一种检测胰岛素的高通量核酸适体传感器及其制备方法与流程

文档序号:12466859阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测胰岛素的高通量核酸适体传感器,其特征在于:在微孔板上固定结合纳米金颗粒,然后加入胰岛素核酸适体,纳米金颗粒与胰岛素核酸适体通过Au-S键结合在微孔板上,同时在纳米金颗粒上固定蔗糖酶及与胰岛素核酸适体部分互补的DNA互补链,胰岛素核酸适体与DNA互补链根据碱基配对原则形成稳定的双链结构,制成DNA互补链/蔗糖酶/纳米金检测探针,将DNA互补链/蔗糖酶/纳米金检测探针固定到胰岛素核酸适体的纳米金微孔板中,得到检测胰岛素的高通量核酸适体传感器。

2.如权利要求1所述的检测胰岛素的高通量核酸适体传感器,其特征在于:所述胰岛素核酸适体的5’端修饰有巯基,序列如5’-SH -(CH2)6-ACA GGG GTG TGG GGA CAG GGG TGT GGG G-3’所示,DNA互补链的5’端修饰有巯基,序列如5’-SH -(CH2)6-ACA GCA TTC AGC GCA TCG G-3’所示。

3.一种如权利要求1所述的检测胰岛素的高通量核酸适体传感器的制备方法,其特征在于:制备步骤如下:

(1)纳米金与微孔板的准备:微孔板在15-17 mol/L HNO3溶液中处理2h,用双蒸水冲洗2-3次后,把80-120μL表面羧基功能化的纳米金溶液加入微孔板中,然后将微孔板置于培养箱中,37℃培育24h,最后用双蒸水冲洗2-3次,制得纳米金微孔板;

(2)蔗糖酶修饰纳米金的准备:把2mg/mL的蔗糖酶和2mg/mL互补链DNA加入到纳米金中制得混合物,于4℃下保存6h,向混合物中加入100μL浓度为10mmol/L PBS缓冲液,将混合物放在振荡培养箱中,37℃下培育16h后,14000rpm离心20min,倒掉离心后的上清液,用10mmol/L PBS缓冲液冲洗掉未结合的蔗糖酶和互补链DNA,剩余的离心底物于1mL 浓度为10mmol/L PBS缓冲液中4℃保存,完成互补链DNA/酶/纳米金探针的制备;

(3)核酸适体的固定:以TCEP为溶剂配制10μmol/L的胰岛素核酸适体溶液,黑暗处理1h激活,取200μL胰岛素核酸适体溶液加入到纳米金微孔板上,于37℃黑暗培育16-24小时,加入50μL巯基乙醇,继续37℃黑暗培育1h,将胰岛素核酸适体固定于纳米金微孔板,最后用50μL浓度为10mmol/L PBS缓冲液冲洗2-4次;

(4)核酸适体传感器的配制:将100μL的DNA/酶/纳米金探针加入到固定有胰岛素核酸适体的纳米金微孔板中,37℃振荡培育2h,并用100μL浓度为10mmol/L PBS缓冲液冲洗2-4次,完成胰岛素核酸适体传感器的配制。

4.一种检测胰岛素的高通量核酸适体传感器与血糖仪结合,作为快速准确检测胰岛素的应用。

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