一种细胞DNA的染色方法与流程

本发明涉及一种细胞dna的染色方法。

背景技术：

细胞dna含量反映细胞生长及分化状态，测定其含量的变化对判断肿瘤的性质及预后具有重要意义。现阶段应用于细胞dna染色的产品时，在酸化过程中，采用5摩尔/升盐酸进行酸化，盐酸为易制毒化学品，且由于酸度高，使细胞容易产生酸化过度导致dna破碎，影响结果；染色时采用的染色剂为固体粉末，用户需要自己进行配制，其中经历了称量，加热，搅拌、过滤等多个过程，需要用户具备一定的实验室操作基础和基础设备的使用知识，而且配制时间较长，大概需要3～4h，容易产生误差。

技术实现要素：

本发明的目的是为了解决现阶段应用于细胞dna染色方法中费时且易有误差的问题，提供了一种细胞dna的染色方法。

本发明一种细胞dna的染色方法为：一、将细胞进行液基薄层制片，然后在固定液中固定，得到固定有细胞的玻璃片，再放入浓度为1.5～2.5mol/l的氢溴酸中酸化40～50min；二、将细胞dna染色液中的a试剂和b试剂混合，震荡25～35min，然后放入步骤一处理后的玻璃片，染色40～50min，即完成；其中a试剂按质量百分含量由0.5％～5％硫堇、5％～25％的酸和余量的水组成；b试剂按质量百分含量由0～90％的醇、0.5％～3％的含硫盐和余量的水组成。

本发明染色方法在酸化过程中使用2摩尔/升氢溴酸替代盐酸，不仅不属于易制毒化学品，而且大大降低了酸度，不易产生酸化过度的问题，酸化时间也可以从60分钟降低到45分钟。本发明的染色液采用两种液体试剂，保质期可以达到5年，而且经过试验测试，该试剂在零下40摄氏度到40摄氏度的温度中长期存放，其化学物质没有任何性能改变。本发明染色液的a、b试剂均为液体状态，只需简单混合就可以得到满意的效果，大大节省了用户的时间，仅需1.5h，提高了工作效率，而且无论是否有操作基础都可以轻易掌握这个过程。

附图说明

图1是实施例1中采用本发明方法染色后的细胞图片；

图2是实施例2中采用本发明方法染色后的细胞图片；

图3是实施例3中采用本发明方法染色后的细胞图片；

图4是实施例中采用现有方法染色后的细胞图片。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式一种细胞dna的染色方法为：一、将细胞进行液基薄层制片，然后在固定液中固定，得到固定有细胞的玻璃片，再放入浓度为1.5～2.5mol/l的氢溴酸中酸化40～50min；二、将细胞dna染色液中的a试剂和b试剂混合，震荡25～35min，然后放入步骤一处理后的玻璃片，染色40～50min，即完成；其中a试剂按质量百分含量由0.5％～5％硫堇、5％～25％的酸和余量的水组成；b试剂按质量百分含量由0～90％的醇、0.5％～3％的含硫盐和余量的水组成。

本实施方式染色方法在酸化过程中使用2摩尔/升氢溴酸替代盐酸，不仅不属于易制毒化学品，而且大大降低了酸度，不易产生酸化过度的问题，酸化时间也可以从60分钟降低到45分钟。本实施方式的染色液采用两种液体试剂，保质期可以达到5年，而且经过试验测试，该试剂在零下40摄氏度到40摄氏度的温度中长期存放，其化学物质没有任何性能改变。本实施方式的a、b试剂均为液体状态，只需简单混合就可以得到满意的效果，大大节省了用户的时间，提高了工作效率，仅需1.5h，而且无论是否有操作基础都可以轻易掌握这个过程。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述的震荡的速率为12hz。其他与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤二中染色45min。其他与具体实施方式一或二不同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：所述的含硫盐为亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钾、硫带硫酸钠、硫带硫酸钾、偏重亚硫酸氢钠和偏重亚硫酸氢钾中的一种或几种按任意比组成。其他与具体实施方式一至三之一相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：所述的醇为乙醇、乙二醇、丙醇、正丁醇和叔丁醇中的一种或几种按任意比组成。其他与具体实施方式一至四之一相同。

