一种化学发光免疫试条及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及免疫生物传感器、化学发光光学检测制备技术领域，更具体地涉及一种化学发光免疫试条及其制备方法，该试条可以快速检测生物样品中蛋白质大分子或其它抗原分子浓度。
【背景技术】
[0002]对于血样、尿样等生物样品中的蛋白质大分子的快速检测中，免疫检测是最常用的一种技术。方法简便、特异性高。利用抗原和抗体特异性结合而建立的高选择性分析方法，进一步将探针技术引入分析中以实现在线检测。免疫检测包括酶联免疫分析法、荧光免疫法、电化学免疫法、电化学发光免疫法、化学发光免疫分析法等。免疫检测不仅可以检测大分子，如体液中的各种蛋白质等，还可以检测一些小分子，如小分子量的激素、抗生素、药物等。
[0003]POCT(point-of-care testing)也称之为即时检验，POCT实验技术仪器具有小型化、操作简单化、结果报告即时化的特点，开创了新的检验模式，可使患者尽早得到诊断结果。POCT实验技术缩短检验周转期，省去了标本复杂的预处理程序和时间，可以在采样现场分析。目前，POCT产品应用范围越来越广泛，它在综合的临床实验室、病房、门急诊、手术室、监护室、救护车、康复中心、血库、家庭康复机构、社区、农村诊所等都有实际的临床应用，且效果较好。
[0004]干化学技术，是将一种或多种反应试剂干燥固定在固体载体，例如纸片、胶片等上，使用被测样品中存在的液体作为反应介质，被测成分直接与固化于载体上的干试剂进行呈色、电流或发光反应。
[0005]随着技术的发展，免疫技术、POCT技术和干化学技术出现了交叉发展，由此诞生了诸如胶体金免疫试纸检测及荧光免疫试纸检测等技术。但是胶体金试纸的检测灵敏度不够、定量颜色检测不准确，通常只能用于定性或半定量分析，荧光免疫试纸需要专门的荧光检测设备，成本比较高。
【发明内容】
[0006]有鉴于此，本发明针对样品中蛋白大分子等极低浓度物质的快速检测需求，主要目的在于提供一种化学发光免疫试条及其制备方法，从而可以实现简单快速、高灵敏度的定量检测。
[0007]为了实现上述目的，作为本发明的一个方面，本发明提供了一种化学发光免疫试条，包括:
[0008]样品滴加区，采用亲水性材料制造，待测样品滴加在该区域；
[0009]捕获区，所述捕获区中固定有可以捕获待测样品中待检测分子的抗体、抗原和/或抗抗体；
[0010]化学发光检测区，所述检测区中固定有透明微粒子，所述透明微粒子表面修饰有能与所述待测样品中待检测分子结合的抗体、抗原和/或抗抗体，以及化学发光底物、化学发光稳定剂和/或增强剂，由于透明微粒子的结合放大作用，实现待测样品的微弱光的灵敏检测；
[0011]其中，所述透明微粒子由透明有机高分子材料制备。
[0012]其中，所述透明微粒子是直径在10nm?50 μπι之间的均勾透明球体，所述透明微粒子选自聚乙烯醇微球、聚乙烯基吡咯烷酮微球、壳聚糖微球、PVA-PS复合微球、聚乙烯醇-明胶微球、聚丙烯微球、聚乙二醇二丙烯酸酯微球、PEG-DA/HEMA共聚凝胶微球中的至少之一；以及
[0013]所述透明微粒子表面进行了羧基、羟基或巯基亲水功能团修饰。
[0014]其中，所述化学发光底物为鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、I，2- 二氧乙烷发光体或二氧杂环丁烷。
