检测方法测定峰面积及基线噪音，结果见表3。
[0163] 表3、定量限试验结果
[0165] 杂质Α、杂质Β和杂质C的峰高均约为基线噪音的10倍，按信噪比S/N=10计，得杂质 A的定量限为2.76ng，杂质B的定量限为2.68ng，杂质C的定量限为2.54ng，证明本发明方法 的检测灵敏度高，可以充分满足杂质定量测定的要求。
[0166] 6、重复性试验
[0167] 精密称取替格瑞洛6份，各约10mg，分别置20mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度， 得供试品溶液。精密量取上述6份供试品溶液各20yL，按照本发明的检测方法进行检测，按 外标法以峰面积计算杂质A、杂质B和杂质C的含量，结果见表4。
[0168] 表4、重复性试验结果
[0170] 由上述结果可知，本发明检测方法的重复性良好。
[0171] 7、溶液稳定性试验
[0172] 精密称取替格瑞洛lOlmg，置20mL量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，得供试品溶 液。分别于配制后Oh、lh、2h、4h、6h、8h进样20yL，记录色谱图，考察其供试品溶液中杂质A、 杂质B和杂质C的稳定性情况，结果见表5。
[0173] 表5、供试品溶液稳定性试验结果表
[0175] 由上述结果可知，在配制后8小时内供试品溶液中杂质A、杂质B均未检出，杂质C检 出结果无明显变化，证明本发明检测方法供试品溶液稳定。
[0176] 8、回收率试验
[0177] 精密称取替格瑞洛9份，各约10mg，分别置20mL量瓶中，加入试验例第3项下各杂质 浓度约为20yg/mL的对照品溶液0.5mL、1. OmL、2. OmL各3份，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇 匀，分别作为回收率供试品溶液。分别精密取9份回收率供试品溶液及试验例第4项下的对 照品溶液各20yL进样测定，记录色谱图，计算杂质A、杂质B和杂质C的测得量、对照品加入量 及回收率，结果见表6~8。
[0178] 计算公式：
[0180]式中:a为供试品中所含异构体杂质的量(yg);
[0181 ] b为异构体杂质对照品加入量(yg);
[0182] c为异构体杂质的测得量(yg)。
[0183] 表6、杂质A回收率试验结果
[0184]
[0185] 结果表明，本发明检测方法测定替格瑞洛中的手性异构体杂质A，回收率在 100.6%~106.0%之间，相对标准偏差为1.75%，证明本发明的检测方法回收率好，准确度 尚。
[0186] 表7、杂质B回收率试验结果
[0187]
[0188] 结果表明，本发明检测方法测定替格瑞洛中的手性异构体杂质B，回收率在98.9% ~103.6 %之间，相对标准偏差为1.90 %，证明本发明的检测方法回收率好，准确度高。
[0189] 表8、杂质C回收率试验结果
[0190]
[0191] 结果表明，本发明检测方法测定替格瑞洛中的手性异构体杂质C，回收率在98.4% ~103.0 %之间，相对标准偏差为1.74 %，证明本发明的检测方法回收率好，准确度高。
[0192] 综上所述，本发明提供了一种替格瑞洛中异构体杂质含量的新检测方法，各色谱 峰之间的分离度高，相互之间无干扰，可以同时实现对杂质B和杂质A、杂质C的准确检测，而 且，操作简便，容易控制，检测成本低，并具有良好的线性关系、专属性、精密度、稳定性、灵 敏度和重复性，加样回收率高，检测结果准确、可靠，为监控替格瑞洛药物中异构体杂质的 含量提供了一种行之有效的检测方法，进一步保证了替格瑞洛的产品质量和患者的用药安 全。
【主权项】
1. 一种替格瑞洛中异构体杂质含量的检测方法，其特征在于:它包括W下步骤： a、 取异构体杂质的对照品，制备对照品溶液； b、 取待检的替格瑞洛样品，制备供试品溶液； C、采用高效液相色谱方法分别对对照品溶液、供试品溶液进行检测，所述高效液相色 谱方法的检测条件为： 色谱柱：固定相为直链淀粉-Ξ(3，5-二甲苯基氨基甲酸醋）； 流动相:正己烧-乙醇，正己烧与乙醇的体积比为88% : 12%~92% :8%，所述的乙醇中 含有 0.1%~0.5%1111/1111的二乙胺； 检测波长:200nm~300nm; d、按外标法W峰面积计算，或者根据峰面积与浓度之间的标准曲线计算，得到替格瑞 洛样品中的异构体杂质含量。