nm)。
[0104] 进样体积:20yL。
[0105] 取杂质A对照品适量，用溶剂溶解，配制成每lmL约含0.5yg的杂质A对照品溶液。
[0106] 取杂质B对照品适量，用溶剂溶解，配制成每lmL约含10yg的杂质B对照品溶液。
[0107] 取杂质C对照品适量，用溶剂溶解，配制成每lmL约含20yg的杂质C对照品溶液。 [0108]取替格瑞洛样品适量，用溶剂溶解，配制成每lmL约含20yg的供试品溶液。
[0109] 取替格瑞洛和杂质A、杂质B、杂质C对照品溶液适量，加溶剂稀释至每lml含各成分 〇.5yg的混合溶液。
[0110] 测定法:取上述溶液20yL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如图11~17所示。
[0111] 图11为对比试验2色谱条件下杂质A对照品溶液的HPLC图，杂质A的保留时间为 12.500min〇
[0112] 图12为对比试验2色谱条件下杂质B对照品溶液的HPLC图，杂质B的保留时间为 9.796min〇
[0113] 图13为对比试验2色谱条件下杂质C对照品溶液的HPLC图，杂质C的保留时间为 11.189min〇
[0114] 图14为对比试验2色谱条件下替格瑞洛供试品溶液的HPLC图，替格瑞洛峰保留时 间为9 · 415min。
[0115] 图15为对比试验2色谱条件下混合溶液的HPLC图，杂质C保留时间为11.224min，杂 质A保留时间为12.519min，分离度较好，但是替格瑞洛和杂质B的色谱峰几乎完全重合，不 能准确检测杂质B。
[0116] 对比试验3:
[0117] 色谱柱：CHIRALPAiCAD-H，4.6mmX250mm，5μηι;
[0118] 流动相:正己烷-乙醇(85:15)
[0119] 溶剂:流动相
[0120] 柱温：30°C ;流速：1 · Oml/min; UV检测器(检测波长242nm)。
[0121] 进样体积:20yL。
[0122] 取杂质A对照品适量，用溶剂溶解，配制成每lmL约含25yg的杂质A对照品溶液。
[0123] 取杂质B对照品适量，用溶剂溶解，配制成每lmL约含50yg的杂质B对照品溶液。
[0124] 取杂质C对照品适量，用溶剂溶解，配制成每lmL约含5yg的杂质C对照品溶液。
[0125] 取杂质A、杂质B、杂质C对照品溶液适量，加溶剂稀释至每lml含各杂质0.5yg的混 合杂质溶液。
[0126] 取替格瑞洛样品适量，用溶剂溶解，配制成每lmL约含0.5mg的供试品溶液。
[0127] 取替格瑞洛和杂质A、杂质B、杂质C对照品溶液适量，加溶剂稀释至每lml含各杂质 0.5yg，替格瑞洛0.5mg的混合溶液。
[0128] 测定法:取上述溶液20yL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如图16~21所示。
[0129] 图16为对比试验3色谱条件下杂质A对照品溶液的HPLC图，杂质A的保留时间为 32.182min〇
[0130] 图17为对比试验3色谱条件下杂质B对照品溶液的HPLC图，杂质B的保留时间为 21.799min〇
[0131] 图18为对比试验3色谱条件下杂质C对照品溶液的HPLC图，杂质C的保留时间为 27.382min〇
[0132] 图19为对比试验3色谱条件下替格瑞洛供试品溶液的HPLC图，替格瑞洛峰保留时 间为19.806min。
[0133] 图2 0为对比试验3色谱条件下混合杂质溶液的ΗPLC图，杂质B保留时间为 22.099min，杂质C保留时间为27.480min，杂质Α保留时间为32.733min。
[0134] 图21为对比试验3色谱条件下供试品和杂质混合溶液的HPLC图，杂质C保留时间为 27.392min，杂质A保留时间为32.541min，分离度较好，但是替格瑞洛主峰拖尾处将杂质B的 色谱峰掩盖了。因此，对比试验3的方法也不能准确检测杂质B。
[0135] 为了进一步说明本发明的有益效果，本发明提供以下试验例。
[0136] 试验例1、本发明检测方法的方法学研究 [0137]本试验例中各种试验均采用如下条件：
