白区，用于预留透明微粒子固定带)，NC膜上固定单克隆抗体2，干燥；粘好吸水纸材料。
[0067]固定在上述的长方形空白区中。
[0068]步骤3、在衬底6上固定酶标单抗结合区2的玻璃纤维素纸，喷涂酶标单克隆抗体1，干燥。
[0069]步骤4、最后固定样品垫I的玻璃纤维素纸。
[0070]步骤5、切条，密封干燥保存。
[0071]此外，本发明还公开了制备化学发光免疫试条的另一优选实施例。预处理工作将用于样品垫和单抗反应垫的玻璃纤维纸用含0.1 % TritonX-1OO的PBS (磷酸)缓冲液预处理并干燥备用。单抗反应垫上均匀喷涂Abl-ALP (碱性磷酸酶标记单克隆抗体I)复合物；喷量为2?5 μ 1/cm，室温干燥。将NC膜预切出长方形(ImmX 3mm)化学检测带，距离化学发光检测带5mm处喷涂抗原捕获带，将单抗2喷涂在该区域，喷量为I?2 μ 1/cm，干燥备用。选用PVA-PS复合透明微粒子修饰好抗抗体I和⑶P-Star ( 二氯-5-(4-甲氧基{1，2_ 二氧杂环丁烷-3，2’_(5’_氯)三环[三硫杂三环[3.3.1.13，7]}-4-苯基磷酸酯)发光底物，加入氯化十六烷三甲基铵CTAC等增强剂和牛血清白蛋白BSA等稳定剂。然后在透明塑料基板PET底板上，粘上NC膜和吸水纸，接着依次粘贴上单抗反应垫和样品垫，然后在化学发光检测带用微注射器加入修饰好的透明微粒子材料，切条，密封保存。
[0072]经过实验验证，发现本发明的化学发光免疫试条的检测灵敏度远高于现有技术中的胶体金试纸，完全可以胜任生物样品中蛋白大分子等极低浓度物质的快速检测。
[0073]本发明用了优选实施例进行说明，优选实施例只是为了说明的目的，而不是对本发明的限制。在上述说明的基础上可以对本发明作许多改进和改变。因此，在所附权利要求书的范围内，本发明可以有不是上述的其它实现方式。例如:微粒子种类(如方框形等)、化学发光试剂组合、化学发光带的制备方式等。
[0074]以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种化学发光免疫试条，包括: 样品滴加区，采用亲水性材料制造，待测样品滴加在该区域； 捕获区，所述捕获区中固定有可以捕获待测样品中待检测分子的抗体、抗原和/或抗抗体； 化学发光检测区，所述检测区中固定有透明微粒子，所述透明微粒子表面修饰有能与所述待测样品中待检测分子结合的抗体、抗原和/或抗抗体，以及化学发光底物、化学发光稳定剂和/或增强剂，由于透明微粒子的结合放大作用，实现待测样品的微弱光的灵敏检测； 其中，所述透明微粒子由透明有机高分子材料制备。
2.如权利要求1所述的化学发光免疫试条，其特征在于，所述透明微粒子是直径在10nm?50 μπι之间的均勾透明球体，所述透明微粒子选自聚乙稀醇微球、聚乙稀基卩比略烧酮微球、壳聚糖微球、PVA-PS复合微球、聚乙烯醇-明胶微球、聚丙烯微球、聚乙二醇二丙烯酸酯微球、PEG-DA/HEMA共聚凝胶微球中的至少之一；以及 所述透明微粒子表面进行了羧基、羟基或巯基亲水功能团修饰。
3.如权利要求1所述的化学发光免疫试条，其特征在于，所述化学发光底物为鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、I，2- 二氧乙烷发光体或二氧杂环丁烷。
