F077188. 1、BC144136. 1、NM_002227. 2、 GU211：M7. 1、X60188. 1、AF281255. 1、U65410. 1、AY441957. 1、J04718. 1、NM_020666. 2、 NM_005146. 4。
[0099] 优选地，本发明所采用四半脫氨酸多肤标签包括的CCXXCC为序列表中SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
[0100] 优选地，所述 CCXXCC 为 CCPGCC。
[0101] 优选地，所述四半脫氨酸多肤标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4 所示。
[0102] 具体地，所述 SEQ ID N0:3 的序列为 FLNCCPGCCMEP。
[0103] 具体地，所述 SEQ ID N0:4 的序列为 HRWCCPGCCKTF。
[0104] 第四方面，本发明提供了一种含有如第二方面所述的重组表达质粒的宿主细胞。
[0105] 优选地，所述宿主细胞为ToplO、D册a、BL21、化2UDE3)、肥K293T或C0S7。
[0106] 第五方面，本发明提供了一种蛋白质类泛素化修饰的检测试剂盒，包括检测质粒、 待测蛋白质表达质粒、蛋白质纯化试剂、双神英光染料标记试剂和多聚链聚合度量化分析 内参试剂，其中，所述检测质粒含有相连的类泛素化修饰蛋白的编码基因和四半脫氨酸多 肤标签的编码基因，所述四半脫氨酸多肤标签的编码基因位于所述类泛素化修饰蛋白的编 码基因的5'端，所述四半脫氨酸多肤标签的编码基因为18bp~36bp ;
[0107] 所述四半脫氨酸多肤标签的氨基酸序列包括CCXXCC,其中，所述C为半脫氨酸，所 述X为除半脫氨酸W外的任一氨基酸。
[010引优选地，检测质粒为将所述相连的类泛素化修饰蛋白的编码基因和四半脫氨酸多 肤标签的编码基因插入真核载体的多克隆位点后所得的重组质粒。
[0109] 进一步优选地，所述真核载体为真核表达载体。
[0110] 更进一步优选地，所述真核表达载体为pcDNA载体。
[01 川 更进一步优选地，所述 pcDNA 载体为 pcDNA ?3. 1 (+)、pcDNA ?3. 1 (-)、pcDNA?3. 1/ His-A、pcDNA?3. 1/His-B 或 pcDNA?3. 1/His-C 载体。
[011引更进一步优选地，所述多克隆位点为pcDNA?3. 1/His-A的化nd III和化o I酶切 位点。
[0113] 优选地，所述SUM02为人源SUM02 (h SUM02)，所述人源SUM02的编码基因如SEQ ID NO: 1 所示。
[0114] 优选地，所述类泛素化修饰蛋白为SUMOl、SUM02、SUM03、SUM04、肥孤8、FATIO、 FUBUUBL5、ISG15、UFM1、化ml 或 Apgl2。
[0115] 在此优选条件下，所述类泛素化修饰蛋白的Genebank登录号如下：
[0116] 所述 SUMO 1、SUM03、SUM04、肥孤8、FAT 10、FUB1、UBL5、ISG15、UFM1、化m 1 或 Apg 12 的 Genebank 登录号分别为 BC006462. 1、NM_001286416. 1、AB205057. 1、BC104201. 1、 AF123050. 1、NM_001997. 4、AF313915. 1、NM_005101. 3、BC005193. 1、BC003581. 1、 AB017507. 1 ;
[0117] 优选地，所述待测蛋白质为 Sp100 、p53、p73、RanGAPl、PML、HIPK2、c-^n、ArKlrogen receptor、]Vklm2、TopoI、Top〇n、WRN、glut4、TDG、Qil-l、Qil-2、Qil-3、Qil-4A、PLCYl、 JAKl、STAT-1、E服 1、Bcl-G、Mad2、Sp3、PCNA、化K4 或 Snu66。
[0118] 在此优选条件下，所述 SplOO、p53、p73、RanGAPl、PML、HIPK2、c-化n、An化ogen receptor、]Vklm2、TopoI、TopoII、WRN、glut4、TDG、Qil-l、Qil-2、Qil-3、Qil-4A、PLCYl、 JAKl、STAT-1、E服 1、Bcl-G、Mad2、Sp3、PCNA、化K4 或 Snu66 的 Genebank 登录号分别为 BC011562. 1、BC003596. 1、Y11416. 1、BC041396. 2、S50913. 1、AF326592. 1、BC068522. 1、 M：M233. 1、NM_001145339. 2、BC136297. UJ04088. UAF091214. UM91463. 1、NM_003211.4、 匪_003592. 2、AF126404. 1、BC092409. 1、AF077188. 1、BC144136. 1、NM_002227. 2、 GU211：M7. 1、X60188. 1、AF281255. 1、U65410. 1、AY441957. 1、J04718. 1、NM_020666. 2、 NM_005146. 4。
[0119] 优选地，本发明所采用四半脫氨酸多肤标签包括的CCXXCC为序列表中SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
[0120] 优选地，所述 CCXXCC 为 CCPGCC。
