专利名称：一种检测三聚氰胺的方法
技术领域：
本发明涉及ー种色谱检测方法，特别涉及一种三聚氰胺的高效液相色谱检测方法。
背景技术：
三聚氰胺，即1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺，是ー种三嗪类含氮杂环有机化合物。几乎无味，微溶于水(3.lg/L常温)，可溶于甲醇、甲醛、こ酸、热こニ醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚类。与甲醛缩合聚合可制得三聚氰胺树脂，ー种热固性树脂，具有良好的耐电弧性、耐热性及耐碱性，被广泛用于塑料及涂料エ业。蛋白质中含有大量氮元素，以常用的凯氏定氮法测定产品中的蛋白质含量吋，不能区分三聚氰胺和蛋白质中的氮元素，因而ー些不良厂家将三聚氰胺添加到饲料和食品中，提高产品中蛋白质的检测数值，降低生产成本，牟取暴利。现有国标检测三聚氰胺的方法是《GB/T22400-2008原料乳三聚氰胺快速检测液相色谱法》(下文简称GB/T22400)和《GB/T22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》(下文简称GB/T22388)。GB/T22388中包含多种检测方法，运用高效液相色谱、液相色谱_质谱/质谱法、气相色谱-质谱联用法进行測定，结果精确度高。但检测时间通常较长，且所需设备要求较高，在一般企业内部质量控制部门进行抽样检测时，容易受到条件限制。一般企业是按照GB/T22388第一法高效液相色谱法进行检测的，GB/T22388第一法的检测条件:流动相为离子对试剂缓冲溶液与こ腈比例为85:15(v/v)或90:10(v/v)的混合溶液，流速为1.0ml/min，仪器正常压カ为1500-1600psi。流动相比例为85:15(v/v)时，保留时间16-18min ;流动相比例为90:10 (v/v),保留时间29_31min。检测的全过程约需2小时，耗时长，效率低，不便于需要快速得到检测结果的情況。其主要原因在于其前处理中用到的固相萃取净化步骤耗时长，通常情况下仅固相萃取一歩就需要约I小吋。若是省略前处理中的固相萃取柱浄化步骤，虽然可以加快检测速度，但很可能会受到杂质峰的干扰，影响定性定量分析。为克服需要快速检测情况下GB/T22388的不足，国家质检部门又推出GB/T22400检测方法。GB/T22400检测速度快，其色谱条件为:强离子交换色谱柱，SCX, 250mmX 4.6mm(1.d.流速为1.5ml/min。其中色谱柱并非常用C8、C18色谱柱,且价格较常用色谱柱高，仪器正常运行情况下，柱压为2500-2600psi ;高柱压下色谱柱使用寿命较短，对于需要长期大量进行原料乳中三聚氰胺检测的乳品企业而言，检测成本较高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中检测速度慢和检测成本高的缺陷，提供ー种快速、结果准确的检测原料乳中三聚氰胺的方法。为了实现上述发明目的， 本发明提供了以下技术方案:
一种检测三聚氰胺的方法，包括以下步骤:( I)制备三聚氰胺的标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得三聚氰胺保留时间，并生成浓度与峰面积之间对应的标准曲线；(2)取样品进行预处理，得到分析试样，利用所述高效液相色谱仪在与步骤(I)相同的条件下对其进行检测，得到所述样品的检测结果；(3)将步骤(2)中获得的所述样品的检测结果与步骤(I)中得到的所述标准曲线进行比对，计算确定样品中三聚氰胺的含量；所述步骤(2)中的预处理包括以下步骤:称取样品(若为奶粉制品，加入纯水还原，并记录原始数据，计算稀释倍数)，加入こ腈剧烈震荡混合6min，充分混匀后静置3min，4000-8000r/min转速离心5_10min，吸取上清液过滤，收集滤液，作为高效液相色谱仪分析试样。进ー步的,上述过滤步骤用0.22 ii m有机相滤膜过滤。进ー步的，所述步骤(I)中高效液相色谱使用的流动相为70/30 (体积比)离子对试剂缓冲溶液-こ腈。所述离子对试剂缓冲溶液为含1.0g/L十二烷基磺酸钠和20mmol/L磷酸的水溶液。进ー步的，上述流动相超声处理30-40min，经0.22 y m有机相滤膜过滤后使用，效果更佳。超声处理使流动相更加均匀，检测分析得到的结果更加稳定可靠。进ー步的,所述步骤(I)中高效液相色谱条件:流速0.8-1.0ml/min ;柱温40°C;检测波长:240nm ;进样量:20 Uし本发明中，取样品前处理为，加入こ腈剧烈震荡混合6min，充分混匀后静置3min，4000-8000r/min转速离心5_10min，吸取上清液过滤，作为高效液相色谱仪分析试样。制得的分析试样杂质少，能够有效延长了色谱柱的使用寿命。