MIP-1a (巨噬细胞炎性蛋白)和CD73。在图4a)_h)中，各生物标志物的水平(CD73的活性)表示为所有患者的平均值以及均值的标准误差(S.E.M)，对时间作图。第I天是指干扰素β给予前的值。第2天是指第一次干扰素β给予后22小时的值；第3天是指第二剂(第2天)后22小时的值等。第7天表示最后给予干扰素β后22小时的水平。图4显示生物标志物IL-lra、IL-6, IL-8, IL-15和MCP-1的水平随时间即随患者恢复快速下降。另一方面，可溶性CD73活性(nmol/mL/小时)提高直到第9天，即最后一剂后两天，接着向基线值下降。生物标志物嗜伊红粒细胞趋化蛋白和MIP-1a的水平也随时间即随患者恢复提高。
[0046]实施例2
采用之前公布的基于薄层色谱法的技术在上述研究中的所示时间点(参见图5)测量受治疗的患者之一的样品的可溶性CD73活性。该名患者显示可溶性CD73活性的极强的诱导。基于使用三明治测定中俘获抗体和检测抗体的ELISA测定，测量可溶性CD73浓度。测量同一样品的等分试样的可溶性CD73的活性和浓度。图5显示可溶性CD73活性和浓度表现类似。
[0047]要认识到，本发明的方法可以各种各样实施方案的形式结合，所述实施方案仅少数公开于本文中。对本领域专业技术人员而言显而易见的是，存在其它实施方案，并且不偏离本发明的精神。因此，所述实施方案是说明性的，不应解释为限制性的。
【主权项】
1.一种用于同时确定从患者中提取的样品中的多种ARDS (急性呼吸窘迫综合征)相关生物标志物的方法，其中所述生物标志物之一是⑶73蛋白，所述方法包括 i)通过将样品加入识别生物标志物的结合剂中定量所述样品中生物标志物的水平，或 ii)通过采用例如薄层色谱法或通过将所述样品加入生物标志物的底物中，并监测所述底物的变化确定所述样品中生物标志物的活性。2.权利要求1的方法，所述方法为用于同时确定从患者中提取的样品中的多种ARDS相关生物标志物的生物亲和力测定方法，其中所述生物标志物之一是⑶73蛋白，所述方法包括以下步骤 a)使一组俘获结合剂与包含几种待确定的生物标志物的样品接触，其中各俘获结合剂对待确定的某种生物标志物是特异的， b)使样品中的生物标志物与俘获结合剂一起温育，使得所述各生物标志物与相应的俘获结合剂结合， c)将一组标记的生物亲和力组分加入步骤b)的阵列中，其中这类标记的生物亲和力组分各自具有对与俘获结合剂结合的某种生物标志物特异的生物亲和力，或其中这类标记的生物亲和力组分各自具有与待确定的某种生物标志物竞争俘获结合剂上的结合位点的能力， d)激发标记使得形成可检出信号， e)将信号与对照进行比较以表明样品中某种生物标志物的存在和/或表明某种生物标志物的水平。3.权利要求2的方法，其中 a)将各俘获结合剂固定在支持物表面的预定位置上，使得俘获结合剂以阵列的形式排列在支持物上， b)将样品加入阵列中，并使其中的生物标志物与固定化结合剂一起温育， c)将一组标记的生物亲和力组分加入步骤b)的阵列中，其中这类标记的生物亲和力组分各自具有对某种固定化生物标志物特异的生物亲和力，或其中这类标记的生物亲和力组分各自具有与某种固定化生物标志物竞争俘获结合剂上的结合位点的能力， d)激发标记使得形成可检出信号， e)将信号与对照进行比较以表明样品中某种生物标志物的存在和/或表明某种生物标志物的水平。4.权利要求1、2或3的方法，其中除CD73以外的所述生物标志物选自细胞因子，特别是白介素例如IL-6、趋化因子和嗜伊红粒细胞趋化蛋白、C-反应蛋白和其它五聚环蛋白，且其中包括⑶73和另外的生物标志物的生物标志物的数目为至少2种、优选2-50种、更优选2-8种ο5.权利要求2-4中任一项的方法，其中所述方法是免疫测定方法，其中所述俘获结合剂是抗体、适体或亲和体，优选单克隆抗体。6.权利要求5的方法，其中所述方法是三明治免疫测定，其中所述标记的生物亲和力组分是抗体、适体或亲和体，优选单克隆抗体，其各自定向至不同于生物标志物上被俘获结合剂占据的表位的表位。7.权利要求5的方法，其中所述方法是竞争方法，其中所述标记的生物亲和力组分是一组标记抗原，其中各标记抗原能够与相应的来源于样品的固定化生物标志物竞争俘获结合剂上的结合位点。8.权利要求2-7中任一项的方法，其中所述标记是酶或荧光标记。9.