一种金刚烷胺人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种金刚烷胺人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。金刚烷胺人工半抗原的分子结构式如式(Ⅰ)，金刚烷胺人工抗原的分子结构式如式(Ⅱ)。所述应用是所述金刚烷胺人工抗原在制备抗金刚烷胺抗体中的应用。本发明的金刚烷胺人工半抗原最大程度地保留了金刚烷胺的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇；进一步制备获得的金刚烷胺人工抗原可免疫获得亲和力高、灵敏度高、特异性强的抗金刚烷胺抗体，经免疫新西兰白兔获得的免疫血清的效价高达1:70000，可用于对金刚烷胺进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。
【专利说明】一种金刚烷胺人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物化工【技术领域】，具体涉及一种金刚烷胺人工半抗原、人工抗原及 其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 金刚烷胺可以抑制病毒穿入宿主细胞，并影响病毒的脱壳，抑制其繁殖，在临床上 用于预防和治疗人流感病毒的感染，具有价格低廉、药效明显等特点，同时也曾是帕金森综 合症的治疗药物。但金刚烷胺蓄积会对人体造成嗜睡、失眠、眩晕、抑郁、恶心、食欲减退等 多种不良反应，具有一定的毒副作用。长期使用金刚烷胺还可使病毒产生不同程度的耐药 性，诱导产生新型耐药病毒。
[0003] 然而，2012年11月媒体曝出国内养殖的"速生鸡"从孵出到端上餐桌只需45天，不 法商贩为了保证其存活，给鸡喂养了大剂量人用药物来抑制禽类的禽流感等病症。2012年 12月，央视调查中称，一些养殖户为进一步缩短养殖周期，让原本已经是速成品种的白羽鸡 长得更快，偷偷喂食违禁药物，其中包括金刚烷胺等抗病毒药品和地塞米松等激素类药品。 "速成鸡"事件的爆发引发了全国消费者对禽肉食品安全的广泛关注和担忧，对建立快速、 灵敏、准确的检测技术提出了迫切需求。
[0004] 目前，对金刚烷胺的检测主要依靠高效液相色谱法（HPLC)、气相色谱法（GC)、薄 层色谱法（TLC)、质谱法（MS)等，但是存在仪器昂贵，检测费时，并且需要专业技术人员进 行操作，不能达到现代检测对快速、准确的要求。
[0005] 免疫分析法可以弥补以上所有缺点，免疫分析法是一种利用抗原抗体特异性结合 反应检测各种物质（药物、激素、蛋白质、微生物等）的分析方法，建立小分子化合物的免疫 分析方法的关键是能够制造出对小分子化合物具有高亲和力和高特异性的抗体。但是，由 于包括金刚烷胺在内的大多数小分子化合物（分子量小于1000)，不具有免疫原性，即缺乏 T细胞表位而无法直接诱导动物机体产生特异性抗体，故小分子物质被称为半抗原。通过适 当的化学修饰，在半抗原分子结构的某个位置上带上端部为活性基团的连接臂，再与大分 子载体结合，生成半抗原-载体偶联物（即人工抗原），人工抗原可以借助T细胞表位来间 接诱导B细胞的增殖和分化，继而产生特异性抗体。
[0006] 现有技术中还未有金刚烧胺人工半抗原、人工抗原的相关报道。
【发明内容】
[0007] 本发明提供了一种金刚烷胺人工半抗原，该金刚烷胺人工半抗原最大程度地保留 了金刚烷胺的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇。
[0008] -种金刚烷胺人工半抗原，其分子结构式如（I )所示：
[0009]
【权利要求】
1. 一种金刚烷胺人工半抗原，其特征在于，其分子结构式如（I)所示：
2. 如权利要求1所述金刚烷胺人工半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 将金刚烷胺与丁二酸酐按摩尔比1:1. 1?1.5混合，于100?105°C下搅拌反应 16?17h，反应产物经水-二氯甲烷萃取，取有机相，得无色油状产物A; (2) 将无色油状产物A、N-羟基琥珀酰亚胺、1- (3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐 酸盐按摩尔比1:1. 35?1.5:1.35?1.5混合，于20?30°C下搅拌反应18?20h，反应产 物经洗涤、旋蒸后，得无色油状产物B; (3) 将无色油状产物B与对氨基苯甲酸按摩尔比1:1混合，于pH9?10、20?30°C下 搅拌反应3?3. 5h，反应结束后调节pH至5?6、用乙酸乙酯萃取，取有机相，获得如权利 要求1所述的金刚烷胺人工半抗原。
3. -种金刚烷胺人工抗原，其特征在于，其分子结构式如（II)所示：
式（II)中，BGG为牛丙种球蛋白。
4. 如权利要求3所述金刚烷胺人工抗原的制备方法，其特征在于，包括：通过混合酸酐 法使权利要求1所述的金刚烷胺人工半抗原与牛丙种球蛋白结合，获得如权利要求3所述 的金刚烷胺人工抗原。
5. 如权利要求4所述金刚烷胺人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (a) 将所述金刚烷胺人工半抗原、三乙胺、氯甲酸异丁酯按摩尔比1:1?1. 2:1?1. 3 混合，20?30°C下搅拌反应18?19h，反应结束后离心取上清液； (b) 将所述上清液滴加到牛丙种蛋白溶液中，将所得混合液置于3?5°C下静置过夜， 经透析、离心取上清，获得如权利要求3所述的金刚烷胺人工抗原。
6. 如权利要求5所述金刚烷胺人工抗原的制备方法，其特征在于，步骤（b)中，所述牛 丙种蛋白溶液的浓度为5mg/mL，上清液与牛丙种蛋白溶液的体积比为1:5?6。
7. 如权利要求3所述金刚烷胺人工抗原在制备抗金刚烷胺抗体中的应用。
8. -种抗金刚烷胺抗体，其特征在于，是由权利要求3所述金刚烷胺人工抗原经动物 免疫得到的、可与金刚烷胺发生特异性免疫反应的球蛋白。
9. 如权利要求8所述抗金刚烷胺抗体在检测金刚烷胺中的应用。
【文档编号】G01N33/53GK104402753SQ201410652826
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月17日 优先权日:2014年11月17日
【发明者】杨华, 邵越水, 张巧艳, 钱鸣蓉, 汪建妹, 吴俐勤, 肖英平 申请人:浙江省农业科学院, 杭州傲锐生物医药科技有限公司