了本实用新型的具体实施方式
，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，在不背离本实用新型的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改。
权利要求1.ー种同型半胱氨酸含量检测试剂盒，其特征在于，其包括盒盖、盒体、第一试剂单元、第二试剂单元、稀释液单元，第一试剂单元、第二试剂单元、稀释液单元都由ー个可密封的试剂瓶组成，盒盖和盒体连接，第一试剂单元、第二试剂单元、稀释液单元顺序放置于盒体中。
专利摘要本实用新型公开了一种同型半胱氨酸含量检测试剂盒，其包括盒盖、盒体、第一试剂单元、第二试剂单元、稀释液单元，第一试剂单元、第二试剂单元、稀释液单元都由一个可密封的试剂瓶组成，盒盖和盒体连接，第一试剂单元、第二试剂单元、稀释液单元顺序放置于盒体中。本实用新型同型半胱氨酸含量检测试剂盒的结构简单、使用方便，成本低。
文档编号G01N21/33GK202404019SQ20112056375
公开日2012年8月29日 申请日期2011年12月28日 优先权日2011年12月28日
发明者信炜, 卫君超, 梁望鸽 申请人:上海丰汇医学科技有限公司