4.如权利要求1所述的化学发光免疫试条，其特征在于，当所述化学发光免疫试条采用HRP发光体时，所述化学发光稳定剂和增强剂选用荧光素、噻唑、碘苯酚、6-羟基苯并噻唑、4-碘苯硼酸和/或溴酚兰；当所述化学发光免疫试条采用ALP发光体系时，所述化学发光稳定剂和增强剂选用聚氯苄乙烯苄基二甲基铵BDMQ、TMQ和/或BSA。
5.如权利要求1所述的化学发光免疫试条，其特征在于，当所述透明微粒子表面结合有抗抗体时，所述抗抗体进行了生物素标记。
6.如权利要求1所述的化学发光免疫试条，其特征在于，所述捕获区包括酶标单抗I结合区和单克隆抗体2捕获区，所述酶标单抗I结合区固定有酶标-单克隆抗体1，待测样品中的抗原与所述酶标-单克隆抗体I结合，形成“酶标-抗体1-抗原”复合物；所述单克隆抗体2捕获区固定有单克隆抗体2，待测样品中的抗原与所述单克隆抗体2结合，形成“酶标-抗体1-抗原-抗体2”复合物；以及 所述酶标单抗I结合区多余的酶标-单克隆抗体I随着液体的流动与所述化学发光检测区中透明微粒子表面的发光底物反应而发光，从而所述待测样品中抗原的浓度与所述化学发光检测区的发光强度呈负相关。
7.如权利要求6所述的化学发光免疫试条，其特征在于，所述酶标单抗I结合区中的酶标物为辣根过氧化物酶HR或碱性磷酸酶ALP。
8.一种化学发光免疫试条的制备方法，包括以下步骤: 步骤1、在透明衬底上，预粘一层亲水性薄纸，粘上玻璃纤维素膜，在所述玻璃纤维素膜上固定单克隆抗体2，干燥； 步骤2、在硝酸纤维素膜上固定修饰好的透明微粒子；所述透明微粒子由透明有机高分子材料制备，选自聚乙烯醇微球、聚乙烯基吡咯烷酮微球、壳聚糖微球、PVA-PS复合微球、聚乙烯醇-明胶微球、聚丙烯微球、聚乙二醇二丙烯酸酯微球、PEG-DA/HEMA共聚凝胶微球中的至少之一，直径在10nm?50μπι之间，且所述透明微粒子表面进行了羧基、羟基或巯基亲水功能团修饰； 步骤3、固定酶标单抗结合区的玻璃纤维素纸，喷涂酶标单克隆抗体1，干燥； 步骤4、固定样品垫玻璃纤维素纸。 步骤5、切条，密封干燥保存。
9.如权利要求8所述的化学发光免疫试条的制备方法，其特征在于，步骤2中通过在所述硝酸纤维素膜上刻出长方形空白区域来固定所述透明微粒子，或者通过将所述透明微粒子直接喷涂在所述硝酸纤维素膜表面来固定所述透明微粒子。
10.如权利要求8所述的化学发光免疫试条的制备方法，其特征在于，步骤3中所述酶标单抗I结合区中的酶标物为碱性磷酸酶ALP，所述碱性磷酸酶进行了链霉亲和素标记。
【专利摘要】一种化学发光免疫试条及其制备方法，该免疫试条包括样品滴加区、抗原捕获区和化学发光检测区，其中样品滴加区采用高亲水性材料制备，用于滴加待测样品；抗原捕获区固定有可捕获待测样品中待检测分子的抗体、抗原和/或抗抗体；化学发光检测区中固定有透明微粒子，透明微粒子表面修饰有能与待测样品中待检测分子结合的抗体、抗原和/或抗抗体，以及化学发光底物、稳定剂和/或增强剂，由于透明微粒子的结合放大作用，实现待测样品的微弱光灵敏检测；其中，所述透明微粒子由透明有机高分子材料制备。本发明的化学发光免疫试条具有检测方便、灵敏度高、一步式定量检测、易保存等优点，不需要外加试剂，可实现一滴血样或尿样的快速定量检测。
【IPC分类】G01N33-68, G01N21-76
【公开号】CN104849264
【申请号】CN201510309585
【发明人】刘春秀, 蔡浩原
【申请人】中国科学院电子学研究所
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月8日