，快速便捷地得出待测物的浓度。
[0033]此外，通常在液相化学发光检测步骤中，待测物与酶标抗体I结合形成酶标抗体1-抗原-抗体2-磁珠的复合物；磁分离后，将多余抗体去除；加入发光底物，在酶作用下，产生化学发光。而本发明为了减少分离、洗涤、加入发光底物等反应步骤，并与层析试条技术相结合，与通用的液相免疫化学发光和层析试条的反应都不同，形成酶标抗体1-抗原-抗体2复合物固定在捕获带上，多余的酶标抗体I与发光底物反应，抗原浓度与光强度呈现负相关的技术方案。
[0034]由此，本发明公开了一种化学发光免疫试条，包括样品滴加区、捕获区、化学发光检测区、废液吸水区和衬底。该化学发光免疫试条可以用于生物样品中蛋白大分子等极低浓度物质的快速检测。所述化学发光免疫试条是基于层析原理和免疫化学发光原理制备的集成试条，其中，
[0035]样品滴加区，采用高亲水性材料，待测样品即滴加在该区域；
[0036]捕获区，所述捕获区中固定有可以捕获待测样品中待检测分子的抗体、抗原和/或抗抗体；
[0037]作为一个优选，捕获区包括酶标单抗I结合区和抗原捕获带，其中，
[0038]酶标单抗I结合区，为酶标-单克隆抗体I的储存区域，待测样品中的抗原与该酶标-单克隆单抗I结合，形成“酶标-抗体1-抗原”复合物；
[0039]抗原捕获带，也称之为固定单抗2反应区，为单克隆抗体2的固定区域，复合物流动到该区，抗原与固定单克隆抗体2结合，形成“酶标-抗体1-抗原-抗体2”复合物，从而使该复合物被捕获固定在该区域；
[0040]化学发光检测区，由透明有机高分子材料制备，是结合抗抗体和发光底物的透明微粒子的固定区域，同时固定有化学发光稳定剂和/或增强剂。透明微粒子表面修饰了二抗(抗抗体)和高效化学发光底物，当过量的酶标抗体I流动到该固定有透明微粒子的区域，二抗特异性识别酶标单抗1，酶标物与发光底物结合并稳定发光，且由于透明微粒子的结合放大作用，实现了微弱光的灵敏检测，从而可以定量得到抗原的浓度。
[0041]其中，所述的样品滴加区采用高多孔材料，待测样品滴加在该区域可迅速被渗入样品垫，并且能快速移动，不在样品垫储留；样品垫材料，例如可以采用玻璃纤维纸、滤纸等；样品滴加区需要进行材料预处理，预处理液包括大分子亲水材料、蛋白质保护性材料或表面活性剂。
[0042]所述的酶标单抗I结合区中，酶标物可以是辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)或喊性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)。喊性磷酸酶可以进行链霉亲和素标记。
[0043]所述的酶标单抗I结合区可以采用玻璃纤维素纸、滤纸等材料制备，结合区材料先进行预处理并干燥后，喷涂酶标-单克隆抗体I，低温干燥。
[0044]所述的抗原捕获带采用硝酸纤维素薄膜材料制备，为单克隆抗体2的固定区域，单克隆抗体2采用喷涂或划线方式固定在硝酸纤维素膜材料上，当复合物流动到该区，复合物中的抗原与固定的单克隆抗体2结合，形成“酶标-抗体1-抗原-抗体2”复合物，从而使该复合物被捕获固定在该区域。
[0045]所述透明微粒子化学发光检测带中，透明微粒子是直径在10nm?50 μm之间的均匀透明球体，表面进行了亲水化处理，例如采用羧基、羟基或巯基等亲水功能团修饰，透明微粒子例如可以是ST-EVB(苯乙烯和二乙烯苯共聚物)、PMMA(聚甲基丙烯酸酯)、PVA(亲水性聚乙烯醇)、PVP(聚乙烯基吡咯烷酮)、壳聚糖(CS)、PVA-PS复合微球、PET(聚对苯二甲酸乙二醇酯)微球、聚乙烯醇-明胶、PAA(聚丙烯)、聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)、PEG-DA/HEMA共聚凝胶微球等材料中的一种或多种。
