一种药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法
【专利摘要】本发明公开一种药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法，所述方法为：以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷，取人参皂苷Rg1对照品加甲醇溶解制成对照品溶液制备；绘制标准曲线；将药物组合物注射液注入固相萃取柱，洗脱，蒸干，溶解制成供试品溶液；依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg1（C42H72O14）计，不得少于0.30mg。本发明为药物注射液总皂苷的含量测定方法提供了快速、准确的方法。
【专利说明】一种药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种注射液的含量测定方法，特别涉及本发明药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法。
【背景技术】
[0002]本发明药物组合物注射液是由黄芪、人参、苦参素3味药物组成、采用现代提取分离技术精制而成的中药注射剂，具有益气扶正，增强机体免疫功能的功效，在临床上用于原发性肝癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科肿瘤以及各种原因引起的白细胞低下及减少症和慢性乙型肝炎的治疗。
[0003]紫外--可见分光光度法是根据物质分子对波长为200_760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法；操作简单、准确度高、重现性好；波长长(频率小)的光线能量小，波长短(频率大)的光线能量大；分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。香草醛-高氯酸-冰醋酸方法利用高氯酸将化学成分的羟基氧化为羧基，增加I个双键结构，再经双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸的作用下形成阳碳离子盐而显色。
【发明内容】
[0004]本发明目的在于提供一种注射液的含量测定方法。
[0005]本发明目的是通过如下技术方案实现:
[0006]本发明药物组合物注射液的含量测定方法，包括如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷 含量的方法:
[0007]A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，取人参皂苷Rg1对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每Iml含人参皂苷Rg10.5-2mg的溶液，摇匀，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置试管中，氮气吹干，加入3%-7%的香草醛冰醋酸溶液0.1-0.4ml、高氯酸0.6-1.0ml，混匀，50-70°C水浴加热10-20分钟，取出，加入冰醋酸3_7ml，混匀，置冰浴冷却1-2分钟，以相应的试剂作空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录
VA)，在552nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，人参皂苷Rgl含量为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液制备，用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸懼水冲洗C_18, 500mg固相萃取柱，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次采用水7-13ml，0.5%-2% 乙酸溶液 10-20ml，水 10_20ml，5%-20% 甲醇溶液 7_13ml，75%-85% 甲醇溶液10-20ml，洗脱，取75%-85%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；测定法，精密量取供试品溶液200μ1，置试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rgl的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以人参皂苷Rg1 (C42H72O14)计，不得少于 0.30mg ；[0008]B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.9-1.0mg/ml的黄芪甲苷储备溶液；精密量取药物组合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次采用水8_12ml，
0.8%-1.2% 乙酸-水 13-18ml,水 13-18ml, 8%-12% 甲醇-水 8_12ml，75%_85% 甲醇-水13-18ml，洗脱；将75%-85%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干，取甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、20(^1^，置于试管中，氮气吹干，加入4.5%-5.5%的香草醛冰醋酸溶液0.1-0.3ml，高氯酸0.6-1.0ml混匀，于60°C进行显色反应12-17min，加入冰醋酸3_7ml，混匀，冰浴冷却，0.5-1.5min ;以相应试剂作空白，按照附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，总皂苷含量为横坐标，绘制标准曲线；分别吸取供试品溶液200 μ L，置于试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度；代入标准曲线方程，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计，不得少于0.30mg。
[0009]本发明药物组合物注射液的含量测定方法，优选如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法: [0010]A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，取人参皂苷Rg1对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每Iml含人参皂苷Rg1L Omg的溶液，摇匀，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200 μ I,置试管中，氮气吹干，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，混匀，60°C水浴加热15分钟，取出，加入冰醋酸5ml，混匀，置冰浴冷却I分钟，以相应的试剂作空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录V A)，在552nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，人参皂苷Rgl含量为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液制备，用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C_18，500mg固相萃取柱，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次采用水10ml，1%乙酸溶液15ml，水15ml，10%甲醇溶液10ml，80%甲醇溶液15ml，洗脱，取80%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；测定法，精密量取供试品溶液200 μ 1，置试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷RgI的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以人参皂苷Rgi(C42H72O14)计，不得少于 0.30mg ；
