专利名称：6-(甲巯基)嘌呤免疫原和6-(甲巯基)嘌呤检测试剂的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，涉及6-(甲巯基)嘌呤免疫原、抗6_(甲巯基)嘌呤特异性抗体和6-(甲巯基)嘌呤检测试剂。
背景技术：
6-(甲巯基)嘌呤(6_Methylmercaptopurine,6_MMP),其结构式如式(I )所示。
权利要求
1.ー种6-(甲巯基)嘌呤免疫原，其特征在于结构式如式(I )所示
2.根据权利要求I所述的6-(甲巯基)嘌呤免疫原，其特征在于R选自-(CH2)n-C00-、-O- (CH2) n-C00-、-S- (CH2) n-C00_ 或-NH- (CH2) n-C00_ 中的ー种，n 是 I 至 20 之间的整数，优选n值为I至10。
3.根据权利要求2所述的6-(甲巯基)嘌呤免疫原，其特征在于R为-(CH2)5-C00-。
4.根据权利要求I所述的6-(甲巯基)嘌呤免疫原，其特征在于载体为具有免疫原性的蛋白质，选自血清蛋白，血蓝蛋白或甲状腺球蛋白中的ー种，优选为牛血清蛋白。
5.—种如权利要求1-4中任一项所述的6-(甲巯基)嘌呤免疫原的制备方法，其特征在于包含以下步骤 (1)用IO-IOOml有机溶剂A溶解I.0-10. Og的6-MMP和I. 0-5. Og的碳酸盐，得到溶液I;将I. 0-5. Og的6-溴己酸こ脂加入到5-50ml的有机溶剂A中，得到溶液2，将溶液I和2合并进行搅拌反应。将反应后的溶液用无机酸溶液中和，经有机溶剂B萃取分离后纯化、干燥，得到白色固体状6-(甲巯基)嘌呤衍生物。
(2)将具有免疫原性的蛋白质100-300mg溶于IO-IOOml的0.2M，pH 8. 5磷酸盐缓冲液中。
(3)用I.0-5. Oml的有机溶剂A溶解50-500mg的6-(甲巯基)嘌呤衍生物，通过1_乙基-3-(-3- ニ甲氨丙基)碳ニ亚胺进行活化并与载体溶液进行交联反应，经透析纯化后得到具有免疫原性的6-(甲巯基)嘌呤免疫原， 所述的有机溶剂A选自ニ甲基亚砜、ニ甲基甲酰胺、甲醇或こ醇中的ー种，优选为ニ甲基甲酰胺； 所述的有机溶剂B选自こ酸こ酷，こ醚或氯仿中的ー种，优选为こ酸こ酷， 所述的碳酸盐为Na2CO3或K2CO3，优选为Na2CO3 ； 所述的无机酸溶液为盐酸溶液或硫酸溶液，优选为盐酸溶液。
6.ー种抗6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体，由权利要求I 5任意一项所述的6-(甲巯基)嘌呤免疫原免疫宿主动物后生产得到。
7.根据权利要求6所述的6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体，其特征在于所述的抗体为多克隆抗体或单克隆抗体，优选为多克隆抗体。
8.根据权利要求7所述的6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体，其特征在于所述的宿主动物选自家免，山羊，小鼠，绵羊，豚鼠或马中的ー种，优选为家免。
9.一种如权利要求6-8中任一项所述的6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体的制备方法，其特征在于包含以下步骤 (1)用磷酸盐缓冲液将合成的6-(甲巯基)嘌呤免疫原稀释至0.5-5. Omg/mL ； (2)经常规弗氏佐剂法对动物进行注射，注射后抽取动物特异抗血清，得到有效的抗体。
10.ー种6-(甲巯基)嘌呤检测试剂，含有权利要求6-8所述的抗6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体和指示试剂，所述的指示试剂选自酶试剂、放射性同位素试剂、荧光试剂或化学发光试剂中的ー种。
11.根据权利要求10所述的6-(甲巯基)嘌呤检测试剂，其特征在于所述的指示试剂为酶试剂，由6-(甲巯基)嘌呤酶标偶联物和酶底物所组成。
12.根据权利要求11所述的6-(甲巯基)嘌呤检测试剂，其特征在于所述的6-(甲巯基)嘌呤酶标偶联物的制备方法包含以下步骤 (1)称取酶，在室温条件下溶解于磷酸缓冲液中，终浓度为2-6mg/mL； (2)用有机溶剂溶解6-(甲巯基)嘌呤衍生物，使其终浓度为10-50mg/mL，通过EDAC的方法进行活化，并与酶溶液进行交联反应，经纯化和透析后得到6-(甲巯基)嘌呤酶标偶联物， 所述的有机溶剂选自ニ甲基亚砜、ニ甲基甲酰胺、甲醇或こ醇中的ー种。
13.根据权利要求12所述的6-(甲巯基)嘌呤检测试剂，其特征在于所述的酶标偶联物的酶选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶中的ー种，优选为辣根过氧化物酶。
全文摘要
本发明公开了一种6-(甲巯基)嘌呤(6-Methylmercaptopurine，6-MMP)免疫原及其合成方法，以及由该免疫原获得的抗6-MMP特异性抗体、检测试剂及其制备方法。本发明的高效价的6-MMP特异性抗体研制的免疫试剂可以精确地测定6-MMP的含量。与HPLC等传统方法相比，本发明提供的免疫检测试剂灵敏度高、特异性强，并具有操作简单、速度快、检测结果准确等优点，对指导临床合理用药具有重要的意义。
文档编号G01N33/543GK102643341SQ20121008989
公开日2012年8月22日 申请日期2012年3月30日 优先权日2012年3月30日
发明者田军, 蔡江丽, 虞留明, 袁红霞 申请人:苏州博源医疗科技有限公司