测量dsDNA、ANA、抗MCV和ENA抗体作为体内诊断。除了抗MCV，使用制 造商的临界值用于所有的化ISA。
[0121] 研究群体的选择 [012引纳入梳准:
[0123] ?能够阅读、理解和签署知情同意书
[0124] ? > 18 岁
[0125] ?同意并能够收集血液样品
[0126] ?具有风湿性疾病状况的受试对象必须落入W下2类中的一类
[0127] ?根据修订版的ACRCriteriafortheClassificationofSLE来诊断SLE
[0128] 表1示出了SLE的分类标准
[0129]表 1:SLE的ACR标准
[0130]
[0131] ? 11个标准中4个或更多个标准的任意组合，在患者经历的过程中的任何时间都 良好地归档，患者可能患有SLE。
[0132] ?被诊断患有W下风湿性疾病的一种：抗憐脂综合征（AP巧；纤维肌痛（仅ANA+ 患者）；系统性硬化病；类风湿性关节炎；多肌炎；皮肌炎；Wegeners肉芽肿；结节性多动脉 炎；冷球蛋白血症性血管炎；白细胞破裂性脉管炎；其他免疫血管炎；原发性Sjogren综合 征。
[0133] ?此外，招募大约200名正常健康志愿者（称为排除标准）。 阳134] 排除梳准:
[0135] ?仅对于正常健康志愿者：根据临床研究者的判断，临床明显的并发发病包括屯、血 管的，精神病学的，神经病学的，胃肠的（例如胃或十二指肠溃瘍、炎性肠病、GI出血史）， 代谢性的，肺部的（例如哮喘、C0PD)，肾（包括肾功能不全），肝脏的，血液学的，免疫学的， 内分泌的（例如甲状腺机能减退、糖尿病），主动感染或慢性感染病史度或C型肝炎或者 HIV)，肿瘤病和/或减肥手术史。
[0136] ?原发性免疫缺陷综合征的明显或试验室证明。
[0137] ?怀孕的或泌乳的妇女。
[0138] 试验过程
[0139] 总计800名受试对象的数据计划用于2组受试对象中，其中所述的800名受试对 象由大约300名SLE、300名非SLE风湿性疾病和200名健康对照组成，它们由美国大约15 个参与中屯、聚集而成。参与中屯、被鼓励招募相等熟练的SLE受试对象和其他风湿性疾病状 况的受试对象，从而保证样品平衡。由各受试对象抽取血液，用于CB-CAPS和其他血清学标 志物。
[0140] 提交给申办者的所有数据和血液样品都通过使用受试对象的ID编号而严格地保 持匿名的。各中屯、均分配到2个数字场所编号，并且各中屯、都分配给二次ID编号。各中屯、 负责保存研究编号列表和在他们的位点处的相关的受试对象名称。任何支持文件都除去所 有受试对象的标识符，并且所有血液样品仅通过受试对象ID编码和试验确认。此外，申办 者的临床试验对于所有受试对象的诊断都是盲态的。
[0141] 统计分析
[0142] 使用2. 15.0版本的R软件来进行统计分析。统计分析使用了受试者操作特征 (R0C)曲线下面积（SLE与非SLE患者，其排除了正常受试对象）并计算诊断敏感性和特异 性。对于各标志物使用合适的受试者操作曲线（单变量分析），此外还跟踪测定的指数值作 为多变量逻辑回归方程式的输出。作为性能的量度，计算敏感性和特异性。使用弃一交叉 验证法来计算所报告的性能统计（敏感性、特异性）R0CAUC。
[0143] 临床性能
[0144] 总计304名SLE患者（285名患者患有其他风湿性疾病，87. 8%为女性，平均年龄 为48岁）适用于分析。患有其他风湿性疾病的285名患者组包括RA(161名患者，85%为女 性，平均年龄为59岁），系统性硬化病（35名患者，80%为女性，平均年龄为53岁），多肌炎 /皮肌炎（PM/DM:27名患者，81 %为女性，平均年龄为56岁），原发性Sjogren综合征（33 名患者，94%为女性，平均年龄为56岁），W及29名患有多种其他风湿性疾病的患者（83% 为女性，平均年龄为55岁）（肉芽肿性血管炎[5名患者]，纤维肌痛[13名患者]，脉管炎
