一种检测AGEs的胶乳免疫比浊试剂盒的制作方法

文档序号:14732152发布日期:2018-06-19 19:43阅读:127来源:国知局
本发明涉及一种体外诊断试剂领域,具体涉及一种AGEs检测试剂,还涉及使用此检测试剂的检测方法。
背景技术
:AGEs是以蛋白质、脂肪及核酸的氨基和还原糖发生非酶催化反应产生稳定的、不可逆的化合物,同时它能够和人体的组织和细胞相结合并造成严重的破坏。它在生物体中的来源,一方面多量的糖会和蛋白质发生此反应,另一方面进食的食物中存在该物质被摄入体内。由于它的积聚会引发糖尿病等各种并发症,如糖尿病肾病、阿尔兹海默症、动脉粥样硬化、白内障等症,影响全身各系统,因此对其进行快捷、简单并准确的检验在临床诊断中具有重要意义。目前它的检测方法有放射受体分析法、放射免疫法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法等,但是这些方法操作过程繁琐,误差大,消耗时间长,自动化程度低,费用高,灵敏度低,对于临床非常不利,一般只用来定性检测。流行病学和临床研究表明,AGEs与多种疾病的密切相关,现今对其治病机制研究已经取得了很大的进展,同时相关靶点的药物也在不断开发,所以对其进行精确的诊断成为了重要先导步骤。技术实现要素:本发明的目的是提供一种用于检测AGEs的试剂以及使用该试剂检测AGEs含量的方法。采用胶乳免疫比浊法的方式检测血清中AGEs的含量,包括游离态的AGEs和结合态的AGEs,线性好,灵敏度高,特异性好、操作简单、方便快速等优点。它能够作为一项新的临床指标,AGEs检测对阐明这些疾病的发病机制和判定治疗效果有一定价值。本发明采用以下步骤:一种AGEs检测试剂,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1和试剂R2的组成如下:试剂R1中含有试剂R2中含有本发明的优点:1.采用的表面活性剂为月桂酸钾和聚乙二醇6000的用量比例为2∶1,显著改善了连接抗体微球的稳定性。2.采用的被连接胶乳微球的粒径分别为300nm,100nm,50nm,并且三种胶乳微球的所占比例为1∶3∶2,提升了检测的线性和灵敏度。3.采用的稳定剂组合为蔗糖、明胶、甘油和牛血清白蛋白,增加了试剂的稳定性。4.试剂的稳定性好,准确度高,使用方便,满足临床需要。附图说明:图1为实施例1试剂检测结果与对照方法检测结果相关分析图,采用BS-420全自动生化分析仪,对40个血清样本进行测定,并对测定值进行相关分析。其中相关系数:r2=0.999,线性方程为:y=1.011x-0.124。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明:实施例1AGEs检测试剂,包括试剂R1和试剂R2:试剂R1中含有试剂R2中含有本实施例描述的AGEs检测试剂,使用双试剂全自动生化分析仪,例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪,选用终点法进行测定。将R1和R2放置所设置好的位置上,在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本,操作如下:表1操作程序结果计算:以测定管ΔA,根据校准曲线可求得AGEs含量。实施例2相关性试验:利用实施例1中试剂,与荧光光谱法作对比,同时检测了40例临床血清样本,检测结果表2所示,结果证明二者具有很好的相关性。表2实施例1试剂与荧光光谱法检测AGEs含量的方法对比检测结果(ng/mL)实施例3本实例只改变胶乳微球的粒径大小和所占比重,选用同一个样本检测,实施例3与实施例1中线性关系如表3所示,选取标准品浓度为30ng/mL,结果显示实施例1试剂的线性较实施例3好。表3线性关系结果序号实施例1试剂实施例3试剂00013.63.74210.27.51318.915.2429.329.3相关系数0.9960.929分析灵敏度验证试验:用实施例1、实施例3和荧光光谱法(对比方法)检测已知浓度的样本,记录吸光度差值。检测结果如表4所示。表4分析灵敏度试验结果综合上述结果可知,实施例1中胶乳微球粒径大小和所占的比例,该试剂有较好的灵敏度和线性。当前第1页1 2 3 
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