同GB/T22388前处理方法相比较，无需固相萃取，简便快速，降低了成本，只需30-40分钟即可得到检测結果，且回收率高。GB/T22388前处理方法若是省略固相萃取步骤，则制得检测到样品中杂质保留时间与三聚氰胺保留时间相邻近，易造成干扰。本发明方法与GB/T22388相比，流动相中，用十二烷基磺酸钠代替辛烷磺酸钠，同时增大こ腈的比例，离子对试剂缓冲溶液与こ腈比例调整为70:30。本发明方法对流动相进行调整后，检测优势在于:三聚氰胺出峰时间缩短，保留时间在10-llmin。确保在最短的时间内将三聚氰胺和杂质分离开，防止杂质峰对三聚氰胺的检测的干扰，准确的定性定量測定出原料奶中的三聚氰胺含量。既能保证快速出峰，达到迅速检测的目的；又能保证分离效果，完全将杂质和三聚氰胺分离开来，杂质峰不对三聚氰胺检测造成干扰。本发明方法，采用上述前处理方法和流动相，检测三聚氰胺时杂质峰和三聚氰胺峰能够完全分离开，不会因为杂质峰与三聚氰胺峰出现重叠而影响检测，有利于进行定性定量分析。本发明对色谱流动相和流速进行了调整。本发明方法，流速为0.8-1.0ml/min，正常压カ为1200-1400psi。降低流速，有效的保护了泵系统和色谱分析系统，延长色谱柱的使用寿命。且在0.8ml/min流速下,三聚氰胺保留时间为ll_13min,不影响检测速度。本发明检测三聚氰胺的方法适用于原料奶，纯牛奶(成品)，奶粉(复原后同纯牛奶)，中性奶(早餐奶，大枣牛奶等)。与现有技术相比，本发明的有益效果:使用本发明提供的三聚氰胺检测方法，预处理简单方便，检测速度快，三聚氰胺分离效果好，检测结果精确度高，适用于各种需要快速检测分析原料奶中三聚氰胺的场合。本发明使用常用的C18色谱柱，价格较低，容易获得。本发明方法检测三聚氰胺过程中，柱压较低，有利于保护检测系统，増加色谱柱的使用寿命，有利于控制检测成本。
:见下表I表I
权利要求
1.一种检测三聚氰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤: 制备三聚氰胺的标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，得三聚氰胺保留时间，井生成浓度与峰面积之间对应的标准曲线； 取样品进行预处理，得到分析试样，利用所述高效液相色谱仪在与步骤(I)相同的条件下对其进行检测，得到所述样品的检测结果； 将步骤(2)中获得的所述样品的检测结果与步骤(I)中得到的所述标准曲线进行比对，计算确定样品中三聚氰胺的含量； 所述步骤(I)中高效液相色谱使用的流动相为70/30体积比的离子对试剂缓冲溶液-こ腈; 所述离子对试剂缓冲溶液为含1.0g/L十二烷基磺酸钠和20mmol/L磷酸的水溶液。
2.根据权利要求1所述检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述高效液相色谱使用的流动相经0.22 m有机相滤膜过滤完成后超声处理30-40min。
3.根据权利要求1所述检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的预处理包括以下步骤:称取样品，加入こ腈剧烈震荡混合6min，充分混匀后静置3min，4000-8000r/min转速离心5-10min,吸取上清液过滤,收集滤液。
4.根据权利要求3所述检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的预处理中过滤步骤用的是0.22 y m有机相滤膜进行过滤。
5.根据权利要求1所述检测三聚氰胺的方法，其特征在于，所述步骤(I)中高效液相色谱条件:流速0.8-1.0ml/min ;柱温40°C ;检测波长:240nm ;进样量:20 Uし
6.根据权利要求1所述检测三聚氰胺的方法在原料奶，纯牛奶，奶粉和中性奶的检测分析中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种检测三聚氰胺的方法，包括以下步骤(1)制备三聚氰胺的标准溶液，用高效液相色谱仪对其检测，得保留时间，并生成浓度与峰面积之间对应的标准曲线；(2)取样品进行预处理，得到分析试样，利用所述高效液相色谱仪在与步骤(1)相同的条件下对其进行检测，得到所述样品的检测结果；(3)将步骤(2)中获得的检测结果与步骤(1)中得到所述标准曲线进行比对，计算确定样品中三聚氰胺的含量。本发明提供的三聚氰胺检测方法，预处理简单方便，检测速度快，三聚氰胺分离效果好，检测结果精确度高，适用需要快速分析原料乳中三聚氰胺的场合。
文档编号G01N30/02GK103091419SQ20131001488
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月15日 优先权日2013年1月15日
发明者王旭霞, 康红彦, 刘翠霞, 刘海燕, 李启明 申请人:新希望乳业控股有限公司