22]ARDS相关生物标志物是指存在于来源于患者的样品中的一组生物标志物。该组生物标志物包含至少两种、优选2-8种生物标志物、特别是约5种生物标志物，其中之一是CD73蛋白。作为其它生物标志物的实例可提及细胞因子，其是在生物体中用作信号转导化合物的蛋白质或肽。细胞因子包括例如干扰素、白介素特别是IL-6、趋化因子例如嗜伊红粒细胞趋化蛋白。作为其它生物标志物的实例可提及CRP (C-反应蛋白)和其它五聚环蛋白。
[0023]优选生物标志物选自:IL-1β、IL-lra、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12 (p70)、IL-13、IL-15、IL-17A、碱性 FGF、嗜伊红粒细胞趋化蛋白、G-CSF,GM-CSF、IFN-γ、IP-10、MCP-1、MIP-1α ,MIP-1β 、PDGF-BB、RANTES、TNF-α 、VEGF、IL-Ια 、IL-2Ra、IL-3、IL-12 (p70)、IL-16、IL-18、CTACK、GRO-a、HGF、IFN-a 2、LIF、MCP-3、M-CSF、MIF、MIG、β-NGF、SCF、SCGF-β、SDF-1 a , TNF- β、TRAIL、CD73、CRP、新蝶呤、MxA 和β-2-微球蛋白。
[0024]特别优选的生物标志物组包括⑶73和IL-6、这两种生物标志物或这两种生物标志物与一种或几种另外的生物标志物组合。具体地说，所述另外的生物标志物选自IL-8、IL-15、嗜伊红粒细胞趋化蛋白、MPC-UMIP-1a和IL_lra。优选所述生物标志物组包含生物标志物CD73、IL-6、IL-8、IL-15、嗜伊红粒细胞趋化蛋白、MPC-1、MIP-1a和IL-1ra的3-8种，条件是它们的至少两种是⑶73和IL-6。特别优选的组包含所有8种生物标志物⑶73、IL-6、IL-8、IL-15、嗜伊红粒细胞趋化蛋白、MPC-UMIP-1a 和 IL-lra。
[0025]在一个备选方法中，确定了生物标志物的活性。这通过例如采用薄层色谱法或通过将样品加入生物标志物的底物中，并监测所述底物的变化来进行。
[0026]例如，可按照已公布的方法，采用薄层色谱法测量生物标志物的活性。还可采用测量合适底物的转化的任何酶测定来测量活性。例如对于CD73，通过AMP或可用作CD73底物的另一种嘌呤单核苷酸转化成相应的核苷来测量活性。例如，测定可基于放射性或荧光标记的底物的转化。检测方法可依赖于底物浓度降低或产物浓度增加或磷酸基释放的定量。可通过在已知的CD73抑制剂Hf^nAMPCP)存在和不存在时进行该测定，来确定反应的⑶73依赖性。
[0027]—般而言，用于活性测量的报道细胞系是这样的基因工程细胞系，其中目标化合物或分子(即生物标志物)特异性地诱导报道基因表达。这类报道基因表达可导致光产生或可定量的另一种可测量的功能。报道基因活性的定量可然后用于计算目标化合物或分子的活性和/或水平。
[0028]对上述生物标志物特异的单克隆抗体描述于文献中，并且可获自许多商业来源，例如 B1-Rad Laboratories, Inc.，Jena B1science GmbH 和 Sino B1logical，Inc。
[0029]为了定量“ARDS相关生物标志物”，所述生物标志物应被发现与ARDS疾病的状态相关使得生物标志物随时间的水平变化表明疾病状态的变化。具有最强相关性的这些生物标志物将合并成ARDS生物标志物组。例如，⑶73从一个时间点到后一时间点的水平提高表明用治疗活性剂治疗的功效，和由此的ARDS消退。然而，对于CRP，水平提高表明疾病恶化。因此重要的是，首先研究待各个合适的生物标志物以查明是否其水平的提高或降低对于疾病状态是有利变化或不利变化。
[0030]“生物亲和力测定”当生物标志物是蛋白质时可为免疫测定。或者，它当生物标志物是核酸时是指杂交测定。
[0031]当待确定的生物标志物是蛋白质或肽时，“结合剂”(俘获结合剂或标记的结合剂)是指抗体等(例如亲和体(affibodies)和适体)。如果生物标志物是核酸，则结合剂优选为寡核苷酸。
