本发明涉及饲料检测技术领域，具体是一种检测饲料中新霉素的检测卡。
背景技术：
新霉素是一种广谱抗生素，常用于动物各种传染病的治疗，对于多种病原菌有较强的抑制作用，对革兰氏阳性和阴性菌皆有效。新霉素存在严重的副作用，具有肾毒性和内耳毒性，它对内耳的伤害，往往是不可逆转的，因此动物食品中的新霉素残留对人类的健康构成巨大威胁。特别是近年来，由于畜牧业盲目滥用新霉素现象日益严重，造成畜产品中新霉素残留增加，影响人类食品安全，所以新霉素残留问题已经引起社会的高度重视。检测动物源食品中新霉素的含量显得更直接、方便，且可实现宰前检测，为及时排除食品安全隐患，保障食品的质量安全，特开展本试验方法研究。现有技术对于新霉素的检测主要是高效液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱法等检测方法，但这些技术的缺陷明显：设备昂贵、操作复杂、难以推广。所以，建立一种简单、有效、适合基层使用的测定方法是极其必要的。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种检测时间短、灵敏度高、特异型好、结果准确的检测饲料中新霉素的检测卡，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种检测饲料中新霉素的检测卡，包括PVC板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、保护膜以及标签膜，硝酸纤维素膜上包被新霉素半抗原-卵清蛋白偶联物，胶体金垫是将胶体金标记的新霉素单克隆抗体冻干到玻璃纤维素膜上；其中，胶体金标记的新霉素单克隆抗体的制备过程是：用0.25mol/L K2CO3调节30-50mL胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器100-300r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液，反应8-20min；逐滴加入4mL 10%BSA，继续搅拌反应8-20min；金标抗体溶液常温1000-5000r/min离心5-20min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；将制得的上清溶液0-5℃，8000-15000r/min离心10-30min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制得胶体金标记的新霉素单克隆抗体。
作为本发明进一步的方案：胶体金垫是将胶体金标记的新霉素单克隆抗体以3-10µL/cm的浓度均匀冻干到玻璃纤维素膜上。
作为本发明进一步的方案：样品垫需进行以下前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；其中样品垫处理液是由0.8-1.5g小牛血清蛋白和0.5-1.5g氯化钠，用含有0.3-1%Triton X-100的0.01mol/L PBS定容至100mL。
作为本发明进一步的方案：检测卡在使用时，对饲料的处理方法是：准确称取2±0.05g均质后的饲料样品于50mL离心管中；加入10mL 0.03-0.1M HCl，充分涡动1-5min；加入10mL 0.03-0.1M NaOH溶液调pH值至7-8充分涡动20-40s，静置3-10min，取3-4滴上清液进行检测。
作为本发明进一步的方案：检测卡在使用时，对饲料的处理方法是：准确称取2±0.05g均质后的饲料样品于50mL离心管中；加入10mL 0.05M HCl，充分涡动1min；加入10mL 0.05M NaOH溶液调pH值至7-8充分涡动30s，静置5min，取3-4滴上清液进行检测。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明检测效率高，检测时间短、灵敏度高、特异型好、方便、快捷，结果准确。与新霉素的其它检测方法相比，大大缩短检测时间，无需进行浸样等待，可连续检测多个样本，只需将可检测样品直接点入检测卡中计时5-10min即可进行结果判定。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明实施例中，一种检测饲料中新霉素的检测卡，包括PVC板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、保护膜以及标签膜，硝酸纤维素膜上包被新霉素半抗原-卵清蛋白偶联物，胶体金垫是将胶体金标记的新霉素单克隆抗体以3µL/cm的浓度均匀冻干到玻璃纤维素膜上。其中，胶体金标记的新霉素单克隆抗体的制备过程是：用0.25mol/L K2CO3调节30mL胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器100r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液，反应8min；逐滴加入4mL 10%BSA，继续搅拌反应8min；金标抗体溶液常温1000r/min离心5min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；将制得的上清溶液0℃，8000r/min离心10min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制得胶体金标记的新霉素单克隆抗体。样品垫需要进行以下前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；其中样品垫处理液是由0.8g小牛血清蛋白和0.5g氯化钠，用含有0.3%Triton X-100的0.01mol/L PBS定容至100mL。
所述检测卡在使用时，对饲料的处理方法是：准确称取2±0.05g均质后的饲料样品于50mL离心管中；加入10mL 0.03M HCl，充分涡动1min；加入10mL 0.03M NaOH溶液调pH值至7.1充分涡动20s，静置3min，取3滴上清液进行检测。
实施例2
本发明实施例中，一种检测饲料中新霉素的检测卡，包括PVC板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、保护膜以及标签膜，硝酸纤维素膜上包被新霉素半抗原-卵清蛋白偶联物，胶体金垫是将胶体金标记的新霉素单克隆抗体以10µL/cm的浓度均匀冻干到玻璃纤维素膜上。其中，胶体金标记的新霉素单克隆抗体的制备过程是：用0.25mol/L K2CO3调节50mL胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器300r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液，反应20min；逐滴加入4mL 10%BSA，继续搅拌反应20min；金标抗体溶液常温5000r/min离心20min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；将制得的上清溶液5℃，5000r/min离心30min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制得胶体金标记的新霉素单克隆抗体。样品垫需要进行以下前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；其中样品垫处理液是由1.5g小牛血清蛋白和1.5g氯化钠，用含有1%Triton X-100的0.01mol/L PBS定容至100mL。
所述检测卡在使用时，对饲料的处理方法是：准确称取2±0.05g均质后的饲料样品于50mL离心管中；加入10mL 0.1M HCl，充分涡动5min；加入10mL 0.1M NaOH溶液调pH值至7.8充分涡动40s，静置10min，取4滴上清液进行检测。
实施例3
本发明实施例中，一种检测饲料中新霉素的检测卡，包括PVC板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、保护膜以及标签膜，硝酸纤维素膜上包被新霉素半抗原-卵清蛋白偶联物，胶体金垫是将胶体金标记的新霉素单克隆抗体以5µL/cm的浓度均匀冻干到玻璃纤维素膜上。其中，胶体金标记的新霉素单克隆抗体的制备过程是：用0.25mol/L K2CO3调节40mL胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器250r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液，反应10min；逐滴加入4mL 10%BSA，继续搅拌反应10min；金标抗体溶液常温3000r/min离心10min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；将制得的上清溶液4℃，12000r/min离心20min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制得胶体金标记的新霉素单克隆抗体。样品垫需要进行以下前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；其中样品垫处理液是由1g小牛血清蛋白和1g氯化钠，用含有0.5%Triton X-100的0.01mol/L PBS定容至100mL。
所述检测卡在使用时，对饲料的处理方法是：准确称取2±0.05g均质后的饲料样品于50mL离心管中；加入10mL 0.05M HCl，充分涡动1min；加入10mL 0.05M NaOH溶液调pH值至7.5充分涡动30s，静置5min，取3滴上清液进行检测。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。