7的细胞毒评价结果；
[0042] 图6为通脉养心丸18种分尚组分的相对NO抑制率；
[0043] 图7为通脉养心丸中TM7、TM11、TM13、TM14、TM18抗炎活性量效关系图，其中，图 7a为TM7的抗炎活性量效关系图，图7b为TMl 1的抗炎活性量效关系图，图7c为TM13的抗 炎活性量效关系图，图7d为TM14的抗炎活性量效关系图，图7e为TM18的抗炎活性量效关 系图；
[0044] 图8为通脉养心丸中TM7和TMl 1的LC-MS分析谱图，其中，图8a为TM7的LC-MS 图，图8b为TMll的LC-MS图；
[0045] 图9为甘草酸、五味子醇甲、戈米辛D、芒柄花素、芹糖异甘草苷、异麦角留苷、甘草 苷的量效关系图，其中，图9a为甘草酸的量效关系图，图9b为五味子醇甲的量效关系图，图 9c为芒柄花素的量效关系图，图9d为戈米辛D的量效关系图，图9e为芹糖异甘草苷的量效 关系图，图9f为异麦角甾苷的量效关系图，图9g为甘草苷的量效关系图。
【具体实施方式】
[0046] 中药对缺血性心脏病一般有较好的疗效，现代医学表明，这些治疗缺血性心脏病 的中药都具有心肌保护和抗炎作用。但是，现在还没有任何技术能够确定这些治疗缺血性 心脏病的中药中，具有心肌保护作用和抗炎作用的活性成分。这样既不利于对这些中药进 行更深入的研宄，也不利于对这些中药进行质量控制。
[0047] 因此，本发明提供了一种确定中药中具有心肌保护和抗炎作用的活性成分的方 法，用于确定中药中具体哪些活性成分具有心肌保护作用和抗炎作用，该方法科学有效，结 果可靠。
[0048] 需要说明的是，本发明的技术方案对中药的剂型是没有限制的，例如，丸、散、膏、 丹都等剂型都是可以实现本发明的技术方案。
[0049] 具体的，要实现本发明的技术方案，首先要通过制备液相色谱获得目标中药各分 呙组分。
[0050] 本步骤的具体实施方案可以由本领域技术人员根据目标中药的具体制剂形式及 中药中各组分的特点，采用现有技术的相关技术方案来实现。本发明在此不作具体限定。在 一些实施方式中，该步骤可以包括：获得目标中药的中药提取液，然后使所述中药提取液通 过反相色谱柱；再对反相色谱柱进行洗脱，将洗脱液通过制备液相色谱进行分离，收集目标 中药各分离组分。在一些实施方式中，获得目标中药的中药提取液，可以包括：将目标中药 与甲醇水溶液混合后，进行提取、过滤，得到中药提取液；反相色谱柱具体可以为：十八烷 基硅烷键合硅胶为填料的中压反相色谱柱。制备液相色谱的具体色谱条件由本领域技术人 员根据实际情况进行确定，本发明在此不作具体限定。
[0051] 为了能够分别确定目标中药各分离组分中具有心肌保护作用和抗炎作用的活性 成分，发明人设计了心肌细胞抗氧化模型实验和巨噬细胞抗炎模型实验，并通过这两个实 验来分别确定具有心肌保护作用和抗炎作用的活性成分。
[0052] 在一个具体的实施方案中，心肌细胞抗氧化模型实验包括：
[0053] ㈧将目标中药各分离组分针对目标心肌细胞分别进行细胞毒评价，确定无显著 细胞毒的目标中药各分离组分的浓度；
[0054] (B)将目标心肌细胞分别用已确定无显著细胞毒的浓度的目标中药各分离组分进 行保护，然后用指定氧化剂分别对已进行保护的目标心肌细胞进行损伤，并确定损伤后的 目标心肌细胞的剩余数量，并根据所述剩余数量确定目标中药各分离组分对目标心肌细胞 的相对保护率；
[0055] (C)将对目标心肌细胞相对保护率达到最低有效率的目标中药分离组分经LC-MS 分析，确定出相对保护率达到最低有效率的各分离组分中所包含的化学成分；
[0056] 用所确定的化学成分分别代替（B)部分的目标中药各分离组分，重复执行的（B) 部分的操作，确定各化学成分的相对保护率，并将相对保护率达到最低有效率的化学成分 确定为具有心肌保护作用的活性成分。
[0057] 这里所说的最低有效率可以由本领域技术人员根据以往的研宄经验进行设定，一 般设定为50%左右。最低有效率的具体值不应构成对本发明技术方案的限定。
[0058] 由于该模型实验主要是用于确定对心肌具有保护作用的活性成分，因此采用了心 肌细胞进行实验，这样所得到的实验结果会更准确。实验中所用到的目标心肌细胞，可以采 用本领域常用的心肌细胞即可，其具体形式本发明不作具体限定，例如，可以采用H9c2心 肌细胞。
[0059] 需要说明的是，在一些实施方式中，可以将一种已确定具有心肌保护作用的化学 成分作为阳性药，与目标中药的各的各分离组分同时进行心肌细胞抗氧化模型实验，这样 可以将目标中药各分离组分的实验结果直接与阳性药的实验结果进行比较，可以更直接、 更容易的确定目标中药各分离组分的心肌保护作用的效果大小。阳性药的具体形式本发明 在此不作具体限定，只要是已证实确有心肌保护作用的化学成分即可，例如可以选择槲皮 素作为本实验的阳性药。阳性药的心肌细胞抗氧化模型实验参考目标中药各分离组分即 可，本发明在此不作赘述。