[0032]术语“固体支持物”是例如携带标记的微球或珠粒。或者，固体支持物是指微量滴定板或芯片。优选固体支持物是适用于生物芯片技术的芯片，例如微阵列。在此，微阵列是生物芯片技术组件中的组分，所述生物芯片技术组件包含用于转导、信号处理和结果显示的更多装置。
[0033]术语“抗体”应理解为包括多克隆和单克隆抗体、其任何片段和基因工程抗体。
[0034]“标记”可以是例如酶或荧光标记。特别优选的荧光标记组是时间分辨荧光标记，例如镧系螯合物。如果标记是酶，则加入所述酶的底物，其中酶与其底物间的后续反应产生可检出的信号。如果标记是荧光标记，则通过辐射(例如通过激光)进行激发，其中产生可检出信号。
[0035]优选待确定的所有生物标志物是蛋白质或肽，其每一个都可固定在某种俘获抗体上。在这种情况下，标记的结合剂也是抗体。各标记抗体定向到某种生物标志物的表位，其中所述表位不同于与俘获抗体结合的表位。
[0036]多种ARDS相关生物标志物使用所阐述的生物亲和力测定从样本中同时确定，例如以下:将俘获结合剂固定在固体支持物表面的预定位置上，通常在微量滴定板等的生物素化点或孔上。俘获结合剂因此将以阵列的形式排列在固体支持物(微量滴定板)上。各俘获结合剂对待确定的某种生物标志物是特异的。将样品加到阵列上并使其中的生物标志物与固定化俘获结合剂一起温育，使得各生物标志物固定在相应的俘获结合剂上。
[0037]生物标志物的检测可以两种方式进行:通过所谓的非竞争性“三明治测定”或通过竞争测定。在非竞争测定中，将标记的生物亲和力组分(例如标记抗体)加入携带固定化生物标志物的板中。在温育和任选除去未结合的标记生物亲和力组分后，激发标记以产生可检出信号。在这种类型的测定中，信号的强度与固定化生物标志物的浓度成正比。微量滴定板上“三明治”的位置报告哪种生物标志物被检出。
[0038]在Luminex?技术中，将俘获抗体固定在珠粒上，所述珠粒用焚光颜料标记使得某种颜色是指某种俘获抗体。在与含有待检测的生物标志物的样品一起温育且随后加入一组第二抗体(用不同于珠粒颜色的荧光颜色标记的标记抗体)时，形成包含“珠粒-俘获抗体-生物标志物-标记抗体”的三明治。将每一种这类三明治转移到流式细胞仪中，使用双激光器对各三明治进行分类和定量。
[0039]在竞争测定中，使携带来源于样品的固定化生物标志物的板经过一组标记抗原处理，其中各标记抗原能够与来源于样品的相应的固定化生物标志物竞争俘获结合剂上的结合位点。当标记被激发时，检出的信号将与来源于样品的生物标志物的浓度成反比。
[0040]通过参照附图，其中图1A显示具有点S1-S5的支持物(微量滴定板)，更详细地对本发明进行说明。俘获抗体C1-C5与预定的点结合(图1B)，所述点可被生物素化以能够结合其上的俘获抗体。各俘获抗体对待确定的某种生物标志物B1-B5是特异的。在将样品加入图1B所示的板中时，各俘获抗体将固定针对其产生俘获抗体的生物标志物。可洗去未结合的生物标志物，之后加入标记抗体L1-L5，其中一种标记抗体对某种固定化生物标志物是特异的。在标记L激发(照射或加入酶底物，这取决于标记L)时，产生可检出信号。
[0041]虽然标记抗体可以是一个单一的携带必要特异性和标记的抗体，但是标记抗体可备选地为定向至生物标志物的第一抗体(PA)和携带标记L并结合第一抗体的Fe区的第二抗体(SA)的套件。参见图2。该套件避免了针对可能想要检测的每个生物标志物都产生标记抗体的昂贵工序。
[0042]当用对在不同时间点提取的样品重复该方法时，记录从各个标记抗体获得的信号，并相对于时间作图(图3)。对于一些生物标志物(BI和B2)，水平提高表示患者疾病的有利变化，而B3和B4的水平降低也表示有利变化。相反，B5的水平降低表示患者疾病的不利变化，因此曲线优选用不同的标记或颜色画出，以便快速与表示有利变化的曲线区分开。
[0043]将来自确定的数据，任选与临床观察结果、治疗手段等一起收集入数据库。
[0044]通过下列非限制性实施例对本发明进行说明。
[0045]实施例1
在临床研究中，连续6天给予26名患有ALI或ARDS的患者10微克干扰素β-1a的剂量。如果与未治疗观察到的正常频度相比，该治疗降低死亡达75%。针对以下生物标志物分析来源于患者的血清样品:IL-lra (ra=受体拮抗剂)、IL_6、IL_8、IL-15、嗜伊红粒细胞趋化蛋白、MCP-1 (单核细胞趋化蛋白I)、