[10名患者]，抗憐脂综合征[1名患者])。此外，还招募总计205名的健康个体（66......为 女性，平均年龄为41岁）。
[0145] 表2 :2组中患者的分布
[0146]
[0147] 304名患者的特征示于表3中。
[0148] 表3 :所招赛的304名SLE患者的特征
[0149]
[0150] 在SLE诊断方法中使用标志物的单变量分析
[015。 在所有招募的受试对象（n= 794)中测定血清学标志物（ANA，抗dsDNA，抗MCV,SS-B/La,CENP,Scl-70,Smith)和CB-CAPS。ANA( > 20 个单位）为敏感性标志物 (91. 7%，279名SLE患者检验为阳性），而针对其他的风湿性疾病则很大程度上是非特异性 的巧2.3% )(表4)。
[0152]在304名SLE患者中，通过固相检测，总计101名SLE患者检验为抗dsDNA阳性 (33. 2%)，并且使用绿蛹短膜虫（化ithidiaLuciliae)间接免疫巧光检测（IN0V0诊断 学）证明97个检验结果证明为阳性，因此最终的敏感性为31. 9%巧7/304)。总计11名非 SLE受试对象化名RA，2名硬皮病、2名脉管炎和1名正常）通过化ISA检验为抗dsDNA阳 性（〉301个单位），但是其中的3名受试对象（2名RA和1名硬皮病）通过化ithidia检 验证明为非阳性，因此针对其他疾病的特异性为97. 2% (277/285)，针对正常健康个体为 99. 5% (204/205)。抗Smith具有较差的敏感性（14% )，但是为SLE的高度特异性标志物 (100% )。备选地，抗MCV(临界值为70个单位）、SS-B/La(〉10个单位）、5〇-70(〉10个单 位）和化-1 (〉1〇个单位）分别是类风湿性关节炎、Sjogren、硬皮病和PM/DM患者特异性的 (表 4)。
[0153] 表4 :通过单变量分析得到的标志物性能
[0154]
[0155] *Scl:硬皮病
[0156] 如表5中所示，SLE中EC4d和BC4d的水平比其他疾病或正常受试对象高几倍。 EC4d水平高于75个单位或者BC4d水平高于200个单位是SLE高度特异性的。仅患有其 他疾病的2/285受试对象（一名受试对象患有RA，一名受试对象患有脉管炎）分别呈现出 EC4d或BC4d水平高于75或200个单位（特异性99. 3% )。备选地，总计48名SLE患者 (16% )呈现出升高的EC4d或BC4d。
[0157] 此外，EC4d水平高于12MFI在区分NHV与SLE中达到97%的特异性，而BC4d水平 高于48个单位是96%特异性的。
[0158]表 5 :EC4d和BC4d的水平
[0159]
[0160] *Scl:硬皮病；结果表示为平均值+平均值的标准误差
[0161]多变量指数检测-数据的分析后降低
[0162] 所用的诊断方法使用了双层法。在层1中，抗dsDNA(〉301个单位；通过短膜虫 证明）、抗SmithOlO个单位；制造商的临界值，SLE的标准）或高的EC4d(〉75个单位） 或BC4d(〉200个单位）表明SLE。在层1为阴性的受试对象中进行测定的层2中，加权指 数得分累积了ANA成分（ANA>20个单位，>60个单位），CBCAI^S成分（对数归一化的 EC4d+BC4d)，和特异性成分，该特异性成分由抗MCV(〉70个单位；RA标志物）、SS-/La(〉10 个单位；Sjogren疾病标志物）、CENP/Scl-70 (〉10个单位；硬皮病标志物）或化-1 (〉10个 单位；多肌炎/皮肌炎）组成。指数〉〇表明SLE，双层结合得到整体的性能特征。图1概 括了所用的双层诊断方法。