2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述的异构体杂质至少包括（1R，2R， 35,51〇-3-[7-{[(11?，25)-2-(3,4-二氣苯基)环丙基]氨基}-5-丙硫基-3护1，2,3-^挫[4， 5-d]喀晚-3-基]-5-(2-?乙氧基)环戊烧-1,2-二醇。3. 根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于:所述的异构体杂质至少包括（1R，2R， 35,51〇-3-[7-{[(11?，25)-2-(3,4-二氣苯基)环丙基]氨基}-5-丙硫基-3护1，2,3-^挫[4， 5-d]喀晚-3-基]-5-(2-? 乙氧基)环戊烧-1,2-二醇和（lR，2R，3S，5R)-3-[7-{[(lS，2R)-2- (3,4-二氣苯基)环丙基]氨基}-5-丙硫基-3护1，2,3-^挫[4,5-(1]喀晚-3-基]-5-(2-径乙 氧基)环戊烧-1,2-二醇； 优选的，所述的异构体杂质同时包括（13,21?，35,51〇-3-[7-{[(11?，25)-2-(3,4-二氣苯 基)环丙基]氨基}-5-丙硫基-3Η-1，2,3-Ξ挫[4,5-d]喀晚-3-基]-5-(2-?乙氧基)环戊烧- 1,2-二醇、（1R, 2R, 3S, 5R)-3-[7-{ [ (1S, 2R)-2-(3,4-二氣苯基)环丙基]氨基}-5-丙硫基- 抓-1，2,3-^挫[4,5-(1]喀晚-3-基]-5-(2-径乙氧基)环戊烧-1，2-二醇和（15,25,31?，55)- 3-[7-{[(lS，2R)-2-(3,4-二氣苯基)环丙基]氨基}-5-丙硫基-3Η-1，2,3-Ξ 挫[4,5-d]喀 晚-3-基]-5-(2-?乙氧基)环戊烧-1,2-二醇。4. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:步骤a中，制备对照品溶液的溶剂为步 骤C中的流动相;步骤b中，制备供试品溶液的溶剂为步骤C中的流动相。5. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤C中，所述的色谱柱为 CΗIR A LPAKI''' AD-H，长度为250mm，内径为4.6mm，填料的粒径为如m。6. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:步骤C中，所述色谱柱的柱溫为25°C~ 35 °C。7. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤C中，正己烧与乙醇的体积比为 90%:10%;所述的乙醇中含有0.2%1111/1111的二乙胺。8. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:步骤C中，所述流动相的流速为0.9ml/ min~1. Iml/min;优选的，所述流动相的流速为1 .Oml/min。9. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤C中，所述的检测波长为230nm~ 250nm;优选的，所述的检测波长为242nm。10. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:步骤C中，进样体积为10μ1~50μ1;优 选的，进样体积为20μ1。
【专利摘要】本发明公开了一种替格瑞洛中异构体杂质含量的检测方法，它包括以下步骤：a、制备对照品溶液；b、制备供试品溶液；c、采用高效液相色谱方法分别对对照品溶液、供试品溶液进行检测；d、按外标法以峰面积计算，或者根据峰面积与浓度之间的标准曲线计算，得到替格瑞洛样品中的异构体杂质含量。本发明提供了一种替格瑞洛中异构体杂质含量的新检测方法，各色谱峰之间的分离度高，相互之间无干扰，可以同时实现对杂质B和杂质A、杂质C的准确检测，为监控替格瑞洛药物中异构体杂质的含量提供了一种行之有效的检测方法，进一步保证了替格瑞洛的产品质量和患者的用药安全。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105699524
【申请号】CN201610070436
【发明人】刘霞, 苟芬
【申请人】成都百裕制药股份有限公司
【公开日】2016年6月22日
【申请日】2016年1月29日