[0011]B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.95mg/ml的黄芪甲苷储备溶液；精密量取药物组合物注射液2.5ml,注入C-18，500mg固相萃取柱，依次采用水10ml，1%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水IOml，80%甲醇-水15ml，洗脱；将80%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干，取甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200yL，置于试管中，氮气吹干，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸
0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml，混匀，冰浴冷却Imin ;以相应试剂作空白，按照附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，总皂苷含量为横坐标，绘制标准曲线；分别吸取供试品溶液200 μ L，置于试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度；代入标准曲线方程，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计，不得少于0.30mg。[0012]本发明药物组合物注射液的含量测定方法，优选如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法:
[0013]A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，取人参皂苷Rg1对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每Iml含人参皂苷Rg10.6mg的溶液，摇匀，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200 μ 1，置试管中，氮气吹干，加入6%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml、高氯酸0.9ml,混匀，55°C水浴加热18分钟，取出，加入冰醋酸4ml，混匀，置冰浴冷却2分钟，以相应的试剂作空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录V A)，在552nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，人参皂苷Rgl含量为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液制备，用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C_18，500mg固相萃取柱，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次采用水8ml，1.8%乙酸溶液12ml，水18ml，6%甲醇溶液12ml，76%甲醇溶液18ml，洗脱，取76%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；测定法，精密量取供试品溶液200μ 1，置试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rgl的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以人参皂苷Rgi(C42H72O14)计，不得少于 0.30mg ；
[0014]B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.9mg/ml的黄芪甲苷储备溶液；精密量取药物组合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次采用水9ml，1.1%乙酸-水14ml，水17ml，9%甲醇-水11ml，76%甲醇-水17ml，洗脱；将77%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干，取甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μ L，置于试管中，氮气吹干，加入4.6%的香草醛冰醋酸溶液0.25ml，高氯酸0.7ml混匀，于60°C进行显色反应16min，加入冰醋酸4ml，混匀，冰浴冷却，1.2min ；以相应试剂作空白，按照附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，总皂苷含量为横坐标，绘制标准曲线；分别吸取供试品溶液200 μ L，置于试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度；代入标准曲线方程，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计，不得少于0.30mgo
[0015]本发明药物组合物注射液的含量测定方法，优选如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法:
[0016]A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，取人参皂苷Rg1对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每Iml含人参皂苷Rg1L 5mg的溶液，摇匀，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200 μ I,置试管中，氮气吹干，加入4%的香草醛冰醋酸溶液0.3ml、高氯酸0.7ml，混匀，65°C水浴加热12分钟，取出，加入冰醋酸6ml，混匀，置冰浴冷却I分钟，以相应的试剂作空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录V A)，在552nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，人参皂苷Rgl含量为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液制备，用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C_18，500mg固相萃取柱，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次采用水12ml，0.6%乙酸溶液18ml，水12ml，15%甲醇溶液8ml，82%甲醇溶液12ml，洗脱，取82%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；测定法，精密量取供试品溶液200μ 1，置试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rgl的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以人参皂苷Rg1 (C42H72O14)计，不得少于0.30mg ；
