对细胞表面的分析物进行检测和/或定量的改进方法与流程

文档序号:11780395阅读:来源:国知局
对细胞表面的分析物进行检测和/或定量的改进方法与流程

技术特征:
1.一种用于对存在于固态组织样品中的感兴趣的蛋白进行定量的方法,所述方法包括如下步骤:(i)使表达所述蛋白的固态组织样品与第一配体和第二配体接触,这些配体的每一种均能够特异性地结合至所述蛋白的结构域,并且这些配体分别标记有供体化合物和受体化合物,所述供体化合物和所述受体化合物二者形成FRET伴侣对;(ii)将所述固态组织样品与用于DNA的荧光标记的试剂进行孵育;(iii)清洗所述固态组织样品;(iv)测量由测量介质发射的FRET信号,并根据荧光标记的DNA的发光所对应的信号对所述FRET信号进行归一化;其中,在测量所述FRET信号之前,以裂解物的形式对所述固态组织样品进行均质化。2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述第一配体和所述第二配体为抗体。3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述第一配体为所述感兴趣的蛋白的已知配体且不是抗体;并且,所述第二配体为抗体。4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的蛋白为膜蛋白。5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的蛋白选自于G蛋白偶联膜蛋白受体和受体酪氨酸激酶。6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的蛋白选自于EGFR、HER2、HER3和HER4。7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述供体化合物为稀土元素螯合物或稀土元素穴状化合物。8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述供体化合物为铕螯合物或铕穴状化合物、或铽螯合物或铽穴状化合物。9.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述受体化合物为荧光素。10.如权利要求1所述的方法,其特征在于,以大于10nM的终浓度将所述第一配体和所述第二配体引入所述测量介质。11.如权利要求10所述的方法,其特征在于,以20nM-80nM的终浓度将所述第一配体和所述第二配体引入所述测量介质。12.如权利要求1所述的方法,其特征在于,对所述固态组织样品进行均质化的步骤在引入所述第一配体和所述第二配体之后进行。13.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法在肿瘤组织样品上实施。14.如权利要求1所述的方法,其特征在于,当所述第一配体或所述第二配体为抗体时,所述抗体的表位位于所述感兴趣的蛋白暴露至胞外基质的结构域上。15.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的蛋白为HER2蛋白;并且,所述第一配体和所述第二配体是对该蛋白具有特异性的抗体。16.如权利要求1所述的方法,其特征在于,通过应用超声波对所述固态组织样品进行均质化。17.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述受体化合物选自于:别藻蓝蛋白、罗丹明、花青素、方酸菁、硼-二吡咯亚甲基衍生物、已知名称为“Atto”的荧光团、已知名称为“DY”的荧光团和已知名称为“Alexa”的化合物。
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