一种亚铁氧化酶诊断试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生化分析技术领域，具体是涉及一种亚铁氧化酶诊断试剂盒。
【背景技术】
[0002] 亚铁氧化酶是一种由肝脏合成的一种蛋白，研究认为它主要作用是催化二价铁成 为三价铁，利用铁掺入铁转运蛋白，促进铁的运输。亚铁氧化酶是生物源胺类氧化酶及铜的 载体。同时亚铁氧化酶为急性时相反应蛋白，发生感染、炎症时血浆亚铁氧化酶水平明显升 高；高危妊娠时亚铁氧化酶增高更为明显，其测定也用于高危妊娠的监测。亚铁氧化酶的另 一作用，即它的抗氧化作用已越来越受到人们的重视。
[0003] Wilson病又称肝豆状核变性病，是一种常染色体隐性遗传病，此种病人血清中CP 活性大大降低，且铜的吸收高于正常，导致铜在体内堆积，并主要沉积于肝、肾、大脑基底等 部位，导致一系列临床症状。血液中的亚铁氧化酶浓度是肝豆状核变性病诊断的重要指标 之一，测定血液中的酶浓度对于诊断Wilson病具有重要意义。
[0004] 目前，亚铁氧化酶的诊断方法主要有酶催化法和免疫法。酶催化法对亚铁氧化酶 是非专一的，游离的亚铁离子也会对结果产生影响，造成结果存在误差；免疫法，测试快速， 准确率较高，但是需要大量的血清且对纯度要求较高，成本较高。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是克服现有技术不足，提供一种快速，准确的亚铁氧化酶诊断试剂 盒。
[0006] 发明的具体方案：
[0007] -种亚铁氧化酶诊断试剂盒，包含的组分及各组分百分含量如下：
[0008]
[0009]
[0010] 一种亚铁氧化酶诊断试剂盒，诊断方法包括如下步骤：
[0011] (1)依次移取醋酸钠溶液，N，N-二甲基对苯二胺-盐酸盐试管中，加入1/2的灭菌 精制水溶解，混匀；
[0012] (2)将被测试样、硫脲和Fe(NH4)2(S04)2 · 6H20,加入到试管中，加入另外1/2灭菌 精制水，溶解，在37°C水浴锅中温育15min。
[0013] (3)在分光光度计上，测定490nm处的散射强度Q，空白对照为L。，ΔL=LfL。得 出同步散射值，绘制标准曲线。
[0014] (4)根据标准曲线，得出被测亚铁氧化酶的浓度，所述的标准曲线线性范围为： 0· 01-1. 56U/L相关系数彡 0· 99。
[0015] 所述醋酸钠溶液浓度为0· 2mol/L〇
[0016] 本发明的有益效果：一种亚铁氧化酶诊断试剂盒是基于对胺类化合物对于二价铁 离子具有氧化作用的特性，建立了以二价铁、联苯胺、对苯二胺等为底物的生化测定方法， 反应时间短，显色稳定，本发明诊断亚铁氧化酶简便、快速、重复性好，符合了全自动生化分 析仪和分光光度计手工法操作的要求，提高了检测的精密度。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于本说明而不 用于限制发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明的讲授的内容之后，本领域技术人员可 以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所依附权利要求书所限定的 范围。
[0018] 主要仪器：
[0019] 5ml刻度试管；可加10~100μ1的移液管；500ml容量瓶；pH计；分光光度计
[0020] 具体诊断步骤如下：
[0021] (1)按照如下实施例中各物质的比例依次移取醋酸钠溶液，N，N-二甲基对苯二 胺-盐酸盐试管中，加入1/2的灭菌精制水溶解，混匀；
[0022] (2)将被测血清试样、硫脲和Fe(NH4) 2 (S04) 2 ·6Η20加入到试管中，加入另外1/2灭 菌精制水，溶解，在37°C水浴锅中温育15min。
[0023] (3)在分光光度计上，测定490nm处的散射强度Q，空白对照为L。，ΔL=LfL。得 出同步散射值，绘制标准曲线。
[0024] (4)根据标准曲线，得出被测亚铁氧化酶的浓度，所述的标准曲线线性范围为： 0· 01-L56U/L，相关系数彡（λ99。
[0025] 具体实施例：
[0026] 实施例1
[0027]
[0028] 亚铁氧化酶检测结果为：195U/L。
[0029] 实施例2
[0030]
[0031] 亚铁氧化酶检测结果为：208U/L。
[0032] 实施例3
[0033]
[0034]
[0035] 亚铁氧化酶检测结果为：290U/L。
[0036] 实施例4
[0037]
[0038] 亚铁氧化酶检测结果为：305U/L。
[0039] 实施例5
[0040]
[0041] 亚铁氧化酶检测结果为：340U/L。
[0042] 从医院取得5份被测血清试样，按照上述步骤测试，测试所得结果分别为：235、 303、333、403、403、4171]/1，与正常人血清亚铁氧化酶172-3261]/1符合；在置信水平为95% 时，用本试剂盒测定血清中的亚铁氧化酶与免疫比浊法的测定结果吻合。
【主权项】
1. 一种亚铁氧化酶诊断试剂盒，其特征在于：包含的组分及各组分的质量百分比如 下：2. 根据权利要求1所述的一种亚铁氧化酶诊断试剂盒，其特征是：诊断方法包括如下 步骤： (1)依次移取醋酸钠溶液，N，N-二甲基对苯二胺-盐酸于盐试管中，加入1/2的灭菌精 制水溶解，混匀； ⑵将被测试样、硫脲和Fe(NH4)2(SO4)2 · 6H20,加入到试管中，加入另外1/2灭菌精制 水，溶解，在37°C水浴锅中温育15min。 (3) 在分光光度计上，测定490nm处的散射强度L1，空白对照为L。，Δ L = L1-Lq得出同 步散射值，绘制标准曲线。 (4) 根据标准曲线，得出被测亚铁氧化酶的浓度，所述的标准曲线线性范围为： 0· Ol-L 56U/L 相关系数彡 0· 99。3. 根据权利要求1或2所述的一种亚铁氧化酶诊断试剂盒，其特征是：所述醋酸钠溶 液浓度为〇· 2mol/L〇
【专利摘要】本发明属于生化分析技术领域，公开了一种亚铁氧化酶诊断试剂盒，包含的组分及各组分的质量百分比如下：醋酸钠溶液0.3％～1％、N，N-二甲基对苯二胺-盐酸盐0.05％～5％、冰醋酸3.4％～11％、硫脲0.5％～1.1％、Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O0.31％～3％、灭菌精制水87％～92％。本试剂盒是基于对胺类化合物对于二价铁离子具有氧化作用的特性，建立了以二价铁、对苯二胺等为底物的生化测定方法，诊断亚铁氧化酶简便、快速、重复性好，适于自动化分析。
【IPC分类】G01N21/31
【公开号】CN105424626
【申请号】CN201510791500
【发明人】李彬先, 王丹峰, 关晓辉, 王守岗, 马靖, 王玉辉, 董理
【申请人】李彬先
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年11月18日