高效提取和液相测定黄肉桃果实中类胡萝卜素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学工业中的化学分析及仪器分析技术领域。
【背景技术】
[0002] 黄肉桃可鲜食和罐藏加工两用，经济价值和研究价值均较高，类胡萝h素是黄肉 桃果实中重要的抗氧化物质之一。据已有文献，目前公开的蔬菜和水果等植物中类胡萝h 素的提取提取方法繁琐，常常需要皂化处理，且提取效果不好，并且高效液相色谱测定的条 件复杂，所用流动相组成配比和梯度洗脱过程均很复杂，测定成分单一，测定样品时间长， 且成本高。因此，为了对黄肉桃资源进行有效评价和利用，建立一种快速经济有效的提取和 测定黄肉桃果肉中多种类胡萝h素的方法尤为重要。
[0003] 目前有少量文献利用YMC-C30色谱柱进行植物中类胡萝h素的分离，直接利用甲 醇、氯仿或丙酬等提取，无需皂化直接测定，但是均未对提取时的料液比和具体提取方式和 时间进行准确限定；并且均是利用己膳、甲醇、甲基叔了基離和水等试剂进行复杂的配比组 合，从而进行几个流动相的梯度洗脱，必须要配置2元累甚至4元累才能满足需求，操作繁 杂，仪器要求高，测定时间长，成本高，测定受限（《高效液相色谱法同时检测淀粉类食品中 添加的姜黄色素与类胡萝h素化合物》，杨芳等，2014 ;《密花胡颜子果实主要类胡萝h素组 分及含量分析》，胡海涛等，2014;《番茄及其制品中全反式番茄红素和0-胡萝h素含量的 C_ (30-)HPLC内标法定量分析》，了靖等，2010 ;《桃果实类胡萝h素测定方法的研究》，颜少 宾等，2012;《北京地区常见蔬菜中叶黄素、玉米黄素和0-胡萝h素的测定及其含量》，王 子昕和林晓明，2010)。
[0004] 具体地，文献《桃果实类胡萝h素测定方法的研究》公开了桃果实类胡萝h素直接 用丙酬提取，无需皂化直接提取测定，提取时采用4°c多次浸提，最后定容到25mL，即其料 液比为1:12. 5 ;上高效液相色谱测定时，其采用甲醇（A)、甲基叔了基離（B)和水（C)S种 试剂作为流动相，进行梯度洗脱，洗脱条件为；〇~90min，81%A15%B4%C~6%90%B4%C ;92min， 81%A15%B4%C ;-个样品耗时lOOmin。该方法流动相组成和梯度洗脱过程很复杂，且耗时 长，成本高。
[0005] 另外，专利文献〔化025077754公开了^流动相甲基叔了基離；甲醇=15:85等度洗 脱检测单个类胡萝h素，即叶黄素的含量。
[0006]
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种高效提取和液相测定黄肉桃果实中类胡萝h素的方法。
[000引为达到上述目的，本发明采用的技术方案为；一种高效提取和液相测定黄肉桃果 实中类胡萝h素的方法，其步骤包括： a、 配制类胡萝h素的混合标准溶液，绘制标准溶液曲线； b、 从黄肉桃果肉中提取类胡萝h素配制样品溶液； c、 在色谱条件下对样品溶液进行高效液相色谱分析，并用VWD检测器进行检测； d、 将样品溶液的分析结果与标准曲线做比对，得出样品溶液中的类胡萝h素含量； 其特征在于： 步骤b中的提取条件为： 提取剂巧酬； 提取方式；超声波辅助提取； 料液比演肉桃果肉与丙酬的料液比为1:6 (g/mL); 提取时间；Ih ; 直接用丙酬作为标准品溶液和样品溶液的溶剂； 步骤C中的色谱条件为： 色谱柱；YMC-C30 ; 流动相：甲基叔了基離：甲醇的体积比为30:70 ; 洗脱方式；等度洗脱； 流速：1. 0 mL/min ; 波长；450 nm ; 柱温；25°C ; 进样量；20化； 时间；18 min。
[0009] 进一步的，步骤a中配制5种类胡萝h素的混合标准溶液的步骤为；分别准确称取 Img各类胡萝h素标准品，用10 mL丙酬溶解定容，制得浓度为100 mg/L的标准溶液；分 别移取1. 00 mL各标准溶液，混合并用丙酬逐级稀释，制得各浓度单标和各浓度混合标准溶 液。
[0010] 进一步的，其步骤b中从果肉中提取类胡萝h素配制样品溶液的步骤为；称取果 肉，根据料液比1:6 (g/mL)加入丙酬，避光超声波辅助提取化，4°C下10000巧m离屯、10 min,取上清液即得样品溶液，经0. 22 mm有机滤头过滤。
[0011] 进一步的，绘制标准溶液所使用的类胡萝h素包括叶黄素、玉米黄素、0 -隐黄质、 a-胡萝h素、0-胡萝h素。
[0012] 本发明的高效提取和液相测定黄肉桃果实中类胡萝h素的方法，提取料液比1:6 (g/mL)，超声波辅助提取比，采用甲基叔了基離；甲醇=30:70作为流动相等度洗脱，=个 条件结合起来能有效完全的提取和快速准确测定黄肉桃果肉中的多种类胡萝h素，操作简 单，无需皂化无需梯度洗脱，测定结果重复性好，准确度高，液相用时短。确定的提取思路和 色谱条件也可用于分离测定其它水果和蔬菜中的类胡萝h素。