[0015]其中，当所述化学发光免疫试条采用HRP发光体时，所述化学发光稳定剂和增强剂选用荧光素、噻唑、碘苯酚、6-羟基苯并噻唑、4-碘苯硼酸和/或溴酚兰；当所述化学发光免疫试条采用ALP发光体系时，所述化学发光稳定剂和增强剂选用聚氯苄乙烯苄基二甲基铵 BDMQ、TMQ 和 / 或 BSA。
[0016]其中，当所述透明微粒子表面结合有抗抗体时，所述抗抗体进行了生物素标记。
[0017]其中，所述捕获区包括酶标单抗I结合区和单克隆抗体2捕获区，所述酶标单抗I结合区固定有酶标-单克隆抗体1，待测样品中的抗原与所述酶标-单克隆抗体I结合，形成“酶标-抗体1-抗原”复合物；所述单克隆抗体2捕获区固定有单克隆抗体2，待测样品中的抗原与所述单克隆抗体2结合，形成“酶标-抗体1-抗原-抗体2”复合物；以及
[0018]所述酶标单抗I结合区多余的酶标-单克隆抗体I随着液体的流动与所述化学发光检测区中透明微粒子表面的发光底物反应而发光，从而所述待测样品中抗原的浓度与所述化学发光检测区的发光强度呈负相关。
[0019]其中，所述酶标单抗I结合区中的酶标物为辣根过氧化物酶HRP或碱性磷酸酶ALP0
[0020]作为本发明的另一个方面，本发明还提供了一种化学发光免疫试条的制备方法，包括以下步骤:
[0021]步骤1、在透明衬底上，预粘一层亲水性薄纸，粘上玻璃纤维素膜，在所述玻璃纤维素膜上固定单克隆抗体2，干燥；
[0022]步骤2、在硝酸纤维素膜上固定修饰好的透明微粒子；所述透明微粒子由透明有机高分子材料制备，选自聚乙烯醇微球、聚乙烯基吡咯烷酮微球、壳聚糖微球、PVA-PS复合微球、聚乙烯醇-明胶微球、聚丙烯微球、聚乙二醇二丙烯酸酯微球、PEG-DA/HEMA共聚凝胶微球中的至少之一，直径在10nm?50μπι之间，且所述透明微粒子表面进行了羧基、羟基或巯基亲水功能团修饰；
[0023]步骤3、固定酶标单抗结合区的玻璃纤维素纸，喷涂酶标单克隆抗体1，干燥；
[0024]步骤4、固定样品垫玻璃纤维素纸。
[0025]步骤5、切条，密封干燥保存。
[0026]其中，步骤2中通过在所述硝酸纤维素膜上刻出长方形空白区域来固定所述透明微粒子，或者通过将所述透明微粒子直接喷涂在所述硝酸纤维素膜表面来固定所述透明微粒子。
[0027]其中，步骤3中所述酶标单抗I结合区中的酶标物为碱性磷酸酶ALP，所述碱性磷酸酶进行了链霉亲和素标记。
[0028]基于上述技术方案可知，本发明的化学发光免疫试条相对于现有胶体金免疫试条检测灵敏度更高，可以与便携式光学检测仪结合，实现简单快速、高灵敏的精确定量检测；本发明的化学发光免疫试条结合了化学发光技术、免疫技术、层析技术、微粒子技术，实现了对样品中低浓度蛋白质大分子等物质的快速定量和一步式的现场检测，可用于急诊检测、现场快速筛查或者家庭快速自测等。
【附图说明】
[0029]图1是本发明的化学发光免疫试条的结构示意图；
[0030]图2是在发光检测区的本发明的透明微粒子的反应示意图。
【具体实施方式】
[0031]为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明作进一步的详细说明。
[0032]胶体金试纸检测技术灵敏度不够高，一般只能用于定性或半定量检测；而现有的化学发光技术通常都需要多步操作，需要分离等步骤，难以实现一步式的快速、简易操作。本发明通过将免疫技术和化学发光技术结合，综合了化学发光的高灵敏度和免疫分析技术的高选择性，在抗体上标记的酶标物质与发光底物结合后，发生反应产生光子，光子的强度与待测物的浓度呈正相关或负相关，从而可以通过便携式检测仪进行光学定量检测