[0017]B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.0mg/ml的黄芪甲苷储备溶液；精密量取药物组合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次采用水Ilml，0.9%乙酸-水17ml,水14ml, 11%甲醇-水9ml, 83%甲醇-水14ml,洗脱；将83%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干，取甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200yL，置于试管中，氮气吹干，加入5.2%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml，高氯酸0.9ml混匀，于60°C进行显色反应13min，加入冰醋酸6ml，混匀，冰浴冷却，0.6min ；以相应试剂作空白，按照附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，总皂苷含量为横坐标，绘制标准曲线；分别吸取供试品溶液200 μ L，置于试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度；代入标准曲线方程，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计，不得少于
0.30mgo
[0018]上述本发明药物组合物注射液的原料药组成为:黄芪25?35重量份、人参8?12重量份、苦参素0.5?1.5重量份；本发明药物组合物注射液的制备方法为:以上三味药，人参用60?80%的乙醇，回流提取I?3次，每次I?2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为65°C 1.10?1.20的清膏，备用；黄芪加水煎煮I?3次，每次I?3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为65°C 1.10?1.20的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使含醇量达75%，用氢氧化钠调PH值至6?7，静置10?18小时，取上清液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为65°C 1.10?1.15的清膏；再加乙醇使含醇量达85%，用氢氧化钠调值PH至6?7，静置，滤过，滤液回收乙醇至无醇味,加注射用水到40体积份,用氢氧化钠调PH值至6?7，100°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤；用氢氧化钠调PH值至6?7，加活性炭，搅匀，煮沸15分钟，滤过，滤液备用；另取苦参素溶解，用稀盐酸调PH值至6?7，100?120°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤，与脱炭后的药液合并，混匀，加注射用水至规定量，滤过，灌装，即得。
[0019]上述本发明药物组合物注射液的原料药组成为:黄芪30重量份、人参10重量份、苦参素I重量份；本发明药物组合物注射液的制备方法为:以上三味药，人参用75%的乙醇，回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为65°C 1.10?1.20的清膏，备用；黄芪加水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为650C 1.10?1.20的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使含醇量达75%，用氢氧化钠调PH值至6?7，静置12小时，取上清液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为65°C 1.10?1.15的清膏；再加乙醇使含醇量达85%，用氢氧化钠调值PH至6?7，静置，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水到40体积份，用氢氧化钠调PH值至6?7，100°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤；用氢氧化钠调PH值至6?7，加活性炭，搅匀，煮沸15分钟，滤过，滤液备用；另取苦参素溶解，用稀盐酸调PH值至6?7，100°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤，与脱炭后的药液合并，混匀，加注射用水至规定量，滤过，灌装，即得。[0020]上述重量份与体积份的关系为克与晕升的关系。
[0021]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果:
[0022]本发明药物组合物注射液含量测定方法，更加明确了产品的有效成分及其含量测定方法，能更好的控制产品质量，保证产品更安全、有效。实验结果表明该方法线性关系良好，精密度、稳定性、重复性良好。
[0023]附图:
[0024]图1为检测波长；
[0025]图2为Rg1标准曲线图；
[0026]图3为黄芪甲苷标准曲线图。
[0027]下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明；本发明实验例中药物组合物注射液均由实施例1方法制备。
[0028]实验例I本发明药物注射液测定实验
[0029]I仪器与药品
[0030]日立U-3310紫外可见分光光度计
[0031]标准品:人参皂苷Rg1 (含量大于98%)，超纯水，甲醇为色谱纯，高氯酸，其他试剂为分析纯。
[0032]2方法与结果
[0033]2.1溶液制备
[0034]2.1.1对照品溶液制备
[0035]取人参皂苷Rgl对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成每Iml含人参皂苷Rg1L Omg的溶液，摇匀，即得。
[0036]2.1.2供试品溶液
[0037]精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱(C_18，500mg。活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗)，依次采用水10ml，1%乙酸溶液15ml，水15ml，10%甲醇溶液10ml，80%甲醇溶液15ml，洗脱。取80%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液。
[0038]2.2本发明药物注射液测定
[0039]2.2.1检测波长的确立
[0040]吸取对照品溶液适量，置试管中，氮气吹干，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，混匀，60°C水浴加热15分钟，取出，加入冰醋酸5ml，混匀，置冰浴冷却I分钟。以空白溶液作参比，显色体系在400?700nm波长范围内扫描，确定最大吸收波长为552nm (见附图1)。
[0041]2.2.2本发明药物注射液测定
[0042]精密量取供试品溶液200μ 1，置试管中，氮气吹干，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，混匀，60°C水浴加热15分钟，取出，加入冰醋酸5ml，混匀，置冰浴冷却I分钟。以相应的试剂作空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录
VA)，在552nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含人参皂苷Rgl的浓度，计算，即得。
[0043]实验例2线性关系考察[0044]精密量取对照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置试管中，氮气吹干，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，混匀，60°C水浴加热15分钟，取出，加入冰醋酸5ml，混匀，置冰浴冷却I分钟。以相应的试剂作空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录V A)，在552nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，人参皂苷Rg1含量为横坐标，绘制标准曲线为y=4.4231x-0.0286，在(29.7 μ g-198 μ g)范围内，与吸光度具有良好的线性关系(r=0.9996)(见附图2)。
[0045]实验例3精密度实验
[0046]取“2.1.1”项下的对照品溶液适量，氮气吹干，在上述条件下测定吸光度，连续测定6次，结果见表1。
[0047]表1精密度结果
[0048]
【权利要求】