[0121] 优选地，所述四半脫氨酸标签多肤的氨基酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4 所示。
[0122] 具体地，所述 SEQ ID N0:3 的序列为 FLNCCPGCCMEP。
[0123]具体地，所述 SEQIDN0:4 的序列为HRWCCPGCCKTF。
[0124] 优选地，所述待测蛋白质表达质粒为将待测蛋白质的编码基因插入真核载体的多 克隆位点后所得的重组质粒。
[01巧]进一步优选地，所述真核载体为真核表达载体。
[0126] 更进一步优选地，所述真核表达载体为pcDNA载体。
[0127]更进一步优选地，所述 pcDNA 载体为 pcDNA?3. 1/His-A、pcDNA?3. 1/His-B、 pcDM?3. 1/His-C、pcDM?4/His-A、pcDNA?4/His-B、pcDM?4/His-C、pcDM?3. 1 (-) / myc-His-A、pcDNA?3. 1 (-)/myc-His-B、pcDNA?3. 1 (-)/myc-His-C、pcDM3. l(+)/myc-His A、pcDNA3. l(+)/myc-His B 或 pcDNA3. l(+)/myc-His C。
[012引优选地，所述蛋白质纯化试剂包括细胞裂解缓冲液、清洗缓冲液和洗脱缓冲液。
[0129] 进一步优选地，所述细胞裂解缓冲液的抑为8.0,包括；lOOmM化&口〇4, lOmM Tris-C1,8M urea, ImM TCEP〇
[0130] 进一步优选地，所述清洗缓冲液的抑为6. 3,包括；lOOmM化畔〇4, lOmM Tris-C1,4M urea, ImM TCEP。
[013。 进一步优选地，所述洗脱缓冲液的抑为4. 5,包括；lOOmM化畔04, lOmM Tris-Cl, 2M urea, ImM TCEP0
[0132] 在此优选条件下，采用所述蛋白质纯化试剂纯化表达蛋白质的方法为：
[0133] a)收集细胞，用细胞裂解缓冲液重息，超声破碎；
[0134] b)离也取上清液，所得上清液与媒结合树脂赔育后用清洗缓冲液清洗树脂2~3 次；
[0135] C)再用与树脂等体积的洗脱缓冲液将蛋白质从树脂上洗脱下来，得到纯化的蛋白 质。
[0136] 采用本发明提供的蛋白质纯化试剂可W对经类泛素化修饰的待测蛋白质进行纯 化。
[0137] 优选地，所述双神英光染料标记试剂包括F1AsH-EDT2、巧F1AsH-EDT2、 F4F1AsH-EDT2 或 ReAsH-EDT]。
[0138] 在此优选条件下，采用本发明提供的双神英光染料标记试剂对经类泛素化修饰的 待测蛋白质进行英光标记的方法为：
[0139] 先用所得纯化的经类泛素化修饰的待测蛋白质的十倍体积的磯酸盐缓冲液进行 稀释和中和，再加入双神英光染料在室温下避光赔育60分钟，得到双神英光染料标记的经 类泛素化修饰的待测蛋白质；其中，所述磯酸盐缓冲液的抑为7. 4,所述双神英光染料加入 后的终浓度为500nM。
[0140] 优选地，所述十倍体积的磯酸盐缓冲液为纯化后的含类泛素化修饰的待测蛋白质 的洗脱液体积的十倍。
[0141] 优选地，所述多聚链聚合度量化分析内参试剂包括带单四半脫氨酸多肤标签的类 泛素化修饰蛋白。
[0142] 在此优选条件下，采用所述多聚链聚合度-量化分析内参试剂对经类泛素化修饰 的待测蛋白质进行检测和/或量化分析的方法为：
[0143] 利用全内反射英光显微镜对经双神英光染料标记的类泛素化修饰的待测蛋白质 进行单分子成像，观察待测蛋白质是否发生类泛素化修饰；和/或
[0144] 将带单四半脫氨酸多肤标签的类泛素化修饰蛋白的英光强度的平均值定义为单 类泛素化修饰，再将经类泛素化修饰的待测蛋白质获得的英光强度值除W单修饰的英光 值，从而计算出经类泛素化修饰的待测蛋白质的修饰程度，即类泛素化修饰多聚链的聚合 度。
[0145] 优选地，所述带单四半脫氨酸多肤标签的类泛素化修饰蛋白的制备方法如下：
[0146] 1)提供四半脫氨酸多肤标签与类泛素化修饰蛋白融合基因作为PCR扩增的基因 模板，
[0147] 2)提供四半脫氨酸多肤标签与类泛素化修饰蛋白融合基因的PCR扩增引物，包括 上游引物和下游引物，
[014引 3)采用步骤（2)提供的PCR扩增引物与步骤（1)提供的基因模板进行PCR，扩增得 到编码带四半脫氨酸多肤标签的类泛素化修饰蛋白的融合基因；
[0149] 4)将扩增后所得的融合基因插入到原核表达载体的多克隆位点，得到带四半脫氨 酸多肤标签的类泛素化修饰蛋白的编码基因原核表达质粒，所得原核表达质粒含有相连的 类泛素化修饰蛋白的编码基因和单四半脫氨酸多肤标签的编码基因，
[0150] 5)在原核表达系统中表达并纯化带单个四半脫氨酸多肤标签的类泛素化修饰蛋 白，获得所述带单四半脫氨酸多肤标签的类泛素化修饰蛋白。
[0151] 优选地，所述四半脫氨酸多肤标签与类泛素化修饰蛋白融合基因的核巧酸序列如 SEQ ID N0:7 所示。
[0152] 优选地，所述原核表达载体为祀T-28a。
[0153] 优选地，所述步骤2)中，所述上游引物和下游引物的序列分别如SEQIDN0:8和 SEQIDNO:6所示。
[0154] 具体地，SEQ ID NO:8所示的序列为（5, -3，）；
[0巧5] GCCATGGGCCATCATCATCATCATCACGGCTTCTTGAAC
[0156] TGTTGCCCGGGCTGCTG；
[0157] 具体地，SEQ ID NO:6所示的序列为（5' -3，）；
[0158] CGCTCGAGTCAACCTCCCGTC