【附图说明】
[001引图1为实施例1中混合标准溶液的HPLC图，其中1.叶黄素；2.玉米黄素；3. 0 -隐黄质；4. a-胡萝h素；5. 0-胡萝h素。
[0014] 图2为实施例1中'金陵黄露'品种果肉样品中类胡萝h素的HPLC图，其中1.叶 黄素；2.玉米黄素；3. 0-隐黄质；4. a-胡萝h素点0-胡萝h素。
[0015] 图3为实施例2中'锦绣'品种果肉样品中类胡萝h素的HPLC图，其中1.叶黄 素；2.玉米黄素；3. e-隐黄质；4. a-胡萝h素点e-胡萝h素。
[0016] 图4为实施例3中'瑞光20号'品种果肉样品中类胡萝h素的HPLC图，其中1. 叶黄素；2.玉米黄素；3. 0-隐黄质；4. a-胡萝h素点0-胡萝h素。
[0017] 图5为对比例1中色谱图。其中1.叶黄素；2.玉米黄素；3. 0-隐黄质；4. a-胡萝h素点0-胡萝h素。
[001引图6为对比例2中色谱图。其中1.叶黄素；2.玉米黄素；3. 0-隐黄质；4. a-胡萝h素点0-胡萝h素。
[0019] 图7为对比例3中色谱图。其中1.叶黄素；2.玉米黄素；3. 0-隐黄质；4. a-胡萝h素点0-胡萝h素。
[0020] 图8为对比例4中色谱图。其中1.叶黄素；2.玉米黄素；3. 0-隐黄质；4. a-胡萝h素点0-胡萝h素。
[0021] 图9为对比例5中色谱图。其中1.叶黄素；2.玉米黄素；3. 0-隐黄质；4. a-胡萝h素点0-胡萝h素。
[002引图10为对比例6和实施例1在不同料液比下'金陵黄露'桃果肉类胡萝h素组分 测定结果。
[002引图11为对比例7和实施例1采用不同提取方式和提取时间'金陵黄露'桃果肉两 种主要类胡萝h素含量测定结果。
[0024] 下面结合附图对本发明的实施方式做进一步说明。
【具体实施方式】
[002引试剂与设备； 5种类胡萝h素标准品包括叶黄素、玉米黄素、0 -隐黄质、a -胡萝h素、0 -胡萝h 素，均购自Sigma公司，纯度> 95%。
[0026] 超声波清洗器，离屯、机，Agilent高效液相色谱系统；1100系列，VWD紫外检测器， YMC-C30 色谱分析柱（4. 6 X 250 mm，5 y m)。
[0027] 实施例1 a、 配制5种类胡萝h素的标准溶液的步骤为；分别准确称取Img各类胡萝h素标准品， 用10 mL丙酬溶解定容，制得浓度为100 mg/L的标准溶液；分别移取1.00 mL各标准溶液， 混合并用丙酬逐级稀释，制得各浓度单标和各浓度混合标准溶液。取浓度为lOmg/L的混合 标准溶液经高效液相色谱分析得到标准溶液曲线，见图1，色谱条件为： 色谱柱；YMC-C30 ; 流动相；甲基叔了基離：甲醇=30:70 ; 洗脱方式；等度洗脱； 流速：1. 0 mL/min ; 波长；450 nm ; 柱温；25°C ; 进样量；20化； 时间；15 min ; b、 准确称取0. 5g '金陵黄露'品种成熟果实果肉，加入3mL丙酬，避光超声波提取1 h， 4°C下10000巧m离屯、10 min,取上清液经0. 22 mm有机滤头过滤后得到样品溶液； C、对样品溶液进行高效液相色谱分析，得到样品溶液的色谱图，见图2,色谱条件同标 准曲线的色谱条件； d、将样品溶液的色谱图与标准溶液曲线比对，得到'金陵黄露'桃果肉中各种类胡萝h 素的含量，见表1，单位为mg/kg，即每kg果肉中含有的含量。
[002引 实施例2 准确称取0. 5g '锦绣'品种成熟果实果肉，加入3mL丙酬，避光超声波提取1 h，4°C下 10000巧m离屯、10 min,取上清液经0.22 mm有机滤头过滤后得到样品溶液进色谱柱，色谱 条件同实施例1，所得样品溶液的色谱图见图3,桃果肉中各种类胡萝h素的含量见表1。
[0029] 实施例3 准确称取0. 5g '瑞光20号'品种成熟果实果肉，加入3mL丙酬，避光超声波提取1 h， 4°C下10000巧m离屯、10 min,取上清液经0.22 mm有机滤头过滤后得到样品溶液进色谱 柱，色谱条件同实施例1，所得样品溶液的色谱图见图4,桃果肉中各种类胡萝h素的含量 见表1。
[0030] 对比例1 配制5种类胡萝h素的标准溶液的步骤为；分别准确称取Img各类胡萝h素标准品，用 10 mL丙酬溶解定容，制得浓度为100 mg/L的标准溶液；分别移取1.00 mL各标准溶液，混 合并用丙酬逐级稀释，制得各浓度单标和各浓度混合标准溶液。取浓度为lOmg/L的混合标 准溶液经高效液相色谱分析得到标准溶液曲线，见图5,色谱条件为： 色谱柱；YMC-C30 ; 流动相；甲基叔了基離：甲醇=50:50 ; 洗脱方式；等度洗脱； 流速；1. 0 mL/min ; 波长；450 nm ; 柱温；25°C ; 进样量；20化； 时间；10 min