权利要求8的方法，其中所述标记是酶，并加入所述酶的底物，其中酶与其底物之间的后续反应产生可检出信号。10.前述权利要求中任一项的方法，其中对在一定时间后从患者中提取的另一样品中重复所述方法，并且将归因于每一种生物标志物的信号与之前测定的相应信号进行比较，并记录差异。11.一种在用于同时确定从患者中提取的样品中的多种ARDS相关生物标志物的生物亲和力测定方法中使用的诊断试剂盒，其中包括⑶73和另外的生物标志物的生物标志物的数目为至少2种、优选2-50种、最优选2-8种，所述试剂盒包含: -固定在固体支持物或能够固定在固体支持物上的一组俘获结合剂，其中各俘获结合剂对待确定的某种生物标志物是特异的，和 -一组标记的生物亲和力组分，其中这类标记的生物亲和力组分各自具有对某种固定化生物标志物特异的生物亲和力，或其中这类标记的生物亲和力组分各自具有与某种固定化生物标志物竞争结合位点的能力。12.权利要求11的试剂盒，其中所述俘获结合剂是抗体，优选单克隆抗体。13.权利要求11或12的试剂盒，其中所述标记的生物亲和力组分是抗体，优选单克隆抗体，各抗体定向至不同于生物标志物上被俘获结合剂占据的表位的表位。14.权利要求11-13中任一项的试剂盒，其中所述标记是酶或荧光标记。15.权利要求14的试剂盒，其中所述标记是酶，且其中试剂盒任选还包含含有所述酶的底物的物质。16.权利要求11-15中任一项的试剂盒，其中将所述俘获结合剂固定在固体支持物上，所述固体支持物是适用于生物芯片技术的芯片，例如微阵列。17.权利要求16的试剂盒，其中所述微阵列是生物芯片技术套件中的组分，其包含用于转导、信号处理和结果显示的另外的装置。18.权利要求11-15中任一项的试剂盒，其中将所述俘获结合剂固定在固体支持物上，所述固体支持物是携带标记的微球。19.权利要求11-18中任一项的试剂盒，其中所述俘获结合剂被生物素化，并因此能够固定在经链霉抗生物素处理的固体支持物上。20.一种用于监测患者的ARDS的发展的方法，其中确定了在不同时间点从患者中提取的样品中的至少2种、优选2-50种、最优选2-8种ARDS相关生物标志物，且其中所述生物标志物之一是CD73蛋白，所述方法基于将在较晚时间点提取的样品中获得的生物标志物的水平或活性与在先前时间点提取的样品中的相同生物标志物的水平或活性进行比较，其中某种生物标志物的水平或活性的有利变化表示疾病消退，而其中某种生物标志物的水平或活性的不利变化表示疾病恶化。21.权利要求20的方法，其中所述生物标志物通过权利要求1-10中任一项的方法确定。22.—种用于通过给予患者有效治疗ARDS的治疗活性剂来治疗患有ARDS的患者的方法，其中按照权利要求20-21，用于监测ARDS发展的一种或多种生物标志物 -一停止显示有利变化，或 -一开始显示不利变化 就开始给药。23.权利要求22的方法，其中所述治疗活性剂是干扰素β。
【专利摘要】本发明涉及用于监测患者的ARDS的发展和用于治疗ARDS的方法。用于监测ARDS的发展的方法基于将在较晚时间点提取的样品中获得的生物标志物的水平或活性与先前时间点提取的样品中的同一生物标志物的水平或活性进行比较。某种生物标志物的水平或活性的有利变化表示疾病消退(患者恢复)，相反地，某种生物标志物的水平或活性的不利变化表示疾病恶化。例如如果所监测的一种或多种生物标志物的水平或活性停止显示有利变化或开始显示不利变化，则通过给予可用于治疗ARDS的治疗活性剂，加强对患者的治疗。本发明另外涉及用于同时确定来自患者的样品中的多种生物标志物的方法，其中所述生物标志物与ARDS有关。确定了生物标志物的水平或活性。本发明还涉及可用于实施所述方法的诊断试剂盒，特别是包含适用于生物芯片技术的芯片（例如微阵列）的试剂盒。
【IPC分类】C07K14/705, G01N30/90, G01N33/573, C12N9/16, C07K14/565
【公开号】CN105164535
【申请号】CN201480008939
【发明人】M·马克斯茅, M·萨尔米, M·亚尔卡宁, S·亚尔卡宁
【申请人】法龙药品公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2014年1月22日
【公告号】CA2898111A1, EP2956772A1, WO2014125164A1