本发明属于临床生物化学酶学检验及质量控制领域，特别涉及甜菜碱作为天门冬氨酸氨基转移酶稳定剂的应用。
背景技术：
血清天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferas，AST)是临床生化最常用的肝功能检测项目，在肝病防治中起了积极作用。为保证检测结果的准确性，AST标准物质、校准品、正确度控制物起着重要作用，而这些物质中AST酶活性的稳定性就成为重点。但AST的活性因受时间和贮存温度等多种因素的影响会发生明显变化，酶活力保存时间较短。目前，国内外比较常用的AST的稳定剂多为糖醇类如海藻糖等。但这些稳定剂的添加会使检测系统产生不同程度的基体效应((matrix effect)，从而影响检测结果。甜菜碱(betaine)又名三甲基甘氨酸，化学名称为三甲氨基乙内酯,作为一种渗透剂(osmolyte)在自然界中广泛存在。Stefan Knapp等人(Stefan K，Extremophiles[J]，1999)的研究表明甜菜碱能影响RNaseA的去折叠热动力学参数从而稳定蛋白酶的天然折叠状态，Dominic Lambert等(Dominic Lambert，J.Mol.Biol[J],2007)研究发现甜菜碱等渗透剂能稳定RNA的二级与三级结构，并稳定RNA－Mg2+的相互作用。
目前，国内各个公司提供的检测试剂盒从试剂组成、血清和试剂的用量比例、单双试剂、检测程序等都会有所不同，造成病人样品检测结果的不一致，给疾病的诊断、治疗、疗效观察、预防、科研等工作带来了不利的影响。为了使酶测定结果在方法间，实验室间有可比性，消除参考范围的多重混乱，以利于临床应用，开展酶测定的标准化工作势在必行。在AST项目的标准化工作中，AST的标准物质、校准品、正确度控制物起着重要作用，而国家二级标准物质及正确度控制品均以采用与病人血清具互换性的人混合血清制备而成，同时由于商业校准品在检测体系中基体效应的存在，目前公认人混合血清才是最好的校准品。由于人血清中AST酶活性的不稳定，给人混合血清的运输和保存形成了极大的不便。找到一种能稳定人血清中AST酶活性浓度，又对AST各检测系统无基体效应的稳定剂是解决AST标准化工作的关键。本发明的目的是提供甜菜碱作为天门冬氨酸氨基转移酶稳定剂的应用。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种稳定血清AST酶活力的稳定剂甜菜碱，即甜菜碱作为天门冬氨酸氨基转移酶稳定剂的应用。本发明的特征在于：所述的应用为甜菜碱作为稳定剂稳定血清天门冬氨酸氨基转移酶酶活力。
所述的应用中甜菜碱在血清中的添加浓度为0.8-1.0mol/L。
甜菜碱对人血清中AST酶活力有较好的稳定作用，25℃添加甜菜碱的血清酶活力可稳定7天，这样的稳定效果可很好满足在常温下短期运输血清的需要；4℃添加甜菜碱的血清酶活力可稳定24天、-20℃添加甜菜碱的的血清酶活力可稳定24个月，可满足-20℃长期保存的需要。
血清中的添加剂对各检测系统会产生不同程度的基体效应(matrix effect),但基体效应有绝对性也有其相对性，只要经方法学比较认可某基体效应可被忽略不计或由基体效应对某检测系统引入的误差在可接受水平即可认为“无”基体效应。在临床常用的各检测体系中进行实验，添加了本发明提供的稳定剂的混合血清在各检测体系中无明显基体效应。
本发明所提供的甜菜碱稳定剂有很好的稳定效果，尤其是-20度的长期稳定作用，且其在常用的检测系统中未见明显基体效应，适合用于标准物质、校准品、正确度控制物的制备，混合血清中添加入0.8-1.0mol/L的甜菜碱，从而解决临床AST检测标准化工作的准确性问题。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
稳定实验
先配制5mol/L的甜菜碱贮存液；将收集的血清进行混合得到原混合血清，将部分混合血清中加入5mol/L的甜菜碱贮存液，使得添加的稳定剂甜菜碱终浓度为0.8和1mol/L，得到添加甜菜碱的血清；原混合血清与添加甜菜碱的血清分别用0.22um的滤器过滤，将三种血清以每管300ul分装入EP管并用parafilm膜封管，原血清为对照血清。分装的血清管分别于25℃室温放置1-4d,7d及14d,2-8℃冷藏7d,14d,24d及32d,于-20℃冷冻监测24m。Beckman DXC600自动生化分析仪及其配套试剂分别检测其AST酶活力，每个检测三次求均值。
以95％的可信区间作为酶活力(A％)稳定的判断标准，即酶活力为100±5％为酶活力稳定。结果显示，25℃添加甜菜碱的血清酶活性可稳定7天,对照血清只能稳定4天；4℃添加甜菜碱的血清酶活性可稳定24天,对照血清酶活性只可稳定14天；-20℃添加甜菜碱的血清可稳定至少24个月,对照血清1个月后酶活性已降至90％。见表1。
表1甜菜碱在不同温度对AST酶活力的稳定作用
注：T表示＂温度＂，t表示＂时间＂。
实施例2
基体效应实验
配制5mol/L的甜菜碱贮存液；将收集的血清进行混合得到原混合血清，将部分混合血清与甜菜碱贮存液按4：1混合，使得添加的稳定剂甜菜碱终浓度为1mol/L，同时部分混合血清与生理盐水(0.9％NaCl)按4：1混合为生理盐水稀释对照样品；三种血清样品分别用0.22um的滤器过滤，每管500ul分装。三种血清样品用冷链运输(2-8℃)，专人同时发放给上海32家临床实验室进行检测，32家临床实验室涉及12种AST的检测试剂，共14个检测系统，覆盖上海临床检测实验室AST所有常用检测系统。
回收32家实验室的三种血清样品的检测结果，对结果进行均值、变异系数统计，并根据混合血清原液样品的结果计算出稀释理论值。结果显示，添加甜菜碱样品、生理盐水稀释样品的结果是均值一致，与稀释理论值无明显偏差；添加甜菜碱样品的变异情况与混合血清原液样品及生理盐水稀释样品的结果变异情况一致，均在5％左右。说明，添加甜菜碱的混合血清样品在AST常用临床检测系统中并无明显基体效应存在。具体结果见表2。
表2添加甜菜碱样品在各检测系统中的基体效应