[0138] 色谱柱：CHmALMK? AD-H，4 · 6mm X 250mm，5μπι;
[0139] 流动相:正己烷-乙醇(90:10)，乙醇中加入0.1%~0.5%的二乙胺
[0140] 溶剂:流动相
[0141] 柱温：30°C ;流速：1.0ml/min; UV检测器(检测波长242nm)。
[0142] 进样体积:20yL。
[0143] 1、检测波长
[0144] 取替格瑞洛，用溶剂溶解并稀释制成适宜浓度的溶液，照紫外-可见分光光度法 (中国药典2010年版二部附录IVA)在200~400nm范围内进行光谱扫描，紫外光谱图如图22 所示。
[0145] 结果显示，替格瑞洛在200~300nm均有吸收，杂质A、杂质B和杂质C均为替格瑞洛 的手性异构体，其紫外光谱图无区别，因此选择在200~300nm范围内选择测定波长，而替格 瑞洛在242nm波长处检测，基线噪音较小，其他杂质对杂质A、杂质B和杂质C无干扰，因此，最 终选择242nm作为替格瑞洛手性异构体检测的检测波长。
[0146] 2、专属性试验
[0147] 取替格瑞洛适量，用乙醇溶解后，加流动相稀释制成每lmL中约含0.5mg的溶液，作 为供试品溶液。另取替格瑞洛中杂质A、杂质B、杂质C适量，杂质对照品溶液，另取杂质对照 品溶液混合，用流动相稀释配制混合杂质溶液。分别精密取上述混合杂质对照品溶液、供试 品溶液及溶剂各20yL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果如图1~6所示。
[0148] 结果表明，在本发明检测方法的条件下，替格瑞洛样品及替格瑞洛中其余杂质对 杂质A、杂质B、杂质C的测定无干扰，证明本发明检测方法的专属性强。
[0149] 3、标准曲线和线性范围
[0150] 精密量取杂质A、杂质B、杂质C对照品溶液适量，用流动相稀释制成一系列浓度的 对照品溶液。分别精密取不同浓度的对照品溶液各20yL，注入液相色谱仪，记录色谱图。分 别测定峰面积，结果见表1。
[0151] 表1、线性关系
[0152]
[0153] 以杂质对照品溶液的浓度为横坐标X，以其峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，计算 杂质（lR，2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的线性回归方程及相关系数r，标准曲线如图25所 不。
[0154] 结果表明，本发明检测方法中杂质A的浓度在0.275yg/mL~2.204yg/mL范围内与 峰面积呈良好的线性关系，线性方程:Y = 22540.6837X-2199.8432，r = 0.9994;杂质B的浓 度在0.268yg/mL~2. 145yg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，线性方程：Y = 25575.0896Χ-1514.7421，r = 0.9996;杂质C的浓度在0.254yg/mL~2.034yg/mL范围内与峰 面积呈良好的线性关系，线性方程:Y = 26287.5744X-1548.7861，r = 0.9995，证明本发明方 法线性范围广，准确度高。
[0155] 此外，从标准曲线方程和图可以看出，斜率远远大于截距，标准曲线接近原点，说 明各杂质的含量测定适合于本发明的外标一点法。
[0156] 4、精密度试验
[0157] 取试验例1第3项下的混合杂质对照品溶液3#，精密取20yL，注入高效液相色谱仪， 连续进样6次，按照本发明的检测方法分别测定峰面积，结果见表2。
[0158] 表2、精密度试验结果
[0159]
[0160] 计算得到杂质A峰面积的RSD为：1.45%，杂质B峰面积的RSD为:2.54%，杂质C峰面 积的RSD为:2.26%，证明本发明的检测方法精密度优异。
[0161] 5、定量限
[0162] 量取试验例第3项下混合杂质对照品溶液6#适量，加流动相稀释，精密量取20μ1， 注入液相色谱仪，按照本发明的