鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型涉及一种检验器械，即一种鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒，包括盒体(1)及盒盖(6)，其特点是：盒体(1)是一个由四周的盒壁和下面的盒底围成，盒底(1)上方有一个测试板(2)，测试板(2)上开有两组凹孔，一组是四个插装药液瓶的瓶孔(4)另一组是24个反应孔(3)，24个反应孔(3)中间开有滑槽(9)，滑槽(9)里面设有可滑动的滑块(8)，滑块(8)上面开有两个对照孔(7)，测试板(2)是由半透明的薄片制成，在测试板(2)的下方，盒底上面还装有电池(11)和灯管(10)。其有益效果是：结构简单，使用方便，不需要仪器就能检测，能同时测定样品、阳性对照和阴性对照，避免了可能隐藏的假阳性和假失效，检测灵敏度比免疫层析试纸条高出十倍以上。
【专利说明】鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种检验器械，即一种鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]鸡白痢沙门氏菌是一种两端稍圆的细长杆菌(0.3?0.5um X12.5um)，对一般碱性苯胺染料着色良好，革兰氏阴性。本菌具有高度宿主适应性，由鸡白痢沙门氏菌引起，在禽类中广泛传播，除能通过消化道、眼结膜及交配感染外，还能通过带菌卵传播。带菌卵有的是康复或带菌母鸡所产，有的是健康蛋壳受污染。带菌卵孵化时，会形成死胚或孵出病雏。病雏的粪便和绒毛上含有大量的病菌，可污染饲料、饮水、孵化器和育雏器等，因此，与病鸡雏同群的健康雏鸡很快会受到感染。耐过的鸡长期带菌，成年后又产出带菌卵，如此周而复始，代代相传，造成严重的危害。动物感染鸡白痢沙门氏菌后，体内会产生抗鸡白痢沙门氏菌抗体。因此，通过检测体液或血液中是否含有鸡白痢沙门氏菌抗体便可诊断出该机体是否感染过鸡白痢沙门氏菌。现行的鸡白痢沙门氏菌感染检测方法有:
[0003]1.细菌培养法，该法需要在实验中进行，且需I?2天的实验时间，细菌必须经过生化试验等鉴定方法鉴定方可确认。
[0004]2.酶联免疫检测(ELISA)法，该法适合在一般实验室里进行，但检测程序复杂还需要酶标仪，得由专业技术人员执行；不适合现场快速检测。
[0005]3.试纸条检测法，该法适合现场快速检测，但因灵敏度低且没有同时进行阳性和阴性对照，容易造成假阳性或假阴性的结果。
[0006]4.平板凝集实验捡测法:该法虽然简单，不需要特殊仪器，但该法检测灵敏度低，对没有经验的人很难判断试验结果是阴性还是阳性。
[0007]5.荧光定量PCR检测法:该法虽然检测灵敏度高，但需要特殊的仪器，还得由专业技术人员执行；不适合现场快速检测。
[0008]随着养鸡业规模的扩大，疫病检测的工作量大幅增加，特别需要实现现场快速检测，可是，现有方法均不能满足现场检测的需要。此外，为了避免鸡的惊恐、挣扎等应激反应，现场检测最好在昏暗的光线下进行。因此，养鸡业急需能在光线昏暗的条件下对鸡白痢沙门氏菌抗体进行现场快速检测的器械。
【发明内容】
[0009]本实用新型的目的是提供一种操作简单，准确快速，灵敏度高，能够在光线比较昏暗的条件下进行现场快速检测的鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒。
[0010]上述目的是由以下技术方案实现的:研制一种鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒，包括盒体及盒盖，其特点是:所述的盒体是一个由四周的盒壁和下面的盒底围成，盒底上方有一个测试板，测试板上开有两组凹孔，一组是四个插装药液瓶的瓶孔，另一组是24个反应孔，24个反应孔中间开有滑槽，滑槽里面设有可滑动的滑块，滑块上面开有两个对照孔，测试板是由半透明的薄片制成，在测试板的下方，盒底上面还装有电池和灯管。[0011]所述反应孔及对照孔的表面设有鸡白痢沙门氏菌抗原包被层和封闭液封闭层。
[0012]所述瓶孔分别配有反应液瓶，阳性对照液瓶，阴性对照液瓶、显色液瓶。
[0013]所述检测板上面设有一个记录卡片，记录卡片是由横条和边条构成，横条上面设有多个记录格。
