气相色谱法分离检测阿立哌唑有关物质的方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及气相色谱法分离测定阿立哌唑有关物质二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的方法。

背景技术：

阿立哌唑是一种新型的非典型抗精神分裂症药物，对da能神经系统具有双向调节作用，是da递质的稳定剂。与d2、d3、5-ht1a和5-ht2a受体有很高的亲和力。通过对d2和5-ht1a受体的部分激动作用及对5-ht2a受体的拮抗作用来产生抗精神分裂症作用。阿立哌唑对精神分裂症的阳性和阴性症状均有明显疗效，也能改善伴发的情感症状，降低精神分裂症的复发率。阿立哌唑化学名为：7-{4-[4-(2，3-二氯苯基)-l-哌嗪基]丁氧基}-3，4-二氢-2(1h)-喹啉酮，分子式为c23h27n3o2cl2，结构式为：

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药品在临床使用中产生的不良反应除了与药品本身的药理活性有关，有时与药品中存在的杂质也有很大关系，为保证药品的质量与安全性，注册申报的药品要求对其工艺过程中引入的杂质进行研究和有效控制。合成阿立哌唑工艺中引入的有关物质有二（2-氯乙基）胺盐酸盐，其分子式为c4h10cl3n，结构式为：

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1,4-二溴丁烷的分子式为c4h8br2，结构式为：

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选择合适的分析方法，准确地分离和测定阿立哌唑中有关物质二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷，对提高阿立哌唑质量、保证用药安全具有重要的意义。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种分离检测合成阿立哌唑工艺中引入的有机杂质二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的方法，从而达到对阿立哌唑纯度的有效控制，保证阿立哌唑的质量及用药安全性。

本发明所述的一种分离、测定阿立哌唑有关物质的方法，是采用气相色谱分析技术，选用合适的溶剂将样品溶解，根据待分析物质的结构及理化性质，选用甲基聚硅氧烷类色谱柱和氢火焰离子化检测器。

上述所说的溶剂可以为乙醇、甲醇、二氯甲烷或二甲基亚砜中的一种或几种。

上述所说的色谱柱选自agilent、supelco、phenomenex或restek等品牌。

上述所说的色谱柱为中等级性聚硅氧烷类毛细管色谱柱。

本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：

1）取阿立哌唑适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含阿立哌唑100mg的溶液，作为供试品溶液；另取二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷各5μg的溶液，作为对照品溶液；

2）设置进样口温度为200~250℃，载气流速为1.0~3.5ml/min，程序升温法，升温程序为初始温度135°c，恒温1~3min，以每分钟8~15°c的升温速率至160°c，恒温2~5min，检测器温度为250~300℃，分流比为2:1~10:1；

3）取1）中供试品溶液和对照品溶液各1～3μl，按2）的色谱条件，注入气相色谱仪，采用外标法计算阿立哌唑中二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的含量。

其中：气相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的气相色谱仪为岛津（2010plus）气相色谱仪；

检测器：氢火焰离子化检测器；

色谱柱：zb-50毛细管色谱柱（60m×0.32mm，0.50μm）；

进样口温度：200℃；

检测器温度：250℃；

载气（氮气）流速：3.0ml/min；

分流比：2:1；

进样体积：1μl。

柱箱升温程序：

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本发明采用气相色谱法，选用甲基聚硅氧烷类中等极性毛细管色谱柱（60m×0.32mm，0.50μm），能快速有效地分离测定阿立哌唑中二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷，解决了合成阿立哌唑工艺中引入的有关物质二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的分离测定问题，从而达到对阿立哌唑纯度的有效控制。结果见附图1~6。

附图说明

图1：实施例1时溶剂（无水乙醇）的气相色谱图；

图2：实施例1时阿立哌唑的气相色谱图；

图3：实施例1时二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的气相色谱图；

图4：实施例1时加入二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的阿立哌唑样品气相色谱图；

图5：实施例2时加入二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的阿立哌唑样品的气相色谱图；

图6：实施例3时加入二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的阿立哌唑样品的气相色谱图。

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。以下通过实例形式，对本发明涉及的阿立哌唑有关物质检测方法作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

仪器与条件

色谱仪：岛津2010plus气相色谱仪；

检测器：氢火焰离子化检测器；

色谱柱：zb-50毛细管色谱柱（60m×0.32mm，0.50μm）；

进样口温度：200℃；

检测器温度：250℃；

载气（氮气）流速：3.0ml/min；

分流比：2:1；

进样体积：1μl。

柱箱升温程序：

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实验步骤

取阿立哌唑适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含阿立哌唑100mg的溶液，作为阿立哌唑样品溶液；取二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷各5μg的溶液，作为对照品溶液；另取无水乙醇作为空白溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的含量。结果见附图1~4，图1为空白溶液色谱图；图2为阿立哌唑样品溶液色谱图；图3中保留时间4.508min的色谱峰为二（2-氯乙基）胺盐酸盐，保留时间4.794min的色谱峰为1,4-二溴丁烷；图4为加入二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的阿立哌唑样品气相色谱图。图1~图4表明：本发明提供的方法能快速有效地分离测定阿立哌唑中二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷，并可以准确进行定量检测，从而达到对阿立哌唑纯度和质量的有效控制。

