1.一种电化学生物传感器,其特征在于,其由包括以下步骤的方法制备而成:
(1)制备基于多腺嘌呤的DNA捕获探针,所述DNA捕获探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.3、SEQ ID No.4或SEQ ID No.5所示;
(2)将步骤(1)所得的基于多腺嘌呤的DNA捕获探针滴加到电极上,反应,得组装电极;所述基于多腺嘌呤的DNA捕获探针滴加到电极上时的组装密度为0.1μM;所述的电极为金电极;
(3)用巯基己醇对步骤(2)所得的组装电极的空位封闭,得封闭的电极。
2.如权利要求1所述的电化学生物传感器,其特征在于,
步骤(1)中所述的DNA捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示;
或者,步骤(2)所述反应的温度为20~40℃;
或者,步骤(2)所述组装的时间大于12小时;
或者,步骤(2)所述电极由包括以下步骤的方法制得:经物理打磨、硫酸电化学清洗,再用超纯水彻底冲洗电极表面,然后用N2吹干;
或者,步骤(3)所述巯基己醇的浓度为0.01~1mM;
或者,步骤(3)所述空位封闭的时间为5~60分钟;
或者,步骤(3)所述空位封闭的温度为25℃。
3.如权利要求2所述的电化学生物传感器,其特征在于,步骤(2)所述反应的温度为25℃。
4.如权利要求2所述的电化学生物传感器,其特征在于,步骤(3)所述巯基己醇的浓度为0.1mM。
5.如权利要求2所述的电化学生物传感器,其特征在于,步骤(3)所述空位封闭的时间为30分钟。
6.一种利用如权利要求1~5任一项所述的电化学生物传感器检测待测DNA的方法,其包括以下的步骤:
(Ⅰ)将待测DNA和核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.7所示且在3’端连接生物素的信号探针预杂交,得预杂交物A;所述待测DNA包含核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO. 8所示的序列;
(Ⅱ)将步骤(Ⅰ)所得的预杂交物A与如权利要求2~5任一项所述的电化学生物传感器的电极上的DNA捕获探针杂交,得杂交的电极;
(Ⅲ)向步骤(Ⅱ)所得的杂交的电极上滴加亲和素-辣根过氧化物酶后孵化;加入底物TMB,进行检测分析。
7.如权利要求6所述的检测待测DNA的方法,其特征在于,
步骤(Ⅰ)所述待测DNA的浓度为0~1000pM;
或者,步骤(Ⅰ)所述预杂交在60~100℃保持1~10分钟,然后20~40℃放置5~60分钟;所述预杂交在缓冲液下进行;
或者,步骤(Ⅱ)所述的杂交在25~45℃杂交30~120分钟;
或者,步骤(Ⅲ)所述的亲和素-辣根过氧化酶为1000倍稀释的亲和素-辣根过氧化酶;
或者,步骤(Ⅲ)所述1000倍稀释的亲和素-辣根过氧化酶的添加量为1~5µL;
或者,步骤(Ⅲ)所述孵化的温度为25℃;所述孵化的时间为15分钟。
8.如权利要求7所述的检测待测DNA的方法,其特征在于,
所述预杂交的温度为80℃;所述预杂交的时间为5分钟;所述放置的时间为20分钟;所述放置的温度为25℃;
或者,所述缓冲液为包含1M NaCl 的10mM TE;
或者,所述杂交的温度为37℃;
或者,所述杂交的时间为60分钟;
或者,所述杂交完成后还包括清洗电极的步骤;
或者,所述1000倍稀释的亲和素-辣根过氧化酶的添加量为3µL。
9.如权利要求8所述的检测待测DNA的方法,其特征在于,所述TE包括10mM Tris-HCl和1mM EDTA,pH7.0。
10.如权利要求8所述的检测待测DNA的方法,其特征在于,所述清洗所用的清洗液为包含1M NaCl 的10mM TE缓冲液;所述TE缓冲液包括10mM Tris-HCl和1mM EDTA,pH7.0。
11.如权利要求6所述的检测待测DNA的方法,其特征在于,步骤(Ⅰ)所述信号探针的浓度为100nM。