[0060] 在一些实施方式中，（A)将目标中药各分离组分针对目标心肌细胞分别进行细胞 毒评价，确定无显著细胞毒的目标中药各分离组分的浓度，具体可以为：
[0061] 将H9c2心肌细胞在不加任何药物、分别加入第一指定浓度的目标中药各分离组 分的情况下，在相同的条件下进行培养。培养结束后，确定不加任何药物及分别加入第一指 定浓度的目标中药各分离组分的H9c2心肌细胞的数量n#s i;并以不加任何药物的H9c2心 肌细胞的数量i为标准，分别计算加入第一指定浓度的目标中药各分离组分后H9c2心 肌细胞存活率K# s i;如果存活率K i在85%以上，则确定所述第一指定浓度为无显著细 胞毒的该目标中药分离组分的浓度。其中，目标中药各分离组分的心肌细胞存活率!^^的 计算公式可以为：
[0062] K分离丄％ = (η分离丄/n对照丄)X 100 %。
[0063] 在用阳性药进行实验时，通过公式
[0064] K阳性丄％ = (η阳性丄/n对照丄)X 100 %
[0065] 来确定阳性药心肌细胞存活率Kp日性i。
[0066] 在一些实施方式中，（B)将目标心肌细胞用已确定无显著细胞毒的浓度的目标中 药各分离组分分别对目标心肌细胞进行保护，然后用指定氧化剂其进行损伤，并确定损伤 后的目标心肌细胞的剩余数量，并根据所述剩余数量确定目标中药各分离组分对目标心肌 细胞的相对保护率，具体为：
[0067] 将H9c2心肌细胞分成对照1组、实验1组及模型1组在相同的条件下进行培养； 其中，实验1组加入在（A)部分已确定浓度的目标中药各分离组分进行预保护；对照1组及 模型1组不加任何药物；培养结束后，将实验1组及模型1组分别加入指定氧化剂进行H9c2 心肌细胞损伤；损伤后，通过酶标仪在第一预设波长下分别测定对照1组吸光度值DO 5iffiP 实验1组吸光度值DOisu及模型1组吸光度值DO i ;通过计算分别得到实验1组的相对 保护率S^1，
[0068] 其中，实验1组的相对保护率S实验的计算公式为：
[0069] S实验丄％ = (D0实验丄_D0模型丄）/ (D0对照丄_D0模型丄）X 100 %。
[0070] 如前所述，在用阳性药进行实验时，可以增设阳性药1组，并与目标中药各分离组 分进行相同的实验，最后得到阳性药1组吸光度值DO wt4 i，并通过公式
[0071 ] S阳性工％ = (D0阳性工_D0模型工）/ (D0对照工_D0模型工）X 100 %
[0072] 阳性药1组的相对保护率S_i。
[0073] 巨噬细胞抗炎模型实验包括：
[0074] (a)将目标中药各分离组分针对目标巨噬细胞分别进行细胞毒评价，确定无显著 细胞毒的目标中药各分离组分的浓度；
[0075] (b)将目标巨噬细胞分组培养，每组的培养液中加入一种已确定无显著细胞毒的 浓度的目标中药各分离组分及指定炎症诱导剂，培养结束后，确定各培养液上清液中的NO 的含量，并根据所述NO的含量确定目标中药各分离组分对目标巨噬细胞的NO相对抑制 率；
[0076] (c)将对目标巨噬细胞的NO相对抑制率达到抗炎有效率的目标中药分离组分经 LC-MS分析，确定出NO相对抑制率达到抗炎有效率的各分离组分中所包含的化学成分；
[0077] 用所确定的化学成分分别代替（b)部分的目标中药各分离组分，重复执行（b)部 分的操作，将NO相对抑制率的半数抑制浓度在指定值以下的化学成分确定为具抗炎作用 的活性成分。
[0078] 由于该模型实验主要是用于确定具有抗炎作用的活性成分，因此采用了巨噬细胞 进行实验，这样所得到的实验结果会更准确一些。实验中所用到的目标巨噬细胞，可以采用 本领域常用的巨噬细胞即可，其具体形式本发明不作具体限定，例如，可以采用小鼠巨噬细 胞 RAW264. 7。
[0079] 这里所说的抗炎有效率可以由本领域技术人员根据以往的研宄经验进行设定，一 般设定为50%左右的相对NO抑制率，在设置有阳性要对照组的情况下，也可以采用阳性药 的相对NO抑制率。抗炎有效率的具体值不应构成对本发明技术方案的限定。
[0080] 需要说明的是，在一些实施方式中，可以将一种已确定具有抗炎作用的化学成分 作为阳性药，同时进行巨噬细胞抗炎模型实验，这样可以将目标中药各分离组分的实验结 果直接与阳性药的实验结果进行比较，可以更直接、更容易的确定目标中药各分离组分的 抗炎作用的效果大小。阳性药的具体形式本发明在此不作具体限定，只要是已证实确有抗 炎作用的化学成分即可，例如可以选择吲哚美辛作为本实验的阳性药。阳性药的巨噬细胞 抗炎模型实验参考目标中药各分离组分即可，本发明在此不作赘述。
[0081] 在一些实施方式中，（a)将目标中药各分离组分针对目标巨噬细胞分别进行细胞 毒评价，确定无显著细胞毒的目标中药各分离组分的浓度，具体可以为：
[0082] 将小鼠巨