1.一种药物组合物注射液的含量测定方法，其特征在于该方法包括如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法: A.以人参皂苷1?&测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，取人参皂苷Rg1对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每Iml含人参皂苷Rg10.5-2mg的溶液，摇匀，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置试管中，氮气吹干，加入3%-7%的香草醛冰醋酸溶液0.1-0.4ml、高氯酸0.6-1.0ml，混匀，50-70°C水浴加热10-20分钟，取出，加入冰醋酸3-7ml，混匀，置冰浴冷却1_2分钟，以相应的试剂作空白，照紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，人参皂苷Rgl含量为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液制备，用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18，500mg固相萃取柱，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次采用水7-13ml，0.5%-2%乙酸溶液10_20ml，水10_20ml，5%_20%甲醇溶液7-13ml，75%-85%甲醇溶液10_20ml，洗脱，取75%_85%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；测定法，精密量取供试品溶液200 μ 1，置试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rgl的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以人参皂苷 Rg1C42H72O14 计，不得少于 0.30mg ； B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.9-1.0mg/ml的黄芪甲苷储备溶液；精密量取药物组合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次采用水8_12ml，.0.8%-1.2% 乙酸-水 13-18ml,水 13-18ml, 8%-12% 甲醇-水 8_12ml，75%_85% 甲醇-水13-18ml，洗脱；将75%-85%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干，取甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、20(^1^，置于试管中，氮气吹干，加入4.5%-5.5%的香草醛冰醋酸溶液0.1-0.3ml，高氯酸0.6-1.0ml混匀，于60°C进行显色反应12-17min，加入冰醋酸3_7ml，混匀，冰浴冷却，0.5-1.5min ;以相应试剂作空白，按照附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，总皂苷含量为横坐标，绘制标准曲线；分别吸取供试品溶液200 μ L，置于试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度；代入标准曲线方程，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计，不得少于0.30mg ； 药物组合物注射液由如下方法制成:黄苗25~35重量份、人参8~12重量份、苦参素0.5~1.5重量份；以上三味药，人参用60~80%的乙醇，回流提取I~3次，每次I~2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为65°C 1.10~1.20的清膏，备用；黄芪加水煎煮I~3次，每次I~3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为65°C 1.10~1.20的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使含醇量达75%，用氢氧化钠调PH值至6~7，静置10~18小时，取上清液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为65°C 1.10~1.15的清膏；再加乙醇使含醇量达85%，用氢氧化钠调值PH至6~7，静置，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水到40体积份,用氢氧化钠调PH值至6~7,100°C灭菌30分钟,冷藏,抽滤；用氢氧化钠调PH值至6~7，加活性炭，搅匀，煮沸15分钟，滤过，滤液备用；另取苦参素溶解，用稀盐酸调PH值至6~7，100~120°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤，与脱炭后的药液合并，混匀，加注射用水至规定量，滤过，灌装，即得。
2.如权利要求1所述的药物组合物注射液的含量测定方法，其特征在于该方法包括如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法: A.以人参皂苷1?&测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，取人参皂苷Rg1对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每Iml含人参皂苷Rg1L Omg的溶液，摇匀，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置试管中，氮气吹干，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，混匀，60°C水浴加热15分钟，取出，加入冰醋酸5ml，混匀，置冰浴冷却I分钟，以相应的试剂作空白，照中国药典2010年版一部附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，人参皂苷Rgl含量为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液制备，用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18，500mg固相萃取柱，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱，依次采用水10ml，1%乙酸溶液15ml，水15ml，10%甲醇溶液10ml，80%甲醇溶液15ml，洗脱，取80%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；测定法，精密量取供试品溶液200μ1，置试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rgl的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以人参皂苷Rg1C42H72O14计，不得少于.0.30mg ； B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.95mg/ml的黄芪甲苷储备溶液；精密量取药物组合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次采用水10ml，1%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脱；将80%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干，取甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200yL，置于试管中，氮气吹干，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml，混匀，冰浴冷却Imin ；以相应试剂作空白，按照附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，总皂苷含量为横坐标， 绘制标准曲线；分别吸取供试品溶液200 μ L，置于试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度；代入标准曲线方程，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计，不得少于0.30mg。
