赛庚啶半抗原、抗原及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及赛庚啶半抗原、抗原、单克隆抗体制 备方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 赛庚陡（Cyproheptadine)化学名称为1-甲基_4_ (5H-二苯并[a, d ]环庚三 烯-5-亚基)哌啶盐酸盐倍半水合物，别名塞庚定、二苯环庚啶、偏痛定，英文别名2, 6-dich Ioro-N-(2-imidazolin-2-yl) aniline。分子式 C21H21N· HCl · 3/2 H20;分子量：350. 89。 赛庚啶为白色或浅黄色结晶粉末，无臭、味微苦。熔点113°C。在甲醇中易溶；在氯仿中溶 解，溶液有乳化现象(若以干燥品溶解，溶液即澄明）；在乙醇中略溶；在水中微溶，水溶液呈 酸性反应；在乙醚中几乎不溶。赛庚啶为人用抗过敏药，对抗体内组胺对血管、支气管平滑 肌的作用，从而消除过敏症状，也可用于改善患者的食欲。赛庚啶是一个典型的Hl受体阻 滞剂，属于抗组胺药，但同时也是5-羟色胺受体拮抗剂，可在下丘脑食欲中枢拮抗5-羟色 胺，这可以解释赛庚啶具有刺激食欲的功能。赛庚啶易吸收，主要代谢物是葡萄糖醛酸苷季 铵物，以及芳环羟基化、N-去甲基化和杂环氧化产物。赛庚啶常见的副作用为轻、中度的嗜 睡、头昏、乏力、口干等，自2005年起已在国内的饲料产品中发现添加，分析原因可能为通 过促进动物食欲以达到增重的目的。食用含有赛庚啶残留的动物源性产品，对人体健康具 有一定的危害性，对儿童的作用更为明显，高浓度可直接引发昏迷、呼吸急促、全身无力等 中毒症状，严重者则直接导致儿童死亡。赛庚啶并不是一种饲料添加剂，世界卫生组织、我 国、美国、欧盟及一些发达国家等都禁止违法使用赛庚啶。2010年12月农业部1519号公告 已明确把赛庚啶列入了《禁止在饲料和动物饮水中使用的物质》清单。
[0003]目前国内外大多采用高效液相色谱法测定，这些方法特异性强、灵敏度高、但是样 品前处理操作步骤繁琐，成本较高，也不适用于大批量样品的筛选检测。免疫化学分析由于 在抗原抗体的定性定量方面独特的优势和操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量 大的优点弥补了理化分析的不足。赛庚啶人工抗原的制备为这一方法的实施奠定了重要基 础。影响免疫化学分析质量的根本因素是抗体的特异性与亲和性，这些性质又决定于免疫 半抗原分子的结构，因此免疫半抗原的分子设计与合成就是产生特异性抗体和建立小分子 兽药残留快速检测技术的最基础和最关键的步骤。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种赛庚啶半抗原、抗原、特异性抗体制备方法及其应用。
[0005] 本发明提供的赛庚啶半抗原，其结构为式I所示：
【主权项】
1. 一种赛庚巧半抗原，为式I所示产物：
2. 式I所示产物的制备方法，包括如下步骤： 将3. 3g赛庚巧，7. 49g的氯碳酸己醋和17mL甲苯中的混合物回流3. 5小时；冷却后， 将反应混合物用盐酸和水洗涂，然后干燥并浓缩；用正己焼处理，得到浅黄色结晶，重结晶， 将残余物固化从己醇中，得到微黄色针状结晶；产物加入50ml水，加入氨氧化裡（一水） 8. 36g，抑试纸检测抑=10W上違温水解反应化W上；用己酸己醋100ml萃取，萃取水解 反应水相一到两次，除去杂质，再用5mol/L的盐酸调pH值到4左右，用己酸己醋萃取，旋干 得到半抗原CHD-0化。
3. -种赛庚巧抗原，是将式I所示产物和载体蛋白偶联得到的偶联物。
4. 权利要求3所述赛庚巧抗原的制备方法，包括如下步骤： (1) 取CHD-0化 31. 7mg溶于 3mlDMF中； (2) 加入ImlO. 01MPBS助溶，加入邸C38mg，N服38mg，室温活化化； (3) 取载体蛋白lOOmg溶于10ml的0. 1M碳酸氨轴溶液中，将活化物在4C冰水浴条件 下，加入到蛋白中，4C揽拌反应过夜； (4)置1L0. 01MPBS中透析8次，得全抗原CHD-0化-BSA; (5) 分装，于-2(TC保存备用。
5. 权利要求3所述赛庚巧抗原在制备赛庚巧特异性抗体中的应用。
6. 应用权利要求3所述赛庚巧抗原制备得到的特异性抗体。
7. 权利要求1所述产物、权利要求3所述赛庚巧抗原、权利要求6所述抗体在检测赛庚 巧中的应用。
8. 应用权利要求1所述产物、权利要求3所述赛庚巧抗原、权利要求6所述特异性抗体 制备得到的酶联免疫检测试剂盒。
9. 权利要求8所述酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，它包括：包被有赛庚巧抗原的酶 标板、酶标抗体工作液、赛庚巧系列标准品、底物显色液、终止液、浓缩复溶液、浓缩洗涂液。
【专利摘要】本发明公开了一种赛庚啶半抗原，相应的人工抗原和单克隆抗体，同时本发明也公开了所述赛庚啶半抗原，相应的人工抗原和单克隆抗体的制备方法及其应用。本发明提供的赛庚啶半抗原是式1所示产物，用式1所示产物与载体蛋白连接可以得到赛庚啶抗原。所述赛庚啶抗原可应用于制备赛庚啶特异性抗体。本发明制备方法简便可行、成本较低，半抗原产率较高。本发明的赛庚啶人工抗原，通过免疫动物可产生了针对赛庚啶的特异性抗体，可用于制备检测赛庚啶残留的酶联免疫检测试剂盒，具有简单、快速、处理样品量大、灵敏度高、特异性强等诸多优点。
【IPC分类】G01N33-577, G01N33-531
【公开号】CN104792989
【申请号】CN201410018901
【发明人】温凯, 王照鹏, 王战辉, 吴小平, 贾良曦, 秦誉, 王进, 苏丽芳, 覃丹凤, 曾江龙, 殷缓缓, 陈银辉
【申请人】北京维德维康生物技术有限公司
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2014年1月16日