本实施方式中所述的醇均为分析纯。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是：所述的酸为浓度为1～5mol/l的盐酸、浓度为1～5mol/l的硝酸、浓度为0.5～2.5mol/l的硫酸、浓度为0.4～2mol/l的磷酸和浓度为1～5mol/l的氢溴酸中的一种或几种按任意比组成。其他与具体实施方式一至五之一相同。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是：细胞dna染色液的a试剂按质量百分含量由1％硫堇、12.5％的氢溴酸和余量的水组成；b试剂按质量百分含量由80％的叔丁醇、1.8％的亚硫酸氢钠和余量的水组成；其中氢溴酸的浓度为2mol/l。其他与具体实施方式一至六之一相同。

具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一至七之一不同的是：细胞dna染色液的a试剂按质量百分含量由2％硫堇、5％的氢溴酸和余量的水组成；b试剂按质量百分含量由87％的叔丁醇、1.8％的亚硫酸氢钠和余量的水组成；其中氢溴酸的浓度为5mol/l。其他与具体实施方式一至七之一相同。

具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同的是：细胞dna染色液的a试剂按质量百分含量由2％硫堇、6％的氢溴酸和余量的水组成；b试剂按质量百分含量由1.8％的亚硫酸氢钠和余量的水组成；其中氢溴酸的浓度为4mol/l。其他与具体实施方式一至八之一相同。

具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一至九之一不同的是：细胞dna染色液的a试剂按质量百分含量由1％硫堇、5％的盐酸和余量的水组成；b试剂按质量百分含量由1.8％的亚硫酸氢钠和余量的水组成；其中盐酸的浓度为5mol/l。其他与具体实施方式一至九之一相同。

为验证本发明的有益效果进行了以下实验：

实施例一：一种细胞dna的染色方法为：一、将细胞进行液基薄层制片，然后在bs固定液中固定30min，得到固定有细胞的玻璃片，再放入浓度为2mol/l的氢溴酸中酸化45min；二、将细胞dna染色液中的a试剂和b试剂混合，震荡30min，然后放入步骤一处理后的玻璃片，染色45min，即完成；其中a试剂按质量百分含量由1％硫堇、12.5％的氢溴酸和余量的水组成；b试剂按质量百分含量由80％的叔丁醇、1.8％的亚硫酸氢钠和余量的水组成；其中氢溴酸的浓度为2mol/l。本实施例染色后的图片如图1所示。

实施例二：一种细胞dna的染色方法为：一、将细胞进行液基薄层制片，然后在bs固定液中固定30min，得到固定有细胞的玻璃片，再放入浓度为2mol/l的氢溴酸中酸化45min；二、将细胞dna染色液中的a试剂和b试剂混合，震荡30min，然后放入步骤一处理后的玻璃片，染色45min，即完成；其中a试剂按质量百分含量由2％硫堇、5％的氢溴酸和余量的水组成；b试剂按质量百分含量由87％的叔丁醇、1.8％的亚硫酸氢钠和余量的水组成；其中氢溴酸的浓度为5mol/l。

本实施例染色后的图片如图2所示。

实施例三：一种细胞dna的染色方法为：一、将细胞进行液基薄层制片，然后在bs固定液中固定30min，得到固定有细胞的玻璃片，再放入浓度为2mol/l的氢溴酸中酸化45min；二、将细胞dna染色液中的a试剂和b试剂混合，震荡30min，然后放入步骤一处理后的玻璃片，染色45min，即完成；其中a试剂按质量百分含量由1％硫堇、5％的盐酸和余量的水组成；b试剂按质量百分含量由1.8％的亚硫酸氢钠和余量的水组成；其中盐酸的浓度为5mol/l。

本实施例染色后的图片如图3所示。

将实施例一、二和三的染色方法和现有dna染色方法进行对比：

现有dna染色方法：先取得细胞，在细胞保存液中保存。将细胞进行液基薄层制片，然后在bs固定液中固定半小时。将片在5摩尔/升盐酸中酸化60分钟，然后在染色液中染色60分钟，脱水，封片，测量。结果如图4所示。由图1、2、3和图4可知，本发明的染色效果明显优于现有dna染色方法。本实施例的a、b试剂均为液体状态，只需简单混合就可以得到满意的效果，大大节省了用户的时间，提高了工作效率，仅需1.5h，而且无论是否有操作基础都可以轻易掌握这个过程。