3.如权利要求1所述的药物组合物注射液的含量测定方法，其特征在于该方法包括如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法: A.以人参皂苷1?&测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，取人参皂苷Rg1对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每Iml含人参皂苷Rg10.6mg的溶液，摇匀，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置试管中，氮气吹干，加入6%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml、高氯酸0.9ml，混匀，55°C水浴加热18分钟，取出，加入冰醋酸4ml，混匀，置冰浴冷却2分钟，以相应的试剂作空白，照中国药典2010年版一部附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，人参皂苷Rgl含量为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液制备，用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18，500mg固相萃取柱，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱，依次采用水8ml，1.8%乙酸溶液12ml，水18ml，6%甲醇溶液12ml，76%甲醇溶液18ml，洗脱，取76%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；测定法，精密量取供试品溶液200μ 1，置试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rgl的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以人参皂苷Rg1C42H72O14计，不得少于0.30mg ； B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.9mg/ml的黄芪甲苷储备溶液；精密量取药物组合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次采用水9ml，1.1%乙酸-水14ml，水17ml，9%甲醇-水11ml，76%甲醇-水17ml，洗脱；将77%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干，取甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液30、50、.100,150,200 μ L，置于试管中，氮气吹干，加入4.6%的香草醛冰醋酸溶液0.25ml，高氯酸0.7ml混匀，于60°C进行显色反应16min，加入冰醋酸4ml，混匀，冰浴冷却，1.2min ；以相应试剂作空白，按照附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，总皂苷含量为横坐标，绘制标准曲线；分别吸取供试品溶液200 μ L，置于试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度；代入标准曲线方程，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计，不得少于0.30mgo
4.如权利要求1所述的药物组合物注射液的含量测定方法，其特征在于该方法包括如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法: A.以人参皂苷1?&测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，取人参皂苷Rg1对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每Iml含人参皂苷Rg1L 5mg的溶液，摇匀，即得；标准曲线的制备，精密量取对照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置试管中，氮气吹干，加入4%的香草醛冰醋酸溶液0.3ml、高氯酸0.7ml，混匀，65°C水浴加热12分钟，取出，加入冰醋酸6ml，混匀，置冰浴冷却I分钟，以相应的试剂作空白，照中国药典2010年版一部附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，人参皂苷Rgl含量为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液制备，用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18，500mg固相萃取柱，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱，依次采用水12ml，0.6%乙酸溶液18ml，水12ml，15%甲醇溶液8ml，82%甲醇溶液12ml，洗脱，取82%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；测定法，精密量取供试品溶液200μ 1，置试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rgl的浓度，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以人参皂苷Rg1C42H72O14计，不得少于0.30mg ； B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.0mg/ml的黄芪甲苷储备溶液；精密量取药物组合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次采用水11ml，0.9%乙酸-水17ml,水14ml, 11%甲醇-水9ml, 83%甲醇-水14ml,洗脱；将83%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干，取甲醇溶解，定容于2ml量瓶中，制成供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液30、50、.100、150、200yL，置于试管中，氮气吹干，加入5.2%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml，高氯酸0.9ml混匀，于60°C进行显色反应13min，加入冰醋酸6ml，混匀，冰浴冷却，0.6min ；以相应试剂作空白，按照附录V A紫外-可见分光光度法，在552nm波长处测定吸光度；以吸光度为纵坐标，总皂苷含量为横坐标，绘制标准曲线；分别吸取供试品溶液200 μ L，置于试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“氮气吹干”起，依法测定吸光度；代入标准曲线方程，计算，即得；药物组合物注射液每Iml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计，不得少于.0.30mgo
【文档编号】G01N1/34GK103575667SQ201210256952
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2012年7月24日 优先权日:2012年7月24日
【发明者】段宏泉, 翁红, 米广明, 张子安, 唐雪松, 铁芳 申请人:长白山制药股份有限公司