测定芝麻中芝麻林素含量的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物检测技术领域，具体涉及一种测定芝麻中芝麻林素含量的方法。
【背景技术】
[0002]芝麻(Sesame)是我国重要的油料作物之一，具有较高的应用价值。芝麻林素(Sesamin)属于木脂类，在芝麻油中的含量为0.2%?0.6%，具有解毒、抗高血压、减少胆固醇吸收、保护肝脏、调节脂质代谢，抗癌以及调节免疫力等多种生理活性。我国芝麻资源丰富，有很大的发展潜力。芝麻在我国的可种植地区广泛，但不同地区生产的芝麻质量参差不齐，其芝麻林素含量有很大差异。目前，国家标准依据不同指标将芝麻划分等级，但未对芝麻林素的含量进行规定。不同等级的芝麻价格差异大，鉴于芝麻林素的高附加值，把芝麻林素含量列入划分芝麻等级的标准具有现实意义，由此亟需建立一种简便、快捷的方法来测定芝麻林素含量。
[0003]目前，对芝麻林素含量的测定主要采用色谱法，如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)等，但是这些方法的检测对象都是芝麻油(如中国专利文献CN101602768)，检测前需要对芝麻油进行复杂的预处理，检测过程中步骤繁琐、所需时间长，芝麻油样品和溶剂消耗量大，且检测结果误差较大。
【发明内容】
[0004]本发明提供一种测定芝麻中芝麻林素含量的方法，该测定方法简便、快捷、高效，可规模化进行。
[0005]为解决上述问题，本发明采用的技术方案如下:
设计一种测定芝麻中芝麻林素含量的方法，包括以下步骤:
(1)制作标准工作曲线:以梯度浓度的芝麻林素标准品甲醇溶液，在287nm波长处测定吸光度，并绘制标准工作曲线；
(2)样品处理:将芝麻样品粉碎后，过0.35 μπι筛，称取一定量所得粉体，加入其重量30?40倍的无水乙醇，在50?60°C条件下用超声波、震荡器间歇处理25?30min，然后，以5000rpm离心2min，将上清液用0.45 μ m尼龙膜过滤备用；
(3)对滤得液体进行HPLC测定，测定条件:流动相为甲醇:水=80:20(V/V)，流量:lmL/min，检测波长:287nm，进样体积:9yL，保留时间:15min ;根据所制标准工作曲线查找或计算，即得芝麻样品中芝麻林素的含量。
[0006]所述步骤(I)中优选的梯度浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.25 μ g/mL。
[0007]优选的，步骤(2)所述超声波功率为80?100W，优选80W。
[0008]优选的，步骤(2)所述超声波、震荡器间歇处理为超声波处理5分钟、震荡器处理I分钟，如此循环进行。
[0009]优选的，对应于所述标准工作曲线的拟合方程式为y=457.729323x_3.3962015，其中y为峰面积，X为芝麻林素含量。
[0010]优选的，步骤(3)所用色谱柱为安捷伦L1260，Eclipse XDB-C18-USP LI分析柱，规格:4.6 mmX250 _，粒径:5 μm，柱温:30°C。
[0011 ] 本发明的积极有益效果:
1.能够直接测、快速地测定芝麻种子中的芝麻林素含量，不需要先将芝麻种子压榨成芝麻油再进行检测，省略了榨油的工序；也不需要在检测前进行步骤复杂的预处理过程，极大的简化了芝麻林素测定的步骤和工序，大幅缩短了检测所需时间。
[0012]2.优化选择了样品处理的各项工艺参数及检测的条件参数，使得检测结果更加准确、稳定，提高了灵敏度，能够用于快速检测芝麻质量，便于根据芝麻林素含量为芝麻进行等级划分；同时也能够为快速、高效、大规模提取芝麻种子中的芝麻林素提供参考，对于芝麻素生产领域中提高芝麻素的提取率、缩短提取时间有着重要的意义。
[0013]综上，本发明测定方法简便、快捷、高效，灵敏度较高，可以最大限度提取样品中的芝麻林素进行测定，更加接近真实值，可规模化进行。
【附图说明】
[0014]图1为震荡和超声条件对芝麻林素提取量的影响曲线图；
图2为超声处理位置对芝麻林素提取量的影响曲线图；
图3为超声处理时间对芝麻林素提取量的影响；
图4为超声处理温度对芝麻林素提取量的影响曲线图；
图5为样品提取液类型对芝麻林素提取量的影响曲线图；
图6为离心速度对芝麻林素提取量的影响曲线图；
图7为离心时间对芝麻林素提取量的影响曲线图；
图8为不同提取液量对芝麻林素提取量的影响曲线图；
图9为不同超声波功率对芝麻林素提取量的影响曲线图。
【具体实施方式】
[0015]下面结合具体实施例来说明本发明的【具体实施方式】，但以下实施例只是用来详细说明本发明，并不以任何方式限制本发明的范围；所用芝麻样品为豫芝11号，所用芝麻林素标准样品购自成都普菲德生物技术有限公司。
[0016]实施例1
一种测定芝麻中芝麻林素含量的方法，包括以下步骤:
Cl)制作标准工作曲线:采用梯度浓度分别为200、100、50、25、12.5,6.25 μ g/mL的芝麻林素标准品甲醇溶液，以无水甲醇为空白对照，在287nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线，对应的拟合方程式为y=457.729323x-3.3962015，其中y为峰面积，x为芝麻林素含量；
(2)样品处理:将芝麻样品粉碎后，过0.35 μ m筛，称取所得粉体0.2000g，加入7mL无水乙醇，在60°C条件下用超声波(超声波功率为80W)、震荡器间歇处理25min(超声5分钟、震荡I分钟，如此循环进行)，然后，以5000rpm离心2min，取上清液于注射器中，用0.45 μπι尼龙膜滤头过滤备用；本步骤采用数控超声波清洗器进行超声波处理，昆山市超声仪器有限公司，KQ3200DE，最大频率:40ΚΗΖ，最大功率:150W ； (3)HPLC测定，测定条件:色谱柱:安捷伦L1260，Eclipse XDB-C18-USP LI分析柱，规格:4.6 mmX250 mm，粒径:5μπι，原厂货号:990967_202，柱温为30°C ;流动相为甲醇:水=80:20 (V/V)，流量:lmL/min，检测波长:287nm，进样体积:9yL，保留时间:15min ;根据所制标准工作曲线查找或计算，即得芝麻样品中芝麻林素的含量。
[0017]实施例2
与实施例1基本相同，不同之处在于:在步骤(2)中，加入芝麻粉体重量30倍的无水乙醇，用超声波、震荡器间歇处理25min。
[0018]实施例3
与实施例1基本相同，不同之处在于:在步骤(2)中，加入芝麻粉体重量40倍的无水乙醇，用超声波、震荡器间歇处理30min。
[0019]在以上实施例中所涉及的仪器设备如无特别说明，均为常规仪器设备；所涉及的工业原料如无特别说明，均为市售常规工业原料。
[0020]实施例4:检测条件的综合试验研宄
采用本发明测定方法，在不同条件下进行单因素试验，分析芝麻林素提取量的变化情况，试验过程和分析结果如下:
1.检测波长对芝麻林素提取量的影响
根据发明人前期所进行的大量试验研宄，芝麻素HPLC吸收图谱的吸收峰在287nm，而芝麻林素在287nm条件能够出现完整的峰值，因此，高效液相色谱法的检测波长参考芝麻素检测波长只考虑290nm附近的吸收峰，同时综合研宄了其在287、285、280、290、295、300,305,310等几个不同波长处的吸光度，比较不同波长条件下芝麻林素的吸