[0014]所述盒体的盒盖上面，还设有插笔槽，插笔槽内配插专用记录笔。
[0015]本实用新型的有益效果是:结构简单，使用方便，不需要仪器就能检测，能同时测定样品、阳性对照和阴性对照，避免了可能隐藏的假阳性和假失效，检测灵敏度比免疫层析试纸条高出十倍以上。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1是第一种实施例的立体图；
[0017]图2是第一种实施例的部件检测板的立体图；
[0018]图3是第一种实施例的部件盒体的立体图；
[0019]图4是第二种实施例的部件记录卡片立体图；
[0020]图5是第二种实施例的部件盒体的立体图。
[0021]图中可见:盒体I，检测板2，反应孔3，瓶孔4，药液瓶5，盒盖6，对照孔7，滑块8，滑槽9，灯管10，电池11，支撑台12，记录卡片13，横条14，边条15，记录格16，插笔槽17，记录笔18。
【具体实施方式】
[0022]第一种实施例:如图1所示,这种鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒,包括盒体I及盒盖6，其特点是:所述的盒体I是一个是由四周的盒壁和下面的盒底围成，盒底上方通过盒壁周围的支撑台12支撑有一个测试板2，测试板2上开有三组凹孔，一组是24个反应孔3，每排6个，分为4排。另一组是四个插装药液瓶的瓶孔4。第三组是两个对照孔7，两个对照孔7设在滑块8上，滑块8可在滑槽9里面滑动，滑槽9开在4排反应孔3的中间位置。瓶孔4分别配有反应液瓶、阳性对照液瓶、阴性对照液瓶和显色液瓶。测试板2是由半透明的聚苯乙烯塑料薄片制成，置于盒壁周围的支撑台12之上，在测试板2的下方，盒底上面还装有灯管10和电池11。
[0023]反应孔3和对照孔7事先经灭活鸡白痢沙门氏菌裂解液包被，再用2 % BSA封闭液封闭，形成一个包被层和一个封闭层。反应液瓶里面的反应液含有过氧化氢酶标记的兔抗鸡抗体，可特异性地识别待测鸡白痢沙门氏菌抗体而不影响其与抗原结合。阳性对照液瓶里面的阳性对照液含鸡特异性抗体能识别鸡白痢沙门氏菌抗原。阴性对照液瓶里面的阴性对照液含有鸡阴性血清，该阴性血清不能识别包被在反应孔中鸡白痢沙门氏菌抗原。显色液瓶里面的显色液是过氧化氢酶的底物TMB-H2O2混合液。
[0024]检测板2的包被方法:用IOOmM Tris-HCl (pH8)缓冲液将鸡白痢沙门氏菌抗原稀释至1-1Oug / ml，按每个孔取100微升添加于测试板2的反应孔和对照孔中，静置I小时或以上；洗孔后用150微升(每个孔)2%牛血清蛋白-PBS缓冲液封闭I小时或以上，再洗孔后，于45°C烘干，用铝箔袋真空包装，置于冰箱备用。所述的鸡白痢沙门氏菌抗原可以是单一的细菌菌株也可以是不同菌株的混合，可以是灭活鸡白痢沙门氏菌或减毒细菌株也可以是鸡白痢沙门氏菌O抗原多糖。
[0025]反应液制备:将预先标记好的兔抗鸡抗体，用2%牛血清蛋白-PBS缓冲液释至
0.1-1Oug / ml，无菌过滤后装在液滴瓶里，置于冰箱备用。所述的二抗标记物是能直接或间接产生肉眼可见颜色的一种标记物，如:碱性磷酸酶、过氧化氢酶、胶体金等。
[0026]阳性对照液制备:阳性对照液含特异性抗体血清能识别包被在反应孔中的鸡白痢沙门氏菌抗原。将鸡白痢沙门氏菌阳性血清用2%牛血清蛋白-PBS缓冲液稀释，无菌过滤后装在液滴瓶里，置于冰箱备用。特异性抗体血清可以按公知的多克隆抗体制备方法来获得。既将鸡白痢沙门氏菌抗原纯化，然后与弗氏完全佐剂(CFA)(第一次免疫)或与弗氏不完全佐剂(IFA)(后续免疫)一起乳化后用于免疫接种兔或其它动物后获得的抗血清。鸡白痢沙门氏菌抗原可以从专门机构购得；鸡白痢沙门氏菌抗原可以是灭活细菌或细菌亚单位。
[0027]阴性对照液制备:阴性对照液含有阴性血清，该阴性血清不能识别包被在反应孔中的鸡白痢沙门氏菌抗原。将没有被鸡白痢沙门氏菌感染，也没有接种过鸡白痢沙门氏菌疫苗的正常鸡血清用I %牛血清蛋白-PBS缓冲液稀释100-900，000倍，无菌过滤后装在液滴瓶里，置于冰箱备用。
