一种抗肝肾微粒体1抗体检测试剂盒及检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及磁微粒化学发光免疫诊断技术领域，特别是涉及一种抗肝肾微粒体1 抗体检测试剂盒及检测方法。
【背景技术】
[0002] 近年来，国内外对于自身免疫性肝病的研究越来越深入，并且进展迅速，涉及到发 病机理、临床诊断、临床治疗、预后、遗传、以及相关自身抗体及靶抗原的研究。
[0003] 肝肾微粒体（Liver-kidneymicrosomal,LKM)自身抗体和肝脏炎症疾病有关， LKM自身抗体与自身免疫型慢性活动性肝炎有关，也称为LKM-1自身抗体。LKM-1是一种分 子量为50KDa的蛋白，最先被发现于鼠肝中，作为细胞色素P450dbl。近来研究报道表明， 三种P450细胞色素(I:A2,IID6和IIC9)可以作为肝炎疾病的自身抗原。三种细胞色素均 属于药物代谢酶，可以被自身抗体识别。
[0004] 类似LKM-ι类循环抗体目前已成为检测和诊断自免肝的一类重要靶标，对于自免 肝类疾病的诊断变得越来越重要，治疗方式更多的是通过免疫抑制进行，而病毒诱导的肝 炎往往是通过注射干扰素进行治疗。因此，区分病毒诱导性肝炎和自身免疫肝炎，对于疾病 的治疗十分重要。研究报道，感染病毒性肝炎患者，往往伴随有自身免疫肝炎的发生，因此 在进行干扰素治疗前，进行自身免肝诊断是十分有必要的。
[0005] 目前报道的关于检测LKM-1自身抗体的方法主要有间接荧光抗体（IFA)技术、放 射免疫技术（RIA)、电子显微免疫印迹分析技术、酶联免疫分析(ELSIA)。传统的酶联免疫 包含LKM阳性参考血清IgG碎片纯化、IgG碎片固相化包被、以及样本反应阶段。
[0006] 然而，对于此病的检测，这些方法都存在着不足之处： 一、间接免疫荧光法 该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后，继用间接荧光抗体，与前 面的抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光 情况来确定所检测的抗原。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体增多， 发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的： (1)运用此法可能出现假阳性。
[0007] (2)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别。
[0008] (3)操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也 不太适用于标本量较多的实验室。
[0009] (4)荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。
[0010](5)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足。
[0011] 二、酶联免疫吸附法 ELISA检测抗LKM-1抗体，简便易行，特异性高，与间接免疫荧光法联合检测，可为临床 对PBC的诊断和治疗提供更为客观的实验依据。但与其他生物检测或免疫检测比较，这种 ELISA检测方法、技术、工具或产品仍有较多的不足而使其应用受限，这些不足主要包括以 下几个方面： (1)检测试剂在检测过程中为开放方式，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检 测结果。
[0012] (2)ELISA方法多采用辣根过氧化物酶进行检测，其检测范围和灵敏度都较低。
[0013] (3)ELISA方法的检测时间通常反应是一件较长，完成一个测试所需的总时间一般 在2个小时以上，不能完全满足临床上的快速诊断的需求。
[0014] (4)ELISA方法不能随机进样检测，检测结果存在滞后性。
【发明内容】
[0015] 本发明主要解决的技术问题是提供一种抗肝肾微粒体1抗体检测试剂盒及检测 方法，具有稳定性好，灵敏度高，重复性好等优点。
[0016] 为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种抗肝肾微粒体1 抗体检测试剂盒，包括生物素化LKM-1抗原、校准品、质控品、AP-抗人IgG抗体、磁微粒试 剂、化学发光底物和清洗液，所述生物素化LKM-1抗原为偶联有生物素的LKM-1抗原，所述 AP-抗人IgG抗体是AP标记的抗人IgG抗体，所述磁微粒试剂是表面有亲和素SA基团的纳 米磁微粒悬浮液。
[0017] 在本发明一个较佳实施例中，所述生物素化LKM-1抗原是生物素与LKM-1抗原分 子表面的-NH2基团反应得到的。
[0018] 在本发明一个较佳实施例中，所述校准品是由含抗LKM-1抗体的人血清配制而 成，用于得到校准曲线；所述质控品是由含抗LKM-1抗体的人血清配制而成。
[0019] 在本发明一个较佳实施例中，所述磁微粒试剂中磁微粒的直径为0. 1-0. 5μπι，所 述磁微粒具有超顺磁性。
[0020] 在本发明一个较佳实施例中，所述化学发光底物中包括3- (2-螺旋金刚烷）-4-甲 氧基-4-(3_憐氧醜）-苯基_1，2_二氧环乙烧二纳盐AMPFO。
[0021] 提供一种用抗肝肾微粒体1抗体试剂盒进行检测的方法，包括步骤为：将样本与 磁微粒试剂、生物素化LKM-1抗原混匀得到第一复合物，对所述第一复合物进行洗涤，再加 入ΑΡ-抗人IgG抗体混匀，得到第二复合物，对所述第二复合物进行洗涤，再加入化学发光 底物，测定发光结果。
[0022] 在本发明一个较佳实施例中，所述方法包括步骤为：将样本与磁微粒试剂、生物素 化LKM-1抗原混匀，在37°C下孵育15min，得到第一复合物，对所述第一复合物洗涤3次，再 加入AP-抗人IgG抗体，混匀并在37°C下孵育15min，得到第二复合物，对所述第二复合物 洗涤3次，再加入化学发光底物，混匀并在37°C下孵育5min，测定发光结果。
[0023] 本发明的有益效果是：本发明的抗肝肾微粒体1抗体检测试剂盒及检测方法，采 用全自动磁微粒化学发光检测方法，选取碱性磷酸酶AP-金刚烷AMPH)体系，具有稳定性 好、灵敏度高、重复性好等优点。同时大大缩短了检测时间，完成一个测试所需的总时间近 在50分钟以内，而且操作简易方便，真正实现了检测全自动化。
【附图说明】
[0024] 为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使 用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于 本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它 的附图，其中： 图1是本发明抗肝肾微粒体1抗体检测试剂盒进行全自动化学发光检测的原理图； 图2是本发明抗肝肾微粒体1抗体检测试剂盒的实际检测浓度与理论浓度的线性回 归图。
【具体实施方式】
[0025] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施 例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范 围。
[0026] 实施例一： 提供一种抗肝肾微粒体1抗体检测试剂盒，包括生物素化LKM-1抗原（R1)、校准品、 质控品、AP-抗人IgG抗体（R2)、磁微粒试剂（M)、化学发光底物和清洗液。所