[016引层1的性能特征
[0164] 在所招募的794名受试对象中，其中总计150名受试对象检验为层1标志物的至 少一种是阳性的（dsDNA〉301个单位，通过短膜虫证明；或者抗Sm〉10个单位；EC4d〉75个单 位；或者BC4d〉200个单位）。在运150名受试对象中，其中的140名受试对象患有SLE(敏 感性为46. 1%，140/304)，而其中的9名受试对象患有其他的风湿性疾病巧RA，1名系统性 硬化病，2名脉管炎，1名APS，W及1名正常）（特异性为96. 8%，276/285)。区分正常健康 受试对象的特异性为99. 5% (204/205)(表6)。
[016引表6:层1的阳性率
[0166]
[0167]
[016引在层1中为阳性的140名SLE患者中，其中总计48名患者（34. 3% )检验为 EC4d(〉75个单位）或BC4d(〉200个单位）阳性。由此断定通过逻辑回归，在层2中分析了 总计645名受试对象（165名SLE，276名其他疾病，W及在层1中检验为阴性的204名正常 健康者）。
[016引层2的性能特征
[0170] 在SLE(n= 165)和其他疾病（n= 111)的患者中，逻辑回归分析利用了ANA阳性 (通过化ISA，ANA成分），W及逻辑归一化的EC4d和BC4d水平（CBCAPS成分）和抗MCV(〉70 个单位）、SS-B/La(〉10个单位）、CENP(〉10个单位）、Sd-70 (〉10个单位）或化-1 (〉10个 单位）阳性的抗体特异性成分复合物。
[0171] 多变量逻辑回归的ANA成分使用了 2个阔值。其由阴性ANA(ANA<20个单位；在此 情况下，ANA成分受影响的值为0)、中阳性（ANA20-60个单位；在此情况下，ANA成分受影响 的值为1)和强阳性（〉60个单位；在此情况下，ANA成分受影响的值为2)组成。与患有其 他疾病的受试对象相比（111/276名受试对象，阳性率为40. 2% )，SLE中抗体特异性成分 的阳性率为9.1% (15/164阳性）。在层2中，仅3名正常受试对象是特异性成分阳性的。
[0172] 表7 :在层2中，在受试对象中特异性成分的阳性率
[0173]
[0174] 表8突出了层2中多变量逻辑回归的估值。使用SLE和非SLE受试对象（排除了 正常的健康个体）来计算估值。
[0175] 表8:逻辑回归估值
[0176]
[0177]与逻辑回归模型的输出相应的指数方程式如下：
[0178] 层1阴性患者中的方程式1指数方程式
[0179]
[0180]ANA成分:化果ANA<20个单位；ANA成分受影响的值为0 ;如果ANA为中阳性（ANA 为20-60个单位），则ANA成分受影响的值为1.如果ANA为强阳性60个单位），则ANA 成分受影响的值为2 ;
[01則特择忡成分（Spec.Comp):如果特异性成分的所有标志物部分（抗MCV〉70个单 位；SS-B/La〉10个单位；CENP〉10个单位；Scl-70〉10个单位；或者化-D10个单位）低于它 们各自的临界值，则输入结果为0 ;相反，如果特异性成分的任何标志物高于它们各自的临 界值，则输入结果为1。Log相当于EC4d和BC4d的净MFI的自然对数。
[0182] 指数计算的实例示于表9中。
[0183] 表9:指数计算
[0184]
[0186] 在其他疾病中，指数得分为-1.74(中值）（IQ范围：-2. 54. ;-0.90)，在SLE中指数 得分为0. 47 (中值）（IQ范围：-〇. 64 ; 1. 79)(图2)。在NHV中，指数得分为-1. 46 (中值） (IQ范围：-1. 17 ;-1.86)，表10突出了在SLE和对照组（非SLE和NHV)中观察到的中值指 数。敏