液相色谱‑串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法及结直肠癌诊断试剂盒与流程

文档序号:12713476阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法,其特征在于:包括以下步骤:

1)将50~110mg组织样本在液氮中研磨成粉,将研磨得到的组织粉末用含有0.1%2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的冰甲醇均质后进行离心,取离心得到的上清液;

2)向15~20μL上清液中加入亚油酸同位素内标,放置25~35min后离心,将离心得到的上清液经氮气吹干后用50~60μL正丁醇于60~65℃衍生处理20~30min,然后氮气吹干,用100~150μL流动相重新分散溶解,得到待上样检测样品;

3)对待上样检测样品利用液相色谱-串联质谱法进行分析,得到组织样本中亚油酸的含量。

2.根据权利要求1所述一种液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法,其特征在于:所述组织样本由肠道活检得到。

3.根据权利要求1所述一种液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法,其特征在于:所述冰甲醇是指0~4℃预冷的甲醇。

4.根据权利要求1所述一种液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法,其特征在于:所述液相色谱的工作条件包括:流动相是将0.6~1mL 50%的乙酸水溶液与1000mL乙腈水溶液混合而制成的,所述乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为(7~8):(2~3);流动相采用梯度流速,且初始流速为240μL/min;进样量为18~25μL。

5.根据权利要求1所述一种液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法,其特征在于:所述质谱的工作条件包括:离子源温度为350~370℃;每次转变驻留时间为200~220ms;雾化气为0.3MPa,辅助气为0.4MPa,气帘气为0.25MPa;分析模式为母离子扫描,目标物亚油酸的母离子扫描范围为350~500m/z,子离子为85.1m/z。

6.一种结直肠癌诊断试剂盒,其特征在于:该试剂盒包括用于提取组织液的试剂以及用于制备液相色谱-串联质谱法所需样品的预处理试剂和流动相,所述用于提取组织液的试剂包括2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚以及甲醇,所述预处理试剂包括亚油酸同位素内标以及衍生试剂正丁醇。

7.根据权利要求6所述一种结直肠癌诊断试剂盒,其特征在于:所述流动相是将0.6~1mL 50%的乙酸水溶液与1000mL乙腈水溶液混合而制成的,所述乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为(7~8):(2~3)。

8.根据权利要求6所述一种结直肠癌诊断试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括用于实时定量PCR检测组织样本中FADS1、FADS2、ELOVL2或ELOVL5基因表达量的对应引物对P1、P2、P3或P4。

9.根据权利要求8所述一种结直肠癌诊断试剂盒,其特征在于:

所述引物对P1为:

上游引物FADS1F:5`-GTCCGCTTCTTCCTCACTTATG-3`

下游引物FADS1R:5`-GCTTTCCAGGAACCTGACTATG-3`;

所述引物对P2为:

上游引物FADS2F:5`-CATGACCATGATCGTCCATAAGA-3`

下游引物FADS2R:5`-GATGCCGTAGAAAGGGATGTAG-3`;

所述引物对P3为:

上游引物ELOVL2F:5`-CCCTTCGGTTGTCTCATCTTC-3`

下游引物ELOVL2R:5`-CAGGTGGCTCTTGCATATCTT-3`;

所述引物对P4为:

上游引物ELOVL5F:5`-TCCCTCTTGGTTGGTTGTATTT-3`

下游引物ELOVL5R:5`-CCTTCAGGTGGTCTTTCCTTC-3`。

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