一种隐血检测层析试纸的制作方法

本发明涉及一种隐血检测层析试纸，免疫胶体金法与化学法相结合，更准确地测定胃液、尿液或粪便中的血红蛋白及转铁蛋白含量，判断消化道是否有出血，可以帮助消化道癌症的早期筛查。

背景技术：

尿液、粪便隐血的检测对于诊断慢性消化道出血以及恶性大肠肿瘤有很重要的价值，尤其胃液隐血的检测有助于诊断胃出血以及筛选早期胃癌，目前常规检查隐血的方法主要为免疫法和化学法两种。

免疫法检测的指标为血红蛋白和转铁蛋白，其中，血红蛋白检测特异性强，敏感度高，但是稳定性差，可能出现假阴性现象。而转铁蛋白检测，敏感度和特异性与血红蛋白检测相当，但稳定性明显高于血红蛋白，可以克服被检标本中的血红蛋白在胃内滞留时间过长而被分解或破坏后出现的假阴性结果，目前国内免疫法以血红蛋白检测较多，很容易造成出血漏诊。

化学法的基本原理是一致的，血细胞被消化后产生血红蛋白，血红蛋白具有卟啉机构，与过氧化酶具有类似的活性。过氧化物在有血红蛋白存在的情况下会被催化而产生新生态氧，新生态氧非常活泼，氧化能力非常强，可使愈创木酯、匹拉米洞、邻联甲苯胺和四甲基联苯胺等色原物质呈色，根据显色结果可判断样品中是否含有隐血，并且呈色的深浅反应了血红蛋白的多少，可以达到半定量，但是缺乏准确性和特异性。目前隐血检测使用的化学法，操作过程中除采集样品滴加到检测试纸(或检测卡)上之外还需要使用至少一种其他检测试剂，如显色液(含过氧化物)或显色剂(含显色试剂)等辅助才能完成检测，操作方法比较繁复，并且检测所使用的试剂瓶等会有污染环境的潜在问题。

应用化学法与两种免疫法同时检测胃液中的转铁蛋白和血红蛋白，对消化道出血性疾病的阳性检出率有显著提高。

技术实现要素：

本发明提出了一种隐血检测层析试纸，通过胶体金双抗体夹心抗原方法同时检测尿液、粪便和胃液中的血红蛋白及转铁蛋白，并用化学法再次检测是否含有血红蛋白，利用两种不同原理进行检测，对结果判断进行双重把关，提高准确性，并对隐血含量进行半定量。

隐血检测层析试纸是由底板、玻璃纤维上样垫、单抗金标垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、化学检测垫组成。玻璃纤维上样垫与单抗金标垫相连，单抗金标垫又与硝酸纤维素膜交叠相连，硝酸纤维素膜上有一个血红蛋白单抗反应圆弧(T)、一个转铁蛋白单抗反应圆弧(T)和一个羊抗鼠多克隆抗体控制圆弧(C)。吸水纸与硝酸纤维素膜相连，化学检测垫占据试纸的部分区域，并直接与玻璃纤维上样垫交叠连接。

所述化学检测垫上均布有选自以下物质中的一种或几种构成：愈创木酯、邻联甲苯胺、匹拉米洞、四甲基联苯胺以及过氧化物，但优选四甲基联苯胺和过氧化物，其次是匹拉米洞和过氧化物。化学检测垫可以由一块或多块组成，可以用一种或多种色原物质及过氧化物，提高准确性。化学检测垫除却与玻璃纤维上样垫相连的边缘，其他边缘部位都用乳胶密封，以免化学反应与免疫反应相互干扰。

所设计的隐血检测层析试纸有两种结构，第一种结构是由外而内层析的，这种结构需要向外延伸出两个引脚滴加样品，但最下层的底板材质柔软，可以弯折。第二种结构是由内而外层析的。

本发明所提供的隐血检测层析试纸主要是用于隐血检测胶囊的在体胃液隐血检测，但也可以用于体外，检测尿液、粪便以及胃液中的隐血。

通过上述结构，本发明所提供的隐血检测层析试纸具有这样的有益效果：即特异性强，灵敏度高，稳定性强，易储存，无须另外再滴加显色液，一步检测完毕，使用范围广，结果准确易读，且能够半定量。

附图说明

图1为隐血检测层析试纸的第一种结构图。

图2为图1的横向剖面图。

图3为隐血检测层析试纸的第二种结构图。

图4为图3的横向剖面图。

图5为图3的纵向剖面图。

1、玻璃纤维上样垫，2、单抗金标垫，3、硝酸纤维素膜，4、血红蛋白单抗反应圆弧，5、转铁蛋白单抗反应圆弧，6、羊抗鼠多克隆抗体控制圆弧，7、化学检测垫，8、吸水纸，9、底板

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明的具体实施方式作进一步描述，以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方法，而不能以此来限制本发明的保护范围。

如图1所示，本发明具体实施的技术方法是：用于胃液隐血检测胶囊中时，将试纸的两脚沿着圆形试纸的外边缘弯折，置于胃液隐血检测胶囊中，有反应显色变化的那一面朝向镜头，以便拍摄图像。胃液通过隐血检测胶囊一端的小孔进入胶囊后首先浸湿试纸的两脚，由于毛细作用，胃液顺着试纸由外而内向中心点移动。当胃液中带有血红蛋白、转铁蛋白时，试纸上的两条反应圆弧和控制圆弧都会变红，并且化学检测垫也会出现呈色反应，可以根据化学呈色的深浅进行隐血半定量，此结果表示为阳性；若胃液中不存在隐血，则试纸上只有控制圆弧变红，其他都没有颜色反应，此结果表示为阴性；若控制环未变红，则表示试纸过期或操作不当，需要重新检测。用于体外时，只需将样品分别滴加在试纸的两个玻璃纤维上样垫上，等待反应结果，结果的判断方法同上。

图3是隐血检测层析试纸的第二种结构，层析方向是由内而外的，用于胃液隐血检测胶囊中时，需要有一种特定的连接物质将胶囊一侧的通孔与试纸中间的上样垫相连，这样胃液将从中间向外围移动。不过此试纸中的化学检测垫有左右两块，可以用两种不同的色原物质，这样结果更精确，并且只有与上样垫相连接的部位不用乳胶密封，其他部位都要用乳胶密封，与硝酸纤维素膜上的抗体隔离。当胃液中带有血红蛋白、转铁蛋白时，试纸上的两条反应环和控制环都会变红，并且两侧的化学检测垫也会出现呈色反应，可以根据化学呈色的深浅进行隐血半定量，此结果表示为阳性；若胃液中不存在隐血，则试纸上只有控制环变红，此结果表示为阴性；若控制环未变红，则表示试纸过期或操作不当，需要重新检测。用于体外时，只需将样品滴加在试纸中间的玻璃纤维上样垫上，等待反应结果，结果的判断方法同上。