实施例2

仪器与条件

色谱仪：岛津2010plus气相色谱仪；

检测器：氢火焰离子化检测器；

色谱柱：zb-50毛细管色谱柱（60m×0.32mm，0.50μm）；

进样口温度：205℃；

检测器温度：250℃；

载气（氮气）流速：3.0ml/min；

分流比：2:1；

进样体积：1μl。

柱箱升温程序：

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实验步骤

取二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含有二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷各5μg的溶液，作为对照品溶液；另取无水乙醇作为空白溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。结果见附图5，图5中保留时间4.502min的色谱峰为二（2-氯乙基）胺盐酸盐，保留时间4.786min的色谱峰为1,4-二溴丁烷。

实施例3

仪器与条件

色谱仪：岛津2010plus气相色谱仪；

检测器：氢火焰离子化检测器；

色谱柱：zb-50毛细管色谱柱（60m×0.32mm，0.50μm）；

进样口温度：200℃；

检测器温度：250℃；

载气（氮气）流速：3.2ml/min；

分流比：2:1；

进样体积：1μl。

柱箱升温程序：

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实验步骤

取二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含有二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷各5μg的溶液，作为对照品溶液；另取无水乙醇作为空白溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。结果见附图6，图6中保留时间4.405min的色谱峰为二（2-氯乙基）胺盐酸盐，保留时间4.684min的色谱峰为1,4-二溴丁烷。

本发明对所述阿立哌唑有关物质二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷分析方法的以下项目进行了验证：

系统适用性实验

取阿立哌唑及二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷适量，分别用无水乙醇溶解样品，配制成含阿立哌唑、二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的供试品溶液。按实施例1的色谱条件进行气相色谱分析，记录色谱图。由图1~图4可知，在此条件下二（2-氯乙基）胺盐酸盐及1,4-二溴丁烷与相邻峰之间分离度良好，溶剂和阿立哌唑其他杂质均不干扰二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷的测定，故说明该分析方法专属性良好。

进样重复性试验

取阿立哌唑有关物质二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷供试品溶液，按实施例1的色谱条件，重复进样6次，考察方法的重复性。由结果可得，该方法进样重复性良好。

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定量限、检测限

取阿立哌唑的有关物质二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷适量，精密称定，分别用无水乙醇溶解样品，配制成一定响应值的供试品溶液，再精密量取供试品溶液适量，逐级稀释，按实施例1的色谱条件进样考察。二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷定量限和检测限数据如下表所示：

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线性

取阿立哌唑有关物质二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷适量，精密称定，分别用无水乙醇溶解，配制成二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷贮备液；精密量取二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷贮备液，分别稀释成浓度为2.5µg/ml、4.0µg/ml、5.0µg/ml、6.0µg/ml和7.5µg/ml的二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷供试品溶液，将各溶液按实施例1的色谱条件进样考察，结果见下表：

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准确度

取阿立哌唑有关物质二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷适量，精密称定，分别用无水乙醇溶解，配制成二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷贮备液；精密量取二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷贮备液适量，用无水乙醇稀释，分别配成4.0µg/ml、5.0µg/ml、6.0µg/ml的准确度试验溶液。取阿立哌唑约100mg，分别加上述不同浓度的准确度试验溶液1ml溶解，作为不同浓度水平的供试品溶液，各浓度水平供试品溶液平行配制3份；另取阿立哌唑约100mg，加入1ml无水乙醇溶解，作为空白样品溶液。将上述溶液按实施例1的色谱条件进样考察，图4为5.0µg/ml供试品溶液（即阿立哌唑中加入二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷）的色谱图，保留时间为4.504min的色谱峰为二（2-氯乙基）胺盐酸盐，保留时间为4.788min的色谱峰为1,4-二溴丁烷，进样结果见下表：

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耐用性

通过微调进样口温度、载气流速、检测器温度和色谱柱品牌等色谱条件，我们进一步考察了方法的耐用性。结果发现，该方法对不同品牌的色谱柱、进样口温度变化±5℃、载气流速变化±0.2ml/min、检测器温度变化±5℃等条件下耐用性良好。在不同品牌色谱柱、不同进样口温度、载气流速及检测器温度条件下，二（2-氯乙基）胺盐酸盐和1,4-二溴丁烷保留时间无显著变化，且均能达到有效分离。