[0028]显色液制备:显色液是反应液中所含抗体标记酶的底物混合液。将反应液中所含抗体标记酶的底物用适当的缓冲液稀释成工作浓度，无菌过滤后装在避光液滴瓶里，置于冰箱备用。例:过氧化氢酶显色液制备:将TMB溶解于用50mM柠檬酸缓冲液(pH4.5)，调浓度至0.2mg / ml，再加过氧化氢至0.03% (此TMB-过氧化氢混合液即为过氧化氢酶显色液)，无菌过滤后装在避光液滴瓶里，置于冰箱备用。
[0029]检测过程，包含下述几个步骤:
[0030]1、加样反应:取测试板,给每个反应孔作记号,如:反应孔1-24 ;在各反应孔中加入5滴反应液，在两个对照孔中分别加入两滴阳性对照液和阴性对照液，用移液器分别吸取不同待测样品，在反应孔中分别滴加2滴待测样品，轻晃混匀后室温下静置5 — 30分钟。
[0031]2、洗涤:倒掉反应孔和对照孔中液体并用过滤水或自来水冲洗反应孔5次或以上；每次冲洗后，将测试板反向放在吸水纸上，以除去孔内水珠。
[0032]3、显色:在每个孔内加入6滴显色液，轻晃测试板并观察反应孔中颜色变化，直至阳性反应孔内有清晰的颜色出现。
[0033]4、结果分析:比较各样品反应孔与阳性对照、阴性对照的颜色深浅程度，确定被检样品是阳性还是阴性。
[0034]正常情况下，如果被检样品的颜色明显比阴性对照深，说明该被检样品为阳性；如果被检样品的颜色与阴性对照相同或更浅说明该被检样品为阴性。如果被检样品的颜色比阴性对照稍深说明该被检样品为拟似阳性。如果阳性对照的颜色与阴性对照相同或更浅说明该实验失败。
[0035]检测时，鸡舍内光线暗淡，鸡处于安眠状态为好，抓鸡时不会出现尖叫、挣扎等应激反应。为了进行比色，可将试剂盒里面的灯管10开亮，反应孔和对照孔内的颜色即可清晰可辨，而且不会增加鸡舍内的光亮。目前，各个养鸡场米用的标准鸡笼，多为4只一笼,三层一组，一组12只鸡，24个反应孔恰好能够完成两组鸡的取样。比色时，移动滑板的位置，可以使对照孔更加接近所要对比的反应孔，观察更加方便。[0036]第二种实施例:如图4所示，在检测板2上面设有一个记录卡片12，结合图5可见，这种记录卡片13是由横条14和边条15构成，横条14上面设有多个记录格16。使用时，把这种记录卡片13放在各排反应孔3的一侧，各个记录格16恰与各个反应孔3相对，可以把反应孔的比色结果记录在格子里。当然也可以在记录格16里面事先印制规定的符号，使用时，只要用笔划取即可。
[0037]结合图6可见，在盒体I的盒盖6上面，还设有插笔槽17，里面配有专用记录笔18，使用更加方便。
【权利要求】
1.一种鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒，包括盒体(1)及盒盖(6)，其特征在于:所述的盒体(1)是一个由四周的盒壁和下面的盒底围成，盒底上方有一个测试板(2)，测试板(2)上开有三组凹孔，一组是四个插装药液瓶的瓶孔(4)，另一组是24个反应孔(3)，24个反应孔(3)中间开有滑槽(9)，滑槽(9)里面设有可滑动的滑块(8)，滑块(8)上面开有两个对照孔(7)，测试板(2)是由半透明的薄片制成，在测试板(2)的下方，盒底上面还装有电池(11)和灯管(10)。
2.根据权利要求1所述的鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特征在于:所述反应孔(3)和对照孔(7)是表面设有鸡白痢沙门氏菌抗原包被层和封闭液封闭层。
3.根据权利要求1所述的鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特征在于:所述瓶孔(4)分别配有反应液瓶，阳性对照液瓶，阴性对照液瓶、显色液瓶。
4.根据权利要求1所述的鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特征在于:所述检测板(2)上面设有一个记录卡片(13)，记录卡片(13)是由横条(14)和边条(15)构成，横条(14)上面设有多个记录格(16)。
5.根据权利要求1所述的鸡白痢沙门氏菌抗体快捷检测试剂盒，其特征在于:所述盒体(1)的盒盖(6)上面，还设有插笔槽(17)，插笔槽(17)内配插专用记录笔(18)。
【文档编号】G01N33/569GK203535049SQ201320717126
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】刘锴 申请人:内蒙古民族大学