[0046]所述的透明微粒子化学发光检测带中，发光底物可以是鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物、1，2_ 二氧乙烷发光体、二氧杂环丁烷等。发光稳定剂和增强剂，例如荧光素、噻唑、碘苯酚、6-羟基苯并噻唑、4-碘苯硼酸、溴酚兰等可用于HRP发光体系；或者例如聚氯苄乙烯苄基二甲基铵(BDMQ)、防老剂RD(TMQ)或牛血清白蛋白(BSA)等可用于ALP发光体系。
[0047]透明微粒子表面修饰的抗抗体可进行生物素标记。
[0048]所述的废液吸水区由具有强吸水性的材料制备而成，多余的样品液体被吸收储存在此处。
[0049]所述的衬底为该化学发光免疫试条的支撑结构，可选用不透明支撑材料或透明塑料基材制成，从而结合不同的光学测量仪器，利于不同设备的光学定量检测。优选衬底采用硝酸纤维素膜(NC膜)制造。
[0050]本发明还公开了一种化学发光免疫试条的制备方法，包括以下步骤:
[0051]步骤1、在透明衬底上，预粘一层亲水性薄纸，粘上玻璃纤维素膜，玻璃纤维素膜上固定单克隆抗体2，干燥；粘好吸水纸材料。
[0052]步骤2、在硝酸纤维素膜上固定修饰好的透明微粒子；可以在其上刻出长方形空白区域来固定该透明微粒子，也可以将该透明微粒子直接喷涂在该硝酸纤维素膜表面。
[0053]步骤3、固定酶标单抗结合区的玻璃纤维素纸，喷涂酶标单克隆抗体1，干燥；
[0054]步骤4、固定样品垫玻璃纤维素纸。
[0055]步骤5、切条，密封干燥保存。
[0056]其中，当采用在硝酸纤维素膜上刻出的长方形凹槽或断口中固定修饰好的透明微粒子时，透明微粒子需要进行修饰。透明微粒子既考虑其透明性，又要考虑其干燥后的稳定性和复溶后的试剂灵敏度和透明度。透明微粒子微球表面结合了抗抗体和发光底物，同时固定有化学发光稳定剂和增强剂。
[0057]下面结合附图及具体实施例对本发明的方案作进一步的阐述说明。
[0058]图1示出了作为本发明一个优选实施例的化学发光免疫试条的结构示意图。如图所示，本发明的化学发光免疫试条包括样品滴加区1、酶标单抗I反应区2、抗原捕获带3、透明微粒子化学发光检测带4、废液吸水区5和衬底6。
[0059]其中，样品滴加区I采用高多孔材料，具体地说，样品垫材料采用玻璃纤维素纸并进行材料预处理，预处理液为大分子亲水材料。
[0060]酶标单抗I结合区2中，酶标物为碱性磷酸酶(ALP)。碱性磷酸酶进行了链霉亲和素申不I己O
[0061]酶标单抗I结合区2采用玻璃纤维素纸制备，制备好并进行预处理、干燥之后，再喷涂酶标-单克隆抗体1，低温干燥。
[0062]抗原捕获带3采用NC膜制备，为单克隆抗体2的固定区域，单克隆抗体2采用喷涂方式固定在NC膜上。
[0063]光学检测带4采用NC膜制备，并通过在NC膜上刻出长方形断口来固定修饰好的透明微粒子，透明微粒子选用PVA材料制备，直径在10nm?50 μ m之间的均勾透明球体，其表面采用羧基或羟基亲水功能团修饰，并结合有抗抗体和聚氯苄乙烯苄基二甲基铵(BDMQ)稳定剂和增强剂。
[0064]废液吸水区5采用强吸水性材料制备，衬底6采用NC膜制备。
[0065]作为本发明一个优选实施例，本发明还公开了上述化学发光免疫试条的制备方法，包括以下步骤:
[0066]步骤1、在透明NC膜衬底6上，预粘一层亲水性薄纸，粘上